發(fā)布時(shí)間：2020-11-22 01:27

　　 鐵皮石斛(Dendrobium officinale KimuraetMigo)是我國一種名貴的傳統(tǒng)中藥材,因其具有良好的保健功效而備受青睞。目前,由于采挖過度導(dǎo)致野生資源匱乏,絕大部分鐵皮石斛來源于人工栽培。人工栽培過程中,鐵皮石斛常發(fā)生各種病害,白絹病是其中一種常發(fā)病害,直接威脅著鐵皮石斛的產(chǎn)品安全和經(jīng)濟(jì)效益。本論文在對白絹病病原物進(jìn)行了分離、鑒定的基礎(chǔ)上,篩選功能菌株,探索這些菌株對白絹病的防治效應(yīng)及其可能的防治機(jī)制,以為鐵皮石斛白絹病的生物防治和綠色種植提供技術(shù)支持。首先,分離鑒定了鐵皮石斛白絹病的病原菌。結(jié)合傳統(tǒng)分離培養(yǎng)和科赫法則,確定了白絹病的病原菌DQ;通過形態(tài)觀察發(fā)現(xiàn)病原菌DQ可形成白色絹絲狀菌絲,培養(yǎng)至10 d可形成菌核;ITS序列分析表明,病原菌DQ與Atheliarolfsii SR01的相似度最高為100%;系統(tǒng)發(fā)育分析表明,菌株與A rolfsii聚為一簇,因此病原菌DQ被鑒定為阿太羅氏菌A.rolfsii。其次,篩選獲得有效防治鐵皮石斛白絹病的功能菌株。從鐵皮石斛中分離獲得系列內(nèi)生菌(內(nèi)源菌),并與實(shí)驗(yàn)室分離保存的其它藥用植物內(nèi)生菌(外源菌)一同作為供試菌。平板對峙拮抗試驗(yàn)結(jié)果,內(nèi)源菌——優(yōu)勢內(nèi)生菌Sphingomonas ZJSH1對病原菌DQ無抑制活性,內(nèi)源菌株BacillusFHGXJ8、FHJXJ5和XSG14的抑制率為在 60.00-74.50%;外源菌株BacillusB1-6、WZZ-6及Pseudomon s JX3-1和Y11T3-1的抑制率為46.00-65.00%。分析以上單一菌株和混合菌株對鐵皮石斛離體植株和組培苗的抗病性,結(jié)果表明:①單一菌株使用時(shí),內(nèi)源菌株對離體植株的防治效果(0-100.00%)優(yōu)于外源菌株(0-75.00%),但內(nèi)源菌株對組培苗防治效果(0-100.00%)不如外源菌株(50.00-100.00%);②無論對鐵皮石斛離體植株或組培苗,混合菌株的防控效果要明顯優(yōu)于單一菌株。比較發(fā)酵上清液與菌體的防治效果,發(fā)現(xiàn)發(fā)酵上清液對離體植株(0-66.67%)和組培苗(0%)的防治效果均較差;菌體的防治效果較好,分別為16.67-100.00%和66.67-83.33%;發(fā)酵上清液+菌體的防治效果最佳,分別為41.67-100.00%和83.33-100%�？梢�,內(nèi)源菌和外源菌對鐵皮石斛白絹病均有防治效果。最后,初步探究了功能菌株的可能作用機(jī)制。采用特異性PCR擴(kuò)增檢測了8株菌的9種抗生素編碼基因,結(jié)果從5個(gè)菌株中檢測到3種抗生素編碼基因——Iturin A、Surfactin 和 Phenazine。其中菌株 FHGXJ8、FHJXJ5 和 B1-6 含有 Iturin A編碼基因;菌株FHGXJ8和WZZ-6含Surfactin編碼基因;菌株JX3-1、Y11T3-1含有Phenazine基因,這些抗生素編碼基因可能在抗病過程中發(fā)揮功效,但其產(chǎn)物有待確定。進(jìn)一步分析功能菌株的鐵載體、IAA及ACC脫氨酶活性,結(jié)果表明菌株JX3-1和Y11T3-1可分泌鐵載體;8株功能菌均可產(chǎn)生IAA,其中菌株ZJSH1 的 IAA 產(chǎn)量最高(26.20 μg/mL);菌株 JX3-1、Y11T3-1 和 FHJXJ5 具有ACC脫氨酶活性。對比單一菌株與混合菌株的防治效果,抗生素、Fe元素競爭及激素調(diào)節(jié)共同參與拮抗作用,這可能是混合菌拮抗活性增強(qiáng)的重要原因。綜上,本研究以鐵皮石斛白絹病病原菌DQ為對象,研究了鐵皮石斛內(nèi)源菌和外源菌的防治效應(yīng),發(fā)現(xiàn)內(nèi)源菌拮抗效果優(yōu)于外源菌;混合菌株優(yōu)于單一菌株;發(fā)酵上清+菌體防治效果最優(yōu);功能菌株的主要防治機(jī)制有產(chǎn)生抗生素、Fe元素競爭及激素調(diào)節(jié)。這些結(jié)果為后續(xù)深入研究鐵皮石斛的抗病效果及其應(yīng)用研究提供了參考。
【學(xué)位單位】：浙江理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：S435.672
【部分圖文】：

備用。??３．１．２致病性驗(yàn)證??對分離到的真閑ＤＱ進(jìn)行致病性實(shí)驗(yàn)。圖２．１是菌株對鐵皮石斛離體植株的??致病性結(jié)果。接種病原菌４－５?ｄ后，即可觀察到莖部有少量菌絲出現(xiàn)，同時(shí)莖部??葉部開始出現(xiàn)褐變等病癥，接種７?（１后，發(fā)病癥狀明顯，葉片完全呈褐色且易??脫落，莖部呈腐灼狀，同時(shí)在病部與濾紙上出現(xiàn)較多菌絲，對照組未有變化。??圖２．１菌株ＤＱ對鐵皮石斛離體植株的致病性??Ｆｉｇ．?２．１?Ｐａｔｈｏｇｅｎｅｃｉｔ＼?ｏｆ?ｓｔｒａｉｎ?ＤＱ?ｏｎ?Ｄｅｎｄｒｏｂｉｕｍ?ｏｆｆｃｉｎａｌｅ?ｉｎ?ｖｉｔｒｏ??（ｄｐｉ：?ｄａｙ?ｐｏｓｔ?ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ）??隨后在飢培苗ｈ驗(yàn)證菌株ＤＱ的致病性，結(jié)果如圖２．２。接種病原菌的植株??７ｄ后出現(xiàn)病癥，葉部大量出現(xiàn)褐色，ｈｉ時(shí)葉部和莖部上有少許菌絲纏繞。接神??２５??

株枯萎死亡。??網(wǎng)羽??圖２．２菌株ＤＱ對鐵皮石斛組培苗的致病性??Ｆｉｇ．?２．２?Ｐａｔｈｏｇｅｎｅｃｉｔｙ?ｏｆ?ｓｔｒａｉｎ?ＤＱ?ｏｎ?ｔｉｓｓｕｅ?ｃｕｌｔｕｒｅ?ｓｅｅｄｌｉｎｇｓ?ｏｆ?Ｄ．?ｏｊｆｉｃｉｎａｌｅ??進(jìn)＿步在鐵皮石斛盆栽植株上驗(yàn)證菌株ＤＱ的致病性，結(jié)果如圖２．３所示。??實(shí)驗(yàn)組葉片變褐枯萎，顯露出較為典型的白絹病癥狀，盆栽實(shí)驗(yàn)證實(shí)了?ＤＱ可引??起鐵皮石斛白絹病。??圖２．３菌株ＤＱ對鐵皮石斛盆栽植株的致病性??Ｆｉｇ．?２．３?Ｐａｔｈｏｇｅｎｅｃｉｔｙ?ｏｆ?ｓｔｒａｉｎ?ＤＱ?ｏｎ?ｔｉｓｓｕｅ?ｃｕｌｔｕｒｅ?ｓｅｅｄｌｉｎｇｓ?ｏｆ?Ａ?ｏｆｆｉｃｉｎａｌｅ??３．２病原菌鑒定??３．２．１形態(tài)鑒定??對病原菌進(jìn)行菌落形態(tài)和菌絲形態(tài)的鑒定。圖２．４（ａ）為病原菌株在ＰＤＡ平板??ｈ生長７?ｄ時(shí)的形態(tài)，菌絲體呈白色絹絲狀向四周輻射散開，菌絲生氐非常旺盛??且致密，－般５－７?ｄ即可長滿整個(gè)平板，１０ｄ后菌核開始形成，且以培養(yǎng)皿周緣??２６??

圖２．２菌株ＤＱ對鐵皮石斛組培苗的致病性??Ｆｉｇ．?２．２?Ｐａｔｈｏｇｅｎｅｃｉｔｙ?ｏｆ?ｓｔｒａｉｎ?ＤＱ?ｏｎ?ｔｉｓｓｕｅ?ｃｕｌｔｕｒｅ?ｓｅｅｄｌｉｎｇｓ?ｏｆ?Ｄ．?ｏｊｆｉｃｉｎａｌｅ??進(jìn)＿步在鐵皮石斛盆栽植株上驗(yàn)證菌株ＤＱ的致病性，結(jié)果如圖２．３所示。??實(shí)驗(yàn)組葉片變褐枯萎，顯露出較為典型的白絹病癥狀，盆栽實(shí)驗(yàn)證實(shí)了?ＤＱ可引??起鐵皮石斛白絹病。??圖２．３菌株ＤＱ對鐵皮石斛盆栽植株的致病性??Ｆｉｇ．?２．３?Ｐａｔｈｏｇｅｎｅｃｉｔｙ?ｏｆ?ｓｔｒａｉｎ?ＤＱ?ｏｎ?ｔｉｓｓｕｅ?ｃｕｌｔｕｒｅ?ｓｅｅｄｌｉｎｇｓ?ｏｆ?Ａ?ｏｆｆｉｃｉｎａｌｅ??３．２病原菌鑒定??３．２．１形態(tài)鑒定??對病原菌進(jìn)行菌落形態(tài)和菌絲形態(tài)的鑒定。圖２．４（ａ）為病原菌株在ＰＤＡ平板??ｈ生長７?ｄ時(shí)的形態(tài)，菌絲體呈白色絹絲狀向四周輻射散開，菌絲生氐非常旺盛??且致密，－般５－７?ｄ即可長滿整個(gè)平板，１０ｄ后菌核開始形成，且以培養(yǎng)皿周緣??２６??
【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2893896