發(fā)布時(shí)間：2020-11-06 10:46

　　 茭白(Zizania latifolia)是菰屬多年生宿根草本植物,是我國第二大水生蔬菜。不僅營養(yǎng)豐富,同時(shí)具有保健和藥用價(jià)值。在田間,茭白有正常茭白、灰茭及雄茭三種表型,這三種表型與黑粉菌在茭白體內(nèi)的生長(zhǎng)狀態(tài)密切相關(guān)。目前,茭白種植主要采用茭墩分離篩選的方式,繁殖系數(shù)較低,速度慢、種質(zhì)資源少,同時(shí)繁殖過程受季節(jié)局限。生產(chǎn)上若連續(xù)兩年不選種,雄茭和灰茭的發(fā)生率將達(dá)30%左右,嚴(yán)重影響農(nóng)民的經(jīng)濟(jì)效益。本課題以“鄂茭1號(hào)”、“鄂茭2號(hào)”、“大別山1號(hào)”三種茭白品種為研究對(duì)象,通過研究不同基因型、不同外植體以及不同激素配比對(duì)愈傷組織的誘導(dǎo)及分化的影響來探討其離體再生情況。同時(shí)以“鄂茭1號(hào)”的雄茭幼苗為試驗(yàn)材料,采用注射法接種菰黑粉菌,分子檢測(cè)接種株中黑粉菌情況,并在孕茭期調(diào)查統(tǒng)計(jì)接種株的孕茭情況。主要結(jié)果如下:1)不同基因型的茭白對(duì)愈傷組織的誘導(dǎo)率無明顯影響,差異不顯著。在進(jìn)行單個(gè)重復(fù)實(shí)驗(yàn)時(shí),利用“鄂茭1號(hào)”作為試驗(yàn)材料進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)的平均誘導(dǎo)率略高。2)“鄂茭1號(hào)”茭白不同外植體愈傷組織的誘導(dǎo)率差異顯著,其中側(cè)芽的平均愈傷組織誘導(dǎo)率明顯高于嫩葉和幼根。3)茭白側(cè)芽愈傷組織誘導(dǎo)激素配比的最佳組合為NAA 1 mg/L+6-BA 1mg/L+2,4-D 1 mg/L;茭白愈傷組織分化的最佳激素配比組合為6-BA 2 mg/L+NAA 1mg/L+KT 0.1 mg/L。4)注射法接種的植株有7.8%的植株能夠正常孕茭,其中105孢子/mL的黑粉菌孢子懸浮液效果最好。未能正常孕茭的植株,也有3.3%的植株檢測(cè)到黑粉菌的存在。5)利用石蠟切片法,對(duì)膨大后的正常茭白、雄茭以及接種成功的雄茭進(jìn)行觀察,結(jié)果發(fā)現(xiàn),在同樣一個(gè)大小的視野內(nèi),接種成功的茭白生長(zhǎng)點(diǎn)和膨大后的茭白生長(zhǎng)點(diǎn)的細(xì)胞明顯比雄茭大,細(xì)胞與細(xì)胞之間的間隙也明顯比雄茭的大。綜上所述,本文研究了不同基因型、不同外植體類型及不同激素配比對(duì)茭白愈傷組織誘導(dǎo)及分化的影響,同時(shí)探討了菰黑粉菌注射法接種對(duì)茭白侵染及孕茭的影響,其研究結(jié)果為茭白的離體再生植株提供了理論依據(jù),對(duì)進(jìn)一步探討菰黑粉菌與茭白之間的互作及茭白的孕茭機(jī)制研究具有重要意義。
【學(xué)位單位】：安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：S645.2
【部分圖文】：

.2 不同外植體對(duì)愈傷組織誘導(dǎo)的影響由表 3-7 可以看出，外植體類型不同，其愈傷組織的誘導(dǎo)率差異達(dá)到極顯著水，其中，側(cè)芽的愈傷組織誘導(dǎo)率明顯高于嫩葉和根的愈傷組織誘導(dǎo)率。以側(cè)芽作外植體的愈傷組織誘導(dǎo)率為 86.11%，以嫩葉作為外植體的愈傷組織誘導(dǎo)率為.67%，以根作為外植體的愈傷組織誘導(dǎo)率僅僅為 2.78%。以側(cè)芽作為外植體進(jìn)行個(gè)重復(fù)實(shí)驗(yàn)時(shí)，其誘導(dǎo)出的愈傷組織結(jié)構(gòu)緊密，顏色呈淡黃色，利于形成分化苗見圖 3-1）。表 3-7 不同外植體類型誘導(dǎo)愈傷組織的試驗(yàn)結(jié)果Table 3-7 The results of different kind of explants外植體類型 平均誘導(dǎo)率（%） 5%差異 1%差異側(cè)芽 86.11 ± 0.21 a A幼嫩葉片 36.67 ± 0.17 b B根 2.78 ± 0.03 c C

圖 4-1 茭白黑粉菌 ITS-5.8S rDNA 序列擴(kuò)增ig. 4-1 Amplification of ITS-5.8S rDNA of Ustilago esculeM, Marker; 1, 雄茭; 2, 正常茭白, Marker; 1, The male Zizania latifolia; 2, The white Zizan茭白雄茭植株孕茭的影響的雄茭植株，有 7.8%的植株能夠正常孕茭株均使雄茭正常孕茭（如圖 4-2）。提取未，PCR 擴(kuò)增 ITS-5.8S rDNA 序列。瓊脂能擴(kuò)增出 750 bp 左右的電泳條帶。104孢子/mL 的黑粉菌濃度下，接種成功率種成功率為 16.7%；106孢子/mL 的黑粉菌黑粉菌接種的最佳黑粉菌濃度為 105孢子表 4-3 黑粉菌接種后孕茭結(jié)果

圖 4-2 菰黑粉菌接種后的孕茭情況及檢測(cè)Fig. 4-2 Detection and pregnancy of Zizania latifolia after inoculation the Ustilago esculentaA, 雄茭; B, 正常茭孕茭; C, 未接種成功茭白; D-E, 接種成功的雄茭在葉片枯黃期孕茭; F, 分子檢測(cè) （1, 雄茭2, 正常茭; 3, 接種未成功的雄茭; 4, 接種成功的雄茭）A, The male Zizania latifolia; B, The swollen white Zizania latifolia; C, Uninfected Zizania latifolia; D-E, Successfullyinfected Zizania latifolia; F, Molecular detection (1, The male Zizania latifolia; 2, The white Zizania latifolia; 3,Unsuccessful inoculation of male; 4, Successful inoculation of the male)4.2.3 接種株的石蠟切片分析取膨大的正常茭、雄茭及接種成功后的雄茭生長(zhǎng)點(diǎn)經(jīng)固定、包埋、冰凍并切片等步驟處理后，顯微鏡觀察三種類型茭白在組織結(jié)構(gòu)上的差異。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在顯微觀察的同樣一個(gè)視野內(nèi)，接種成功后的茭白生長(zhǎng)點(diǎn)和膨大后的茭白生長(zhǎng)點(diǎn)的細(xì)胞明顯比雄茭大，細(xì)胞與細(xì)胞之間的間隙也比雄茭的大（圖 4-3）。
【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2873041