發(fā)布時間：2020-11-17 02:35

　　 本研究以吉林省主栽品種‘大西洋’、‘春薯3號’、‘春薯5號’、‘吉薯1號’馬鈴薯脫毒試管苗為試驗材料,主要開展以下兩方面研究工作。一是分別對四種馬鈴薯莖段再生體系進行研究,并從植物激素選擇和使用濃度入手優(yōu)化馬鈴薯再生條件,以期建立馬鈴薯高效再生體系;二是利用獲得的再生體系將gus基因轉入‘春薯3號’馬鈴薯中,獲得‘春薯3號’馬鈴薯轉基因植株。試驗最終建立了四種馬鈴薯的高效再生體系,并對‘春薯3號’外源基因遺傳轉化影響因素中的菌液濃度、侵染時間、共培養(yǎng)時間進行了優(yōu)化。主要研究結果如下:1)確定了‘大西洋’適合愈傷組織誘導培養(yǎng)基為:MS+2.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L2,4-D+0.4 mg/L KT,誘導率達100%;適合愈傷組織分化培養(yǎng)基為:MS+2.0 mg/L6-BA+0.2 mg/L KT+2.0 mg/L ZT,分化率達95%。2)確定了‘春薯3號’愈傷組織誘導培養(yǎng)基為:MS+2.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L2,4-D+0.4 mg/L KT,誘導率達100%;愈傷組織分化培養(yǎng)基為:MS+2.0 mg/L 6-BA+0.2mg/L KT+2.0 mg/L ZT,分化率達79.4%。3)確定了‘春薯5號’愈傷組織誘導培養(yǎng)基為:MS+2.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L2,4-D+0.4 mg/L KT,誘導率達100%;愈傷組織分化培養(yǎng)基為:MS+2.0 mg/L 6-BA+3.0mg/L ZT+0.5 mg/L GA_3,分化率達68.75%。4)確定了‘吉薯1號’愈傷組織誘導培養(yǎng)基為:MS+2.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L2,4-D+0.4 mg/L KT,誘導率達100%;愈傷組織分化培養(yǎng)基為:MS+2.0 mg/L 6-BA+3.0mg/L ZT+0.5 mg/L GA_3,分化率達85.7%。5)通過對農桿菌菌液濃度的分析、侵染時間的篩選、共培養(yǎng)時間的比較,確定了適合春薯3號的侵染條件:OD_(600)≈0.5,侵染時間為10min,共培養(yǎng)時間為3d。6)試驗成功獲得了‘春薯3號’抗性植株,通過PCR檢測和gus染色證明外源基因已成功轉入植物細胞中。通過上述研究,進一步了解了馬鈴薯種質基因型與其再生條件的關系,建立一套高效馬鈴薯植物再生體系,為吉林省地方馬鈴薯的栽培、種質資源保存和遺傳育種提供了重要的參考。
【學位單位】：吉林農業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2019
【中圖分類】：S532
【部分圖文】：

與本試驗結果相一致。誘導出的愈傷組織均在 S1 中分化出芽，C5 和 C9 中的莖段在 S1 中分化效果如圖2.1 所示。從 C1、C5、C6、C9 中轉出的莖段從接種到出芽結束分別用了 42d、33d、41d、40d，分化率分別為 80%、77.5%、85%和 95%。雖然 C5 和 S1 的組合用時最短，但 C9和 S1 的組合，分化率最高，為‘大西洋’理想的再生體系。圖 2.1‘大西洋’愈傷組織的誘導及分化A：C5 中愈傷組織的誘導；B：C9 中愈傷組織的誘導；C：C5 中的愈傷組織在 S1 中的分化；D：C9 中的愈傷組織在 S1 中的分化

圖 2.2‘春薯 3 號’愈傷組織的誘導及分化A：‘春薯 3 號’愈傷組織的誘導；B：‘春薯 3 號’愈傷組織的分化Figure 2.2 Induction and differentiation of ‘Chunshu3’callusA: induction of ‘Chunshu3’callus; B: differentiation of ‘Chunshu3’callus 號’馬鈴薯再生體系的建立 號’在除 C9 中均有愈傷組織形成，在 C5 中愈傷組織生長狀態(tài).3），誘導率為 100%（表 2-5）。但愈傷組織在分化培養(yǎng)基中大，并且后期發(fā)生褐化（圖 2.3）。表 2-5‘春薯 5 號’莖段愈傷組織誘導結果統(tǒng)計表Table 2-5 Statistics on callus induction results of ‘Chunshu5’stem segments接種外植體數（個） 出愈外植體數（個） 愈傷組織形態(tài) 誘導40 26 黃綠色 40 23 黃綠色

碩士學位論文 第二章 馬鈴薯再生體系結果 NAA 對‘春薯 5 號’愈傷組織誘導的影響最小，可以認為 2mg/L 2,4-D+0.4mg/L KT 為‘春薯 5 號’愈傷組織最佳誘導培養(yǎng)基。誘導階段，‘春薯 5 號’在 S1 中不分化，僅表現出莖段的膨大；從 C5 織在 S2 中分化出芽，從接種到出芽結束用了 48d，分化率為 68.75%。
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本文編號：2886986