發(fā)布時間：2020-11-09 05:17

　　 梨是薔薇科(Rosaceae),梨亞科(Romoideae),梨屬(Pyrus)多年生落葉喬木。我國是梨的主要起源中心,種質資源非常豐富。傳統(tǒng)的鑒定方法對品種進行鑒別已不能滿足需求,利用分子標記技術從DNA水平對品種進行鑒別更為便捷、可靠。SSR標記呈共顯性遺傳、多態(tài)性高、重復性好。篩選帶型清晰、多態(tài)性高、重復性好的SSR核心引物,建立一套簡便、快速、可靠的梨品種鑒定技術體系應用于梨品種鑒定,也有利于進行品種權利保護,維護育種者和生產者的利益,保障果樹產業(yè)健康發(fā)展。本試驗利用來源于不同梨系統(tǒng)、遺傳背景差異較大的12份梨種質資源對已報道的800對梨和蘋果的SSR引物及本課題組根據(jù)梨基因組數(shù)據(jù)開發(fā)的534對SSR引物進行篩選,并利用篩選到的核心引物對125份主要的梨種質資源進行遺傳多樣性分析和聚類分析,驗證結果。本研究的主要內容和結果如下:1.梨SSR-PCR反應體系的優(yōu)化結果:20μL PCR反應體系中各成分濃度10×PCR Buffer(Mg~(2+))保持1倍濃度、dNTPs 0.2mmol/L,引物0.5μmol/L,模板DNA 2.5 ng/μL、Taq酶0.025 U/μL。2.篩選到25對清晰、穩(wěn)定、多態(tài)性高的引物,并在48份梨種質資源中進行驗證,共檢測到387個等位基因,平均每個位點等位基因數(shù)15.48個;多態(tài)性信息含量變幅為0.70~0.92,平均值0.85。聚類分析結果與種質親緣關系吻合,表明這25對SSR引物可以作為梨品種鑒定的核心引物。3.構建了124個梨栽培品種SSR特征指紋圖譜與分子身份證:25對SSR核心引物可以區(qū)分124個梨品種中除4組共9個品種以外的115個梨品種,共擴增出了21個~69個基因型,按25個引物擴增的基因型數(shù)目從多到少對SSR位點進行排序,并利用Excel對供試品種進行排序區(qū)分和數(shù)據(jù)背景顏色標示,生成124份品種的SSR特征指紋數(shù)據(jù)表。對124個品種SSR特征指紋數(shù)據(jù)表前10個SSR位點的基因型從00向99賦值編號,并依據(jù)各SSR位點在表中的順序將編號串聯(lián)生成各品種的分子身份證號碼。4.對125份梨種質資源進行了遺傳多樣性分析:25對SSR引物在125份梨種質材料中共檢測到453個等位基因,平均每個位點擴增到18.12個等位基因。供試SSR引物檢測到基因型數(shù)目從21個~72個不等,平均每個SSR引物檢測到46.52個基因型。引物多態(tài)信息含量PIC值最小0.71,最大0.92,平均為0.85。聚類分析結果表明,125份梨品種資源總體上被分為東方梨和西洋梨2個類群。東方梨中白梨品種、砂梨品種、秋子梨品種和新疆梨品種及野生種杜梨聚在一起;西洋梨品種和來源于新疆的梨品種‘杜霞西’聚在一起,與種質資源的親緣關系吻合,進一步驗證了核心引物鑒定的高效性。
【學位單位】：中國農業(yè)科學院
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2017
【中圖分類】：S661.2
【部分圖文】：

2.2.22 PCR 擴增圖 2Fi增結果直觀分2. 1 部分梨品種igure 2.1 DNA分析種的基因組 DNelectrophoretogNA 瓊脂糖凝膠gram of some sa膠電泳圖amples

2.2.3利3 不同循環(huán)數(shù)利用上述確定Figure 2數(shù)對 SSR-P定的最佳組合圖 2. 2 梨 SSR2.2 ElectrophorPCR 擴增結合，進行循環(huán)R-PCR 正交優(yōu)化resis results of S結果的影響環(huán)數(shù)梯度試驗化試驗凝膠電泳SSR-PCR ortho響驗，如圖 2.3，泳圖oronal designa、b、c、d分別為 25、30、35、

同退火溫溫度對 SSRFigR-PCR 擴增圖 2. 3 不同gure 2.3 Effects增結果的影同循環(huán)數(shù)對 SSRs of cycle numb影響R-PCR 反應體系ber different on系的影響SSR-PCR ampplification
【參考文獻】

相關期刊論文 前10條

1 薛華柏;楊健;王龍;王蘇珂;張慧蓉;喬玉山;章鎮(zhèn);李秀根;;29個梨品種SSR特征指紋數(shù)據(jù)表的構建[J];果樹學報;2015年06期

2 陳學森;郭文武;徐娟;叢佩華;王力榮;劉崇懷;李秀根;吳樹敬;姚玉新;陳曉流;;主要果樹果實品質遺傳改良與提升實踐[J];中國農業(yè)科學;2015年17期

3 吳則東;王茂芊;馬龍彪;王華忠;倪洪濤;;適于甜菜品種鑒定的SSR核心引物的篩選[J];中國農學通報;2015年15期

4 劉清文;宋躍;李甲明;張明月;齊開杰;張紹鈴;吳俊;;利用核心簡單重復序列(SSR)標記分析西洋梨品種資源遺傳多樣性[J];農業(yè)生物技術學報;2015年05期

5 王文魁;曾斌;李疆;田嘉;李秀根;羅淑萍;;梨ISSR-PCR反應體系的優(yōu)化及在SRAP、SSR標記中的通用性研究[J];中國農學通報;2014年31期

6 王斐;姜淑苓;歐春青;;我國育成梨品種特點分析及展望[J];中國果樹;2014年04期

7 王慶彪;張揚勇;莊木;楊麗梅;劉玉梅;呂紅豪;方智遠;;中國50個甘藍代表品種EST-SSR指紋圖譜的構建[J];中國農業(yè)科學;2014年01期

8 田路明;曹玉芬;董星光;張瑩;;SSR分子標記在梨種質資源研究中的應用[J];生物學雜志;2013年06期

9 張靖國;田瑞;陳啟亮;楊曉平;胡紅菊;;基于SSR標記的梨栽培品種分子身份證的構建[J];華中農業(yè)大學學報;2014年01期

10 畢紅園;王長彪;段永紅;郭黃萍;孫毅;;采用正交設計法優(yōu)化梨SSR-PCR體系[J];生物技術通報;2013年05期

相關博士學位論文 前3條

1 衡偉;薔薇科部分果樹S基因的鑒定、克隆及其特異性識別研究[D];南京農業(yè)大學;2008年

2 張冰冰;抗寒蘋果、梨種質資源遺傳多樣性研究[D];吉林農業(yè)大學;2008年

3 姚玉新;蘋果果實酸度相關基因的篩選、克隆及表達分析[D];山東農業(yè)大學;2006年

相關碩士學位論文 前5條

1 魏明明;基于轉錄組測序的茄子SSR標記開發(fā)及應用[D];中國農業(yè)科學院;2016年

2 王文魁;梨分子遺傳圖譜的構建及其部分果實性狀的定位分析[D];新疆農業(yè)大學;2014年

3 鄭麗珊;香蕉SSR分子標記的開發(fā)[D];華南熱帶農業(yè)大學;2007年

4 曹玉芬;梨栽培品種SSR標記遺傳多樣性研究[D];中國農業(yè)科學院;2006年

5 馬明臻;梨品種AFLP指紋圖譜的構建[D];河北農業(yè)大學;2005年

本文編號：2875946