發(fā)布時(shí)間：2020-11-12 15:04

　　 柑橘綠霉病是引起柑橘產(chǎn)后損失的主要病害之一,每年對(duì)我國(guó)的柑橘產(chǎn)業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。由于化學(xué)殺菌劑的大量使用,導(dǎo)致指狀青霉產(chǎn)生抗藥性,導(dǎo)致防控效果減弱,植物源天然活性物質(zhì)可克服上述缺陷,具備應(yīng)用于果蔬采后病害防控的潛力。安托芬是一種植物源生物堿,廣泛存在于蘿藦科植物例如白薇中,可抑制多種病原真菌、細(xì)菌的生長(zhǎng),本研究擬分析安托芬對(duì)指狀青霉抑霉唑敏感菌株P(guān)ds01和抑霉唑抗性菌株P(guān)dw03的抑制效果,比較安托芬對(duì)兩種菌株抑菌機(jī)理的差異,為柑橘采后病害控制提供理論依據(jù),主要研究結(jié)果如下:(1)安托芬對(duì)柑橘綠霉病的抑制作用探究安托芬處理對(duì)指狀青霉Pds01、Pdw03菌株均有較好的抑制效果,對(duì)指狀青霉Pds01、Pdw03菌株的最小抑菌濃度(Minimum Inhibitory Concentration,MIC)均為1.5625μg/mL,最小殺菌濃度(Minimum Fungicidal Concentration,MFC)均為12.5μg/mL。柑橘活體實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,1×、10×MFC安托芬浸泡處理均可有效降低由指狀青霉Pds01、Pdw03菌株引起的綠霉病發(fā)病率。接種指狀青霉Pds01菌株的對(duì)照組果實(shí)腐爛率為100%時(shí),1×、10×MFC安托芬處理組的果實(shí)發(fā)病率分別為91±4%和27±1%;接種指狀青霉Pdw03菌株的對(duì)照組果實(shí)腐爛率達(dá)100±0%時(shí),1×、10×MFC安托芬處理組的果實(shí)發(fā)病率分別為93±0%、和11±4%。掃描電鏡(SEM)結(jié)果顯示,1/2 MIC、MIC安托芬處理120 min后,指狀青霉Pds01、Pdw03菌株菌絲體表面出現(xiàn)粗糙,褶皺,甚至破損現(xiàn)象。(2)安托芬對(duì)指狀青霉Pds01、Pdw03菌株抑菌機(jī)理的探究CFW細(xì)胞壁熒光染色實(shí)驗(yàn)顯示,安托芬未損傷指狀青霉Pds01菌株的細(xì)胞壁;PI染色實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明安托芬處理破壞指狀青霉Pds01菌株的細(xì)胞膜;處理30 min時(shí),菌絲體的膜結(jié)構(gòu)物質(zhì)脂質(zhì)和麥角固醇含量降低,暗示細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)受損;但菌絲體胞內(nèi)丙二醛(MDA)、活性氧(ROS)的含量不變,表明安托芬不能誘導(dǎo)指狀青霉Pds01發(fā)生膜脂過氧化反應(yīng);安托芬處理導(dǎo)致指狀青霉Pds01菌株的線粒體膜電位(MMP)降低,暗示此時(shí)線粒體功能已受損;此外,30 min時(shí),1/2 MIC和MIC安托芬處理組的胞內(nèi)ATP含量均為2.39±0.13μg/g,顯著低于對(duì)照組5.22±0.45μg/g(P0.05),說明安托芬處理導(dǎo)致指狀青霉Pds01菌株的能量代謝失衡;安托芬處理組的溶解氧下降速率減緩表明菌絲體的呼吸代謝受到抑制。與三種典型抑制劑的疊加率表明,安托芬可能影響指狀青霉Pds01菌株的三羧酸循環(huán)途徑;進(jìn)一步探究發(fā)現(xiàn)細(xì)胞膜損傷發(fā)生在30 min之后而線粒體膜損傷發(fā)生在20 min,說明細(xì)胞膜的損傷晚于線粒體膜損傷。CFW細(xì)胞壁熒光染色實(shí)驗(yàn)證明安托芬未損傷指狀青霉Pdw03菌株的細(xì)胞壁;PI染色實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明安托芬處理破壞指狀青霉Pdw03菌株的細(xì)胞膜;而處理30min時(shí),菌絲體的膜結(jié)構(gòu)物質(zhì)脂質(zhì)含量降低而麥角固醇含量不變,說明可能麥角固醇合成途徑不受損;但菌絲體胞內(nèi)丙二醛(MDA)、活性氧(ROS)的含量急劇增加,表明安托芬誘導(dǎo)指狀青霉Pdw0發(fā)生膜脂過氧化反應(yīng);安托芬處理30min后,指狀青霉Pdw03菌株的線粒體膜電位(MMP)降低,表明此時(shí)線粒體功能已受損;且安托芬處理組胞內(nèi)ATP含量降低,總能荷降低,說明安托芬處理導(dǎo)致指狀青霉Pdw03菌株能量代謝失衡;進(jìn)一步探究發(fā)現(xiàn)細(xì)胞膜損傷發(fā)生在20 min時(shí),而線粒體膜損傷發(fā)生在30 min后,說明細(xì)胞膜的損傷早于線粒體膜損傷。綜上所述,安托芬對(duì)指狀青霉Pds01和Pdw03菌株均有很好的抑制作用,但抑菌機(jī)理有差異。指狀青霉Pds01菌株的線粒體膜損傷在前,細(xì)胞膜損傷在后,而Pdw03菌株相反。本研究可為柑橘采后綠霉病的防控提供理論依據(jù)。
【學(xué)位單位】：湘潭大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：S436.66;S476
【部分圖文】：

2圖 1-2 指狀青霉 Pds01 菌落形態(tài)的防治主要采用化學(xué)防治。抑霉唑-脫甲基酶抑制劑類殺菌劑，通過特的活性發(fā)揮抑菌作用。但是，由于化。前人的研究表明，指狀青霉對(duì) 3 種：（1）IMZ-R1 型，其 CYP51復(fù)插入突變[10]；（2）IMZ-R2 型，變[11]；（3）IMZ-R3 型，其 CYP51B

圖 1-2 指狀青霉 Pdw03 菌落形態(tài)控措施采后病害的手段包括三種：化學(xué)防制綠霉病最主要的方法，由于化學(xué)多數(shù)國(guó)家廣泛使用。常用的化學(xué)殺并咪唑類、雙胍鹽類和唑類（抑霉用于整果浸泡或者表面噴灑，對(duì)果劑對(duì)人類健康、環(huán)境也會(huì)產(chǎn)生危害環(huán)保的殺菌劑。

圖 2-3 安托芬處理對(duì)接種指狀青霉 Pds01 菌株柑橘果實(shí)綠霉病發(fā)病情況的影響柑橘果實(shí)接種指狀青霉 Pds01 菌株后，安托芬處理對(duì)綠霉病發(fā)病率的影響見表 2-5。結(jié)果表明安托芬能顯著降低柑橘果實(shí)綠霉病的發(fā)病率。對(duì)照組和 1 × MFC安托芬處理組果實(shí)均在第 3 d 開始腐爛，腐爛率分別為 33±4%和 13±4%，而 10 ×MFC 安托芬處理組果實(shí)從第 4 d 開始腐爛，腐爛率為 9±4%。當(dāng)貯藏時(shí)間達(dá)到 5 d時(shí)，對(duì)照組的腐爛率達(dá) 100±0%，且整果腐爛，而 10 × MFC 安托芬處理組的腐爛率僅為 27±1%。表 2-5 安托芬處理對(duì)柑橘果實(shí)綠霉病（指狀青霉 Pds01）發(fā)病率的影響處理方式發(fā)病率（%）貯藏時(shí)間 (d)1 2 3 4 5對(duì)照組 0±0a0±0a33±4a87±2a100±0a
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2 ;腐榕葉中強(qiáng)烈的抗真菌生物堿——安托芬[J];國(guó)外醫(yī)藥(植物藥分冊(cè));1990年05期

3 江慧;;娃兒藤生物堿合成的原料(三環(huán)母體)的制備[J];科技視界;2016年27期

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本文編號(hào)：2880884