發(fā)布時(shí)間：2024-05-28 20:25

　　蘋果腐爛病是我國(guó)蘋果產(chǎn)業(yè)的重大生物災(zāi)害,發(fā)生普遍,為害嚴(yán)重,Valsa mali var.mali是引起蘋果腐爛病的主要病原真菌,深入研究病菌的生長(zhǎng)發(fā)育及分子致病機(jī)制可為病害的科學(xué)防控提供理論依據(jù),分離克隆和調(diào)控病菌生長(zhǎng)發(fā)育和致病相關(guān)基因,進(jìn)而研究這些基因的功能,可揭示腐爛病菌生長(zhǎng)發(fā)育及致病分子機(jī)制。本研究以ATMT介導(dǎo)的突變體庫(kù)中已篩選出的菌落形態(tài)、生長(zhǎng)和致病性均出現(xiàn)變異的突變體FL550為出發(fā)菌株,通過(guò)側(cè)翼序列擴(kuò)增,分離克隆了蘋果腐爛病菌HMG(VmHMG7)基因,利用生物信息學(xué)方法,從蘋果腐爛病菌全基因組數(shù)據(jù)庫(kù)中鑒定出HMG-box家族,利用MEGA5軟件對(duì)基因家族進(jìn)行了系統(tǒng)進(jìn)化分析,利用MapDRAW及GSDS方法進(jìn)行了基因家族成員的結(jié)構(gòu)及染色體定位;利用融合PCR技術(shù)將VmHMG7基因上下游片段與及潮霉素篩選標(biāo)記基因(hygromycin phosphotransferase gene,HPH)構(gòu)建敲除載體,應(yīng)用PEG-CaCl₂介導(dǎo)原生質(zhì)體,將敲除載體轉(zhuǎn)化到野生型菌株中,然后經(jīng)過(guò)潮霉素的篩選、PCR擴(kuò)增和Southern雜交,獲得了敲除突變體。將敲除前...

【文章頁(yè)數(shù)】：71 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖1.1經(jīng)典的HMG蛋白的分類Figure1.1ClassificationofclassicalHMGproteins

蘋果腐爛病菌VmHMG7基因的分離及功能分析狀態(tài)，如圖1.1（Cateetal.，2010）。表1.1HMG-box結(jié)構(gòu)域中的保守序列Table1.1ConservedsequenceofHMG-boxdomains亞家族結(jié)構(gòu)域一致核心序列分布MA....

圖1.2柄孢霉中HMG-box基因的遺傳網(wǎng)絡(luò)（引自AitBenkhalietal.，2013）

蘋果腐爛病菌VmHMG7基因的分離及功能分析遺傳分析顯示，該網(wǎng)絡(luò)還調(diào)控不受交-box成員在真菌中的重要作用，12個(gè)HMG5和SpSte11是交配型基因的保5.5億年前進(jìn)化分分離，兩種HMG-box的性別決定中發(fā)揮重要作用。P.aseri因子形成的HMG-bo....

圖2.1敲除載體的構(gòu)建及突變體PCR驗(yàn)證示意圖

圖2.1敲除載體的構(gòu)建及突變體PCR驗(yàn)證示意圖Fig.2.1ConstructionoftheknockoutvectorandthemutantdetectionbyPCRCTAB法快速提取突變體DNA，方法見(jiàn)步驟2.2.2。用四對(duì)引物（....

圖3.1hiTAIL-PCR產(chǎn)物電泳條帶Fig.3.1ElectrophoreticbandofhiTAIL-PCR

圖3.1hiTAIL-PCR產(chǎn)物電泳條帶Fig.3.1ElectrophoreticbandofhiTAIL-PCR分別代表第二三步反應(yīng)產(chǎn)物，Marker為DM2000maker，白線指示條帶為因的分析體的特異性片段切膠回收，連接至pMD18-T載體，單....

本文編號(hào)：3983684