發(fā)布時(shí)間：2020-11-19 16:02

　　 枸紀(jì)(Lyc/ium barbarum)是享譽(yù)中外的名貴藥材,目前國內(nèi)外對枸杞的研究主要集中在抗氧化活性、營養(yǎng)成分及其相關(guān)功能產(chǎn)品的研發(fā)上,而對其深色有隔內(nèi)生真菌(Dark septate endophytes,DSE)的研究則報(bào)道較少。本研究從寧夏8個(gè)枸杞品種的根中分離獲得深色有隔內(nèi)生真菌,對其多樣性和侵染特征進(jìn)行研究;以枸杞膠孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)為靶標(biāo)菌,篩選對其具有明顯抑制作用的高活性DSE菌株,探討其抑菌作用機(jī)理;以高活性DSE菌株NQ8GII4為研究對象,研究其培養(yǎng)性狀、侵染定殖方式及定殖后對宿主植物的影響,初步揭示其促生作用的機(jī)制;開展菌株NQ8GII4發(fā)酵液對枸杞、紅棗和葡萄致腐病原真菌的生防作用試驗(yàn),探討其生防應(yīng)用的潛力。研究結(jié)果如下:1、從寧夏枸杞栽培園采集栽培品種寧杞1號(hào)、寧杞3號(hào)、寧杞5號(hào)、寧杞6號(hào)、寧杞7號(hào)、寧杞8號(hào)以及野生品種黃果枸杞和黑果枸杞共8個(gè)枸杞品種的根系,分離DSE菌株,運(yùn)用形態(tài)學(xué)特征、rDNA-ITS序列分析進(jìn)行菌株鑒定,采用回接試驗(yàn)方法確定DSE真菌。結(jié)果表明:DSE在枸杞根系能形成大量“微菌核”典型結(jié)構(gòu)。從8個(gè)枸杞品種根系中共分離獲得DSE菌株279株,分屬于18個(gè)屬,具有豐富的物種多樣性。鐮刀菌屬Fusarium為各品種的共有屬和優(yōu)勢屬,相對頻率最高達(dá)85%。Monosporascus、藍(lán)狀菌屬Talaromyces和俄氏孔菌屬Earliella為枸杞內(nèi)首次報(bào)道的DSE。枸杞不同品種中DSE群落物種多樣性指數(shù)、均勻度指數(shù)和Simpson指數(shù)差異顯著。DSE在枸杞栽培品種及野生品種中具有豐富的生物多樣性,能夠與枸杞根系形成良好的共生關(guān)系,增強(qiáng)了枸杞對生態(tài)環(huán)境的適應(yīng)性。2、通過室內(nèi)抑菌試驗(yàn)和離體試驗(yàn)測定內(nèi)生真菌對膠孢炭疽菌的抑制作用及對枸杞炭疽病的防治效果。結(jié)果表明:鐮刀菌屬Fusarium真菌NQ8GII4、NQ8GII7、NQ7GII4和藍(lán)狀菌屬Talaromyces菌株NQ6GIII11對膠孢炭疽菌有明顯的拮抗作用。平板對峙試驗(yàn)顯示:4株枸杞內(nèi)生真菌具有較強(qiáng)的營養(yǎng)和空間競爭能力,菌株NQ8GII4對病原菌的抑制率高達(dá)93.43%。顯微觀察發(fā)現(xiàn):枸杞內(nèi)生真菌能纏繞并穿透膠孢炭疽菌菌絲,使膠孢炭疽菌菌絲膨脹崩解。菌株NQ7GII4的培養(yǎng)濾液在濃度為15%時(shí)對病原菌菌絲的抑制率達(dá)到70.75%,菌株NQ8GII7產(chǎn)生的揮發(fā)性物質(zhì)對膠孢炭疽菌的抑制率高達(dá)83.44%。離體生防試驗(yàn)結(jié)果表明:用拮抗性內(nèi)生真菌預(yù)先占位接種枸杞嫩果及葉片,能有效抑制枸杞炭疽病的侵入和病斑的擴(kuò)展,菌株NQ8GII4 10%的培養(yǎng)濾液對枸杞炭疽病的防治效果最強(qiáng),防效達(dá)到了92.54%和95.57%,說明枸杞內(nèi)生真菌具有很好的生防潛力和應(yīng)用前景。3、為了解枸杞深色有隔內(nèi)生真菌NQ8GII4菌株在枸杞根系的侵染定殖方式和定殖后對枸杞植株的影響。借助體視顯微鏡、光學(xué)顯微鏡和透射電鏡技術(shù),研究菌株NQ8GII4在枸杞根系的侵染行為。結(jié)果表明:菌株NQ8GII4菌絲侵染枸杞根系24 h時(shí),吸附在根表層,侵染96 h后,定殖在表皮細(xì)胞和外皮層細(xì)胞間;用10%的發(fā)酵液灌根處理枸杞盆栽苗,顯著提高了枸杞植株的株高與鮮重;枸杞植株內(nèi)防御酶活性測定結(jié)果表明:處理組苯丙氨酸解氨酶(PAL)、過氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)防御酶活性顯著高于對照組,是對照組的1.10倍,說明菌株NQ8GII4能夠侵染定殖到枸杞根部后,并與宿主建立互惠共生關(guān)系,促進(jìn)宿主生長。4、為了解菌株NQ8GII4的生長特性及在生產(chǎn)上的應(yīng)用前景。在4種常見培養(yǎng)基上測定了菌株NQ8GII4的菌絲生長量和產(chǎn)孢量,結(jié)果表明:燕麥培養(yǎng)基最適宜該菌菌絲生長和產(chǎn)孢,培養(yǎng)第9 d時(shí)菌絲直徑達(dá)到了 6.47 cm,是對照的1.32倍,產(chǎn)孢量為47.84×105個(gè)/mL,是對照的1.34倍。對枸杞、紅棗和葡萄的致腐病害防治結(jié)果表明:在皿內(nèi)對峙試驗(yàn)中,菌株NQ8GII4對枸杞膠孢炭疽菌C gloeosporioides、棗生鏈格孢Alternaria alternate和灰葡萄孢Botrytiscinerea均有抑制作用,抑菌率為47.00%-65.77%;在離體防效試驗(yàn)中,菌株NQ8GII4發(fā)酵液對枸杞、紅棗和葡萄致腐病原真菌的防效高達(dá)92.54%;在田間防效試驗(yàn)中,菌株NQ8GII4發(fā)酵液對葡萄灰霉病的防效高達(dá)82.05%,與化學(xué)藥劑腐霉利的效果相當(dāng)。說明菌株NQ8GII4培養(yǎng)簡單,原料成本低,生防效果好,可作為微生物源農(nóng)藥研制的出發(fā)菌種。
【學(xué)位單位】：寧夏大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：S435.671;S476
【部分圖文】：

Ｃｏ／／ｅ狀ｒ／ｃ／７ｗｗ的侵染ｕｌｔｕｒｅ?ｔｒａｔｅ?ｏｆ?ｓｔｒａｉｎ?ＮＱ６ＧＩ１１１１；?ｆ，?ｍ，?ｔ：?１０％?ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ；?ｇ，?ｎ，?ｕ：?１０％?ｔｅｂｕｃｏｎａｚｏｌｅ．??表３－６枸杞ＤＳＥ真菌對枸杞葉膠孢炭疸菌的生防效果??ｏｎｔｒｏｌ?ｅｆｆｅｃｔ?ｏｆ?ｄａｒｋ?ｓｅｐｔａｔｅ?ｅｎｄｏｐｈｙｔｅｓ?ｏｆ?Ｌ．ｂａｒｂａｒｕｍ?ｏｎ?Ｃ．ｇｌｏｅｏｓｐｏｒｉｏｉｄｅｓ?ｏｆ?Ｌ．ｂａｒｂ第３?ｄ接膠孢炭疽菌?第５?ｄ接膠同時(shí)接種??Ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ?ｏｆ?Ｃ．ｇｌｏｅｏｓｐｏｒｉｏｉｄｅｓ?Ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ?ｏｆ?Ｃ．ｇｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ?ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ??ｏｎ?ｔｈｅ?ｔｈｉｒｄ?ｄａｙ?ｏｎ?ｔｈｅ?ｆｉｆｔ情指數(shù)?抑制率／％?病情指數(shù)?抑制率／％?病情指數(shù)ｅａｓｅ?Ｉｎｄｅｘ?Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ?ｒａｔｅ?Ｄｉｓｅａｓｅ?Ｉｎｄｅｘ?Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ?ｒａｔｅ?Ｄｉｓｅａｓｅ?Ｉｎｄｅｘ００土０?ａ?—?１００士０?ａ?—?５１．０１?士?１．１０?ａ２６士?１．００?ｃ?９１．６７±０?ａｂ?６．６７±０．９７?ｃｄ?９５．５７土０．９７?ａ?１４．０９士０．９３?ｂ．３３?±０?ｃ?９１．６７?士?１．５２ａｂ?９．３２±１．０１?ｂｅ?９４．３３±０．１９ａｂ?１４．０９?土?１．０５ｂ．３３?±０?ｃ?９０．７４土０．９５?ａｂ?Ｉ１．９８±０．２３ｂ?９１．２０士０?ｂｅ?１３．０５土０．１５?ｂ１．１１?士?０ｂ?８８．８９士?０．７０ｃ?１２．１１±１．９９ｂ?８８．５４±０．２０?ｃ?１２．９０?土?１．９２ｂ６?士?０．９４

?１１．１??４．４．３菌株ＮＱ８ＧＩＩ４對枸杞植株中防御酶活性的影響??由圖４－４可知，將深色有隔內(nèi)生真菌ＮＱ８ＧＩＩ４發(fā)酵液用灌根方式處理枸杞盆栽苗的過程中，??發(fā)酵液處理的不同天數(shù)對枸杞的ＰＯＤ、ＰＡＬ、ＰＰＯ和ＳＯＤ酶的影響不同。內(nèi)生真菌ＮＱ８ＧＩＩ４活??菌發(fā)酵液對枸杞植株ＰＯＤ酶活性起到抑制效果，隨著時(shí)間的推移ＰＯＤ酶活性逐漸降低，但都高??于對照組，在第１５?ｄ時(shí)達(dá)到最低，為８．９７?Ｕ／ｇＦＷ，?ＰＡＬ酶活性隨著發(fā)酵液接種天數(shù)的增加呈現(xiàn)??先增加后減緩的趨勢，且處理組ＰＡＬ酶活性均高于對照組。菌株ＮＱ８ＧＩＩ４發(fā)酵液處理第９?ｄ后??酶活性達(dá)到最大值，為４３．５３?Ｕ／ｇＦＷ，是對照組的１．０８倍。枸杞的ＰＰＯ酶活性隨著發(fā)酵液處理??天數(shù)的增加而呈現(xiàn)先增大后降低的趨勢，酶活性在處理第９?ｄ后達(dá)到最大值，為３７．５?Ｕ／ｇＦＷ，是??對照組的１．１０倍，ＮＱ８ＧＩＩ４發(fā)酵液處理的枸杞ＳＯＤ酶活性普遍低于對照組，在處理第９?ｄ時(shí)ＳＯＤ??酶活性達(dá)到峰值。??，３１?Ａ?ＩＴｎＯＢＧＵ
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本文編號(hào)：2890200