發(fā)布時間：2020-12-03 15:47

　　飼料桑作為一種適應(yīng)能力強、營養(yǎng)豐富的生物飼料資源,可以緩解我國畜牧業(yè)快速發(fā)展與飼料嚴重匱乏的矛盾。但是由于桑葉細胞壁中木質(zhì)素的存在,影響了飼料的消化率,導(dǎo)致營養(yǎng)價值降低,利用率下降。為了弄清桑葉木質(zhì)素含量及其木質(zhì)素生物合成關(guān)鍵酶基因的表達差異,以期為低木質(zhì)素含量品種桑樹的選育提供參考。本研究以桑樹為材料,克隆了木質(zhì)素生物合成途徑中的2個關(guān)鍵基因COMT、CCoAOMT,并構(gòu)建了CCoAOMT-BL21表達載體,在大腸桿菌中成功表達。通過熒光定量PCR技術(shù)分析這兩個基因以及在川桑中已經(jīng)克隆得到的CAD、CCR、F5H三個關(guān)鍵基因在不同桑樹品系、不同組織、不同時期中的表達情況,并對不同品系、不同時期桑葉總木質(zhì)素含量進行測定。本論文通過基因克隆與表達分析,取得如下主要成果:1、桑樹咖啡酸O-甲基轉(zhuǎn)移酶基因（MmCOMT）的克隆和序列分析咖啡酸O-甲基轉(zhuǎn)移酶是一種雙功能的甲基轉(zhuǎn)移酶,能夠催化羥基肉桂醇芳香環(huán)上C3和C5位置的甲基化生成阿魏酸和芥子酸,在控制木質(zhì)素的合成中具有重要作用。以魯桑品種育71-1頂端幼葉cDNA為模板,克隆了桑樹咖啡酸O-甲基轉(zhuǎn)移酶基因,命名為MmCOMT（GenBan... 

【文章來源】：江蘇科技大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 緒論
    1.1 研究的目的和意義
    1.2 研究現(xiàn)狀
        1.2.1 桑葉用作家禽飼料
        1.2.2 木質(zhì)素的研究進展
        1.2.3 咖啡酸O-甲基轉(zhuǎn)移酶基因
        1.2.4 咖啡酰輔酶A-O甲基轉(zhuǎn)移酶基因
        1.2.5 木質(zhì)素生物合成途徑中其它關(guān)鍵基因
    1.3 研究內(nèi)容
        1.3.1 桑樹咖啡酸O-甲基轉(zhuǎn)移酶（COMT）基因的克隆及序列分析
        1.3.2 桑樹咖啡酰輔酶A-O甲基轉(zhuǎn)移酶（CCoAOMT）基因的克隆及序列分析
        1.3.3 桑樹不同品系、不同組織和采收時期基因表達水平及桑葉總木質(zhì)素相對含量分析
第2章 桑樹咖啡酸O-甲基轉(zhuǎn)移酶基因（MmCOMT）克隆及序列分析
    2.1 實驗材料與主要試劑
    2.2 實驗方法
        2.2.1 桑樹總RNA提取
        2.2.2 cDNA第1 鏈的合成
        2.2.3 桑樹COMT基因克隆引物的設(shè)計
        2.2.4 桑樹COMT基因的克隆
        2.2.5 大腸桿菌感受態(tài)細胞的制備
        2.2.6 COMT基因目的片段與載體的連接
        2.2.7 連接產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化
        2.2.8 桑樹COMT基因序列分析
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 桑樹COMT基因CDS序列的克隆
        2.3.2 桑樹COMT基因及編碼蛋白質(zhì)的序列分析
        2.3.3 桑樹COMT基因編碼氨基酸序列的同源性比對與系統(tǒng)進化分析
    2.4 結(jié)論與討論
第3章 桑樹咖啡酰輔酶A-O甲基轉(zhuǎn)移酶基因（MmCCoAOMT）克隆、序列分析及原核表達
    3.1 實驗材料與主要試劑（同2.1）
    3.2 實驗方法
        3.2.1 桑樹總RNA提�。ㄍ�2.2.1）
        3.2.2 cDNA第一鏈的合成（同2.2.2）
        3.2.3 桑樹CCoAOMT基因克隆引物的設(shè)計
        3.2.4 桑樹CCoAOMT基因的克隆
        3.2.5 大腸桿菌感受態(tài)細胞的制備（同2.2.5）
        3.2.6 CCoAOMT基因目的片段與載體的連接
        3.2.7 連接產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化（同2.2.7）
        3.2.8 桑樹CCoAOMT基因序列分析
        3.2.9 桑樹CCoAOMT基因的原核表達
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 桑樹CCoAOMT基因CDS序列的克隆
        3.3.2 桑樹CCoAOMT基因及編碼蛋白質(zhì)的序列分析
        3.3.3 桑樹CCoAOMT基因編碼氨基酸序列的同源性比對與系統(tǒng)進化分析
        3.3.4 桑樹CCoAOMT基因的原核表達分析
    3.4 結(jié)論和討論
第4章 桑樹CAD、CCR、F5H、COMT、CCoAOMT基因表達水平與總木質(zhì)素含量分析
    4.1 實驗材料與主要試劑
        4.1.1 qRT-PCR所需儀器與試劑
        4.1.2 木質(zhì)素含量的測定所需儀器與試劑
    4.2 實驗方法
        4.2.1 基因表達熒光定量PCR相關(guān)引物的設(shè)計
        4.2.2 桑樹不同品系、不同組織、不同采收時期CAD、CCR、F5H、COMT、CCoAOMT基因表達的熒光定量PCR
        4.2.3 桑葉總木質(zhì)素相對含量的測定
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 不同桑品系CAD、CCR、F5H、COMT、CCoAOMT基因表達水平
        4.3.2 桑樹總木質(zhì)素相對含量
    4.4 結(jié)論和討論
結(jié)論
參考文獻
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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[2]桑樹木質(zhì)素合成基因的生物信息和功能分析[D]. 范麗.西南大學(xué) 2013
[3]桑葉對肉羊生產(chǎn)性能、血液生化指標、免疫抗氧化功能和肉品質(zhì)的影響[D]. 李偉玲.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012
[4]苧麻COMT與CCoAOMT基因的克隆及其反義表達載體的構(gòu)建[D]. 章霄云.華南熱帶農(nóng)業(yè)大學(xué) 2006



本文編號：2896389