發(fā)布時間：2020-11-10 20:59

　　 辣木(Moringa oleifera)原產(chǎn)印度及非洲,為多用途的經(jīng)濟樹種,辣木屬單科單屬植物,是多年生常綠喬木或多年生熱帶落葉喬木。人們開發(fā)和利用辣木作為營養(yǎng)食物、藥物及其它功能原料,現(xiàn)在已廣泛分布于非洲、亞洲和中美洲的30多個熱帶、亞熱帶國家或地區(qū),有良好的開發(fā)利用前景。近年來其栽培面積在我國不斷擴大,然而因栽培技術落后、管理粗放加上氣候影響等,辣木栽培過程中深受病蟲害威脅,目前已報道病害中主要有半裸鐮刀菌(Fusarium semitectum)和黑星菌(Fusicladium pallidorseum)侵染果莢和莖部。辣木枝枯病、辣木葉斑病是2015年11月在海南省昌江辣木種植基地被發(fā)現(xiàn),目前尚未見報道。本試驗對該兩種病害進行病原菌鑒定、生物學特性測定、化學藥劑篩選,并用綠色熒光蛋白(GFP)標記辣木葉斑病菌,目的是為這兩種病害進行早期診斷、預測預報及田間防治提供理論基礎。主要研究結果:1.明確鑒定了辣木上兩種新病害:采用組織分離法、柯赫氏法則驗證、形態(tài)學特征觀察和rDNA-ITS序列分析等方法,鑒定了辣木枝枯病病原為木賊鐮刀菌(Fusariumequiseti)、辣木葉斑病病原為多主棒孢(Carynespora cassicola)。2.生物學特性:木賊鐮刀菌(F.equiseti)生長適宜溫度25～30℃,最適溫度28℃;適宜pH 6～8,最適pH為7;在PDA和PSA培養(yǎng)基上菌絲生長最快且密集,最適合該菌生長;光照對該菌菌絲生長影響不大,無顯著差異;以蔗糖為碳源時利用率最高,菌絲生長最快;以牛肉浸膏為氮源時利用率最高,菌絲生長最快;致死溫度為65℃,10min。多主棒孢(C.cassiicola)的生長適宜pH6～8,最適pH為7;在PDA培養(yǎng)基上生長,最適合該菌生長;以蔗糖和木糖的碳源時菌絲生長較快;以牛肉浸膏和蛋白胨為氮源時菌絲生長較快;光照對該菌菌絲生長影響不大,無顯著差異;適宜溫度25～30℃,最適溫度28℃;致死溫度為60℃,10min。3. GFP標記了C.cassiicola:將C.cassiicola通過PEG介導原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化的方法,獲得在菌絲、分生孢子穩(wěn)定發(fā)出綠色熒光的轉(zhuǎn)化子,將所得轉(zhuǎn)化子的形態(tài)特征與野生菌相比,生長速度比野生菌慢,菌落形態(tài)無明顯差異,致病性測定與野生菌相比致病能力未減弱。4.藥劑篩選:選用10種藥劑,分別測定對兩種病原菌的毒力。對F.equiseti,毒力最強的殺菌劑是丙環(huán)唑,EC50最小為0.167μg/mL、EC90為3.951μg/mL,氟硅唑、咪鮮胺、戊唑醇、腈菌唑、苯醚甲環(huán)唑EC50分別為0.39、1.409、1.411、7.271、8.561μg/mL,對Fequiseti的抑制效果相對較好;代森錳鋅、甲基硫菌靈和百菌清,EC50分別為18.921、32.594、76.764 μg/mL抑制效果相對較差;異菌脲的EC50為90.59 μg/mL毒力最弱。對 C.cassiicola 氟硅唑的 EC50為 0.184 μg/mL,EC90為 160.4 μg/mL,甲基硫菌靈的EC50為3.335 μg/mL,EC90為50.808 μg/mL,從EC50和EC90綜合考慮結果是甲基硫菌靈的毒力最高,氟硅唑次之,以及丙環(huán)唑、咪鮮胺、戊唑醇和代森錳鋅EC50 分別為 6.382、8.154、13.649、26.716 μg/mL 對 C cassiicola 的抑制效果相對較好;腈菌唑、異菌脲、苯醚甲環(huán)唑則抑制效果相對較差,EC50分別為30.852、31.13、36.181 μg/mL;百菌清EC50為269.497 μg/mL毒力最弱,抑菌效果最差。
【學位單位】：海南大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2017
【中圖分類】：S763.7
【部分圖文】：

其中由１８Ｓ、５．化和２８ＳＨ者基因姐成一個高度保守的轉(zhuǎn)錄單元（燕勇等，??２００８），燈Ｓ區(qū)域被５．化ｒＤＮＡ分隔為ＩＴＳ１?（位于１８Ｓ和５．８Ｓ之間）和打Ｓ２?（位于??５．化和２化之間）兩個片斷（王源超等，２０００）（如圖１）。??ｒｍ的面分?ＩＴＳ２的價巧??２８Ｓ?ｒＤＮＡ?—３Ｈ??—＾?中麵■??ｆＴＳ３?ｐｒｉｍｅｒ?ＩＴＳ＂！的ｉｔｋｉ??圖１真苗ｒＤＮＡ轉(zhuǎn)錄區(qū)及相關引物（引用自藏勇筆２００８）??Ｆｉｇ?１?Ｆｕｎｇａｌ?ｒＤＮＡ?化ａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ?ｒｅｇｉｏｎ?ａｎｄ?ｒｅｌａ化ｄ?ｐｒｉｍｅｒｓ??ＩＴＳ片段為非編碼區(qū)所受到的選擇皮力小且進化速率較快，在絕大多數(shù)的真核??生物中表現(xiàn)出了極為廣泛的序列多態(tài)性，ＩＴＳ?１和ＩＴＳ２的保守性基本上表現(xiàn)為種內(nèi)相??對一致，種間差異比較明顯（匡治州等，２００４）。這種特點使ＩＴＳ適合于對真菌物種??進行分子鑒定，將真菌鑒定到屬及屬Ｗ上的種、亞種、變種，甚至菌株的水平（如表??３）?〇??表３真茵ｒＤＮＡ序列分析方法的應用范圍（引用自張志華等，２００６）??Ｔａｂｌｅ?３?Ｔｈｅ?ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ?ｒａｎｇｅ?ｏｆ?ｆｕｎｇａｌ?ｒＤＮＡ?ｓｅｑｕｅｎｃｅ?ａｎａｌｙｓｉｓ??列類巧分類范圍?其菌類稱???巧Ｓ?ｒＤＮＡ

圖２?ｐＣＴ７４質(zhì)粒結構圖（由美國Ｏｒ巧ｏｎ大學Ｃｉｕｆｆｅ扣巧壬■惠贈）??Ｆｉｇ．?２?ｐＣＴ７４?ｐｌａｓｍｉｄ?ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ??供試植株??印度改良辣木唯ａ?ｏ／ｅ礦ｅｒａ?ＰＫＭｌ，實驗室內(nèi)常規(guī)管理，回接備用。??供試培養(yǎng)基??供試培養(yǎng)基均參考文獻（方中達，１９９８）制備。??馬鈴薑葡萄糖瓊脂（Ｐｏｔａｔｏ?ｄｅｘｔｒｏｓｅ?ａｇａｒ，?ＰＤＡ）培養(yǎng)基；馬鈴善２００?ｇ、葡萄、瓊脂粉２０?ｇ、蒸溜水Ｉ以??ＰＤ培養(yǎng)液：是陽Ａ培養(yǎng)基配方中不加瓊脂粉配制而成；??ＬＢ培養(yǎng)基：膜蛋白腺１０?ｇ，酵母提取物５?ｇ，ＮａＣｌ?１０?ｇ，蒸饋水１０００?ｍＬ，ｐＨ?７．４馬鈴著庶糖瓊脂（Ｐｏｔａｔｏ?ｓｕｇａｒ?ａｇａｒ，?ＰＳＡ）培養(yǎng)基：馬鈴蓄２００?ｇ、庶糖２０?ｇ、??粉２０?ｇ、蒸觸水１以??查彼（Ｃｚａｐｅｋ）培養(yǎng)基：ＭｇＳ〇４．７也０?０．５?ｇ、Ｋ出Ｐ〇４?１?ｇ、ＫＣ１?０．５?ｇ、ＮａＮ〇３?０．？．

分離純化后，莖部病樣得到２個單菌落，菌株編號為Ｍ０１５１、Ｍ０１５７，葉片病樣到３個單菌落，菌株編號為Ｍ０１１１、Ｍ０１１２、Ｍ０１１３，經(jīng)過形態(tài)學觀察和致病性接試驗，對接種后發(fā)病的辣木枝條和葉片進行病原菌再分離鑒定，初步確定Ｍ０１和Ｍ０１１１菌株這兩株菌株分別可Ｗ侵染辣木莖部和辣木葉片。且觀察其發(fā)病特征Ｗ往報道的辣木病害特征存在一定差異，因此將菌株Ｍ０］?５７造成辣木莖部的病害名為辣木枝枯病，Ｍ０１１１菌株造成辣木葉片的病害命名為辣木葉斑病。??２病狀描述及分離菌株致病性鑒定??２．１辣木枝巧病??辣木枝枯病病害癥狀主要見于辣木莖部，呈現(xiàn)水潰狀病斑，連續(xù)的陰雨天氣溫條件下，ｔＫ潰狀病斑不斷沿枝條擴展，天晴后病部逐漸萎蕉、干縮，病部周圍呈褐色，不能正常抽芽，最終枝條折斷或枯死（圖３－ａ）。經(jīng)過柯赫氏法則回接鑒定明，Ｍ０１５７菌株接種１０?ｄ后能造成針刺接種莖干表面周圍呈黃褐色，隨后發(fā)病部表現(xiàn)出水潰狀病斑，與自然發(fā)病辣木的病狀相符合（圖３－ｂ）；相同條件下，接種ｄ后，無傷接種的癥狀表現(xiàn)不明顯（圖３－Ｃ），說明分離到的菌株可Ｗ侵染枝條使發(fā)病，Ｍ０１５７是造成辣木枝枯病的病原菌。??
【參考文獻】

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本文編號：2878332