發(fā)布時(shí)間：2024-06-03 20:06

　　辣椒(Capsicum annuum L.)是一種受人們喜愛(ài)的蔬菜,在全世界范圍內(nèi)廣泛種植。辣椒疫病由辣椒疫霉菌(Phytophthora capsici)引起,在辣椒的整個(gè)生長(zhǎng)階段都有可能發(fā)生,可導(dǎo)致成片辣椒死亡,嚴(yán)重影響了辣椒的生產(chǎn)。實(shí)踐證明,明確作物的抗病基因并用于選育抗病品種,才能從根本上預(yù)防某種病害的發(fā)生。本實(shí)驗(yàn)室前期研究結(jié)果顯示,Ca21394為辣椒抗疫病的候選基因,但未進(jìn)行功能驗(yàn)證;病毒誘導(dǎo)的基因沉默(VIGS)是一種快速沉默目的基因的方法,正在越來(lái)越多地用于植物候選基因的功能分析。本研究以辣椒抗疫病材料’G43’為試驗(yàn)材料,利用VIGS技術(shù),分析Ca21394是否參與辣椒對(duì)辣椒疫霉菌的抗性反應(yīng)。研究結(jié)果如下:構(gòu)建了 VIGS重組載體pTRV2:Ca21394。采用對(duì)寄主影響較溫和的煙草脆裂病毒(TRV)為病毒載體,以辣椒葉片DNA為模板,在Ca21394基因序列5’端的一個(gè)外顯子區(qū)域內(nèi)設(shè)計(jì)引物,克隆得到大小為438 bp的目的片段,經(jīng)過(guò)雙酶切檢測(cè)、測(cè)序驗(yàn)證序列正確后,在pTRV2載體的XbaI和BamHI雙酶切位點(diǎn)間插入該目的片段,完成pTRV2:Ca21394重組載體...

【文章頁(yè)數(shù)】：67 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖２－１?Ｇ４３葉片ＤＮＡ提取電泳檢測(cè)??

２．２．１辣椒葉片ＤＮＡ提取??按照ＤＮＡ提取試劑盒的操作步驟，提取抗疫病材料‘Ｇ４３’的辣椒葉片ＤＮＡ，??并進(jìn)行電泳檢測(cè)，結(jié)果如圖２－１所示，得到清晰的條帶，表明已經(jīng)得到所需的ＤＮＡ，??可用其進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)。??Ｍ?１?２?３??２０００?ｂｐ??７５０?ｂｐ??圖２－１?....

圖２－３目的片段與ｐＥＡＳＹ－Ｔ３載體連接轉(zhuǎn)化后ＰＣＲ檢測(cè)??

??片ＤＮＡ為模板進(jìn)行ＰＣＲ擴(kuò)增，電泳檢測(cè)結(jié)果顯示５００?ｂｐ下方有清晰的條帶（圖２－２），??與預(yù)期結(jié)果一致。測(cè)序結(jié)果表明，目的片段與Ｃａ２１３９４的ＣＤＳ序列同源片段完全一??致，即該目的片段不包含內(nèi)含子，可用于下一步的重組載體構(gòu)建。??Ｍ?１?２?３??圖２－２?Ｃａ２１３....

圖２－２?Ｃａ２１３９４基因擴(kuò)增電泳檢測(cè)??

??片ＤＮＡ為模板進(jìn)行ＰＣＲ擴(kuò)增，電泳檢測(cè)結(jié)果顯示５００?ｂｐ下方有清晰的條帶（圖２－２），??與預(yù)期結(jié)果一致。測(cè)序結(jié)果表明，目的片段與Ｃａ２１３９４的ＣＤＳ序列同源片段完全一??致，即該目的片段不包含內(nèi)含子，可用于下一步的重組載體構(gòu)建。??Ｍ?１?２?３??圖２－２?Ｃａ２１３....

圖２－５?ｐＴＲＶ２和目的片段質(zhì)粒提取電泳檢測(cè)??

活化含ｐＴＲＶ２質(zhì)粒的大腸桿菌，利用ｐＴＲＶ２－Ｆ／Ｒ引物進(jìn)行ＰＣＲ擴(kuò)增檢測(cè)，得到??的條帶大小應(yīng)為２８１?ｂｐ，電泳檢測(cè)結(jié)果表明，在２００?ｂｐ條帶上方可看到單一清晰的條??帶（圖２－４），與預(yù)期結(jié)果一致，說(shuō)明ｐＴＲＶ２質(zhì)�？梢杂糜诤罄m(xù)試驗(yàn)。??Ｍ?１?２?３?４??ｊｍ??圖....

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