發(fā)布時間：2024-07-05 05:19

　　黃酮化合物具有多樣的生理活性和潛在的藥用價值,其中C5-OH和C7-OH是重要的抗菌活性基團(tuán),研究表明,松屬素能顯著抑制意大利青霉呼吸作用并誘發(fā)細(xì)胞程序性死亡,已有呼吸抑制試驗證明線粒體呼吸電子傳遞鏈酶復(fù)合物I,IV和V活性會直接被松屬素抑制;松屬素抑制青霉的關(guān)鍵部位,可能處于線粒體呼吸鏈上,進(jìn)而導(dǎo)致細(xì)胞能量代謝障礙,誘發(fā)細(xì)胞凋亡或程序性壞死。本文以柑橘青霉病的主要病原菌意大利青霉為指示菌,使用被證明抗菌活性最強(qiáng)的5,7二羥基黃酮類化合物松屬素,借助蛋白組學(xué)IRAQ技術(shù),來研究松屬素不同時間處理后,引起的意大利青霉蛋白表達(dá)差異,以及通過分子模擬作為參考,呼吸鏈復(fù)合物作為靶點的可能機(jī)制,及松屬素引起程序性死亡的探究。主要研究結(jié)果如下:1.松屬素處理后,意大利青霉的氧化磷酸化通路、TCA循環(huán)產(chǎn)生多種1.2倍以上表達(dá)差異的蛋白,其中線粒體呼吸鏈酶復(fù)合物I,IV和V,及呼吸相關(guān)酶琥珀酸脫氫酶和蘋果酸脫氫酶產(chǎn)生顯著差異,導(dǎo)致導(dǎo)致菌體能量代謝紊亂;程序性死亡過程中某些指示蛋白,比如Apoptosis-inducing factor、凋亡BAX inhibitor蛋白、肽酰脯氨基順反異構(gòu)化的酶(CY...

【文章頁數(shù)】：69 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略語表
第一章 緒論
    1.1 前言
    1.2 5,7-二羥基黃酮的抑菌機(jī)制
    1.3 真菌細(xì)胞程序性死亡途徑與機(jī)制
    1.4 蛋白組及iTRAQ技術(shù)
    1.5 同源建模與分子對接
    1.6 本研究的目的與意義
    1.7 研究的主要內(nèi)容
第二章 松屬素處理對意大利青霉的蛋白組變化研究
    2.1 引言
    2.2 材料與方法
        2.2.1 試劑
        2.2.2 菌種
        2.2.3 樣品準(zhǔn)備
        2.2.4 實驗流程
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 差異蛋白統(tǒng)計
        2.3.2 差異蛋白的Pathway富集分析
        2.3.3 氧化磷酸化通路
        2.3.4 TCA循環(huán)
        2.3.5 程序性死亡相關(guān)蛋白
        2.3.6 差異倍數(shù)在 1.4 倍以上的其他蛋白
    2.4 討論
第三章 松屬素處理后青霉菌相關(guān)差異蛋白的表達(dá)驗證
    3.1 引言
    3.2 材料與方法
        3.2.1 儀器設(shè)備
        3.2.2 試劑
        3.2.3 實驗步驟
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 MRM實驗方法的建立
        3.3.2 MRM鑒定蛋白結(jié)果
        3.3.3 qPCR實驗結(jié)果
    3.4 討論
第四章 松屬素與靶酶結(jié)合能力的預(yù)測及誘發(fā)死亡機(jī)制的探討
    第一節(jié) 呼吸鏈酶蛋白同源建模與分子對接
        4.1 引言
        4.2 材料與方法
            4.2.1 材料收集
            4.2.2 試驗方法
        4.3 結(jié)果與分析
            4.3.1 同源模建
            4.3.2 分子對接
        4.4 討論
    第二節(jié) 染色法判斷松屬素誘導(dǎo)的程序性死亡
        4.1 引言
        4.2 材料與方法
        4.3 結(jié)果與分析
        4.4 討論
參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號：4001100