枯草芽孢桿菌醬(豉)香風(fēng)味基因的篩選及功能研究
【學(xué)位單位】:貴州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【學(xué)位年份】:2019
【中圖分類(lèi)】:TS201.3
【部分圖文】:
圖 1.1 Bacilus subtilis 中 TTMP 的產(chǎn)生途徑Figure 1.1 Pathway of TTMP production in bacillus subtilis香風(fēng)味基因的篩選方法方法有很多,主要有 mRNA 差異顯示技術(shù)(楊曉霞 等,宏 等,2017)、轉(zhuǎn)錄組測(cè)序(汪最 等,2018)、抑制消減、基因敲除(張慧 等,2014)、基因突變(趙銀娟 等,2 等,2016)、生物信息學(xué)、實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 等,一般,但為保證篩選可信度,要根據(jù)研究對(duì)象、研究目的以及實(shí)研究。技術(shù)酸行使功能的主要承擔(dān)者,是細(xì)胞功能和狀態(tài)最直接的描述生物功能的必然紐帶,轉(zhuǎn)錄水平調(diào)控是目前研究最多,也是
圖 1.2 同源重組交換示意圖Figure 1.2 Schematic diagram of homologous recombination exchange基因敲除或整合的主要步驟包括:(1)構(gòu)建重組載體。(2)電擊、化學(xué)誘導(dǎo)等方法將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入宿主細(xì)胞。(3)篩選目的細(xì)胞或菌落。(4)傳代培養(yǎng)并篩選已敲除或已整合的宿主。(5)進(jìn)行形態(tài)觀察及分子生物學(xué)檢測(cè)。1.3.2 同源重組在枯草芽孢桿菌中的運(yùn)用同源重組被發(fā)現(xiàn)后,科學(xué)家們很快就將該技術(shù)運(yùn)用到生物學(xué)的各個(gè)領(lǐng)域。同源重組技術(shù)也被運(yùn)用到了 Bacilus subtilis 上,Bacilus subtilis 由于高蛋白分泌能力和良好發(fā)酵基礎(chǔ)被廣泛地運(yùn)用在工業(yè)生產(chǎn)中,為了提高菌株的優(yōu)良特性,就需要對(duì)菌株進(jìn)行分子改造張明俐(張明俐 等,2016)等利用同源重組技術(shù),快速構(gòu)建枯草芽孢桿菌 168(Bacilusubtilis168)spo0A 敲除載體 pMAD-Δspo0A,無(wú)痕敲除后得到了不長(zhǎng)芽孢的枯草芽孢桿菌,對(duì)提高枯草芽孢桿菌工業(yè)生產(chǎn)效率有重要意義;張懿翔(張懿翔 等,2015)等通過(guò)同源重組將透明顫菌血紅蛋白(VHb)基因(vgb)整合到枯草芽孢中,改善枯草芽孢桿菌
貴州大學(xué)碩士畢業(yè)論文4. 通過(guò)限制性?xún)?nèi)切酶(Sac I 和 BamH I)將 Bacilus subtilis BJ3-2 基因組中擴(kuò)增的上游同源臂(HLarm )通過(guò)連接 轉(zhuǎn)化到大腸桿菌 DH5α 中, 提取得到質(zhì)粒pUC18+HLarm+p43+cat+HRarm。5. pUC18 為克隆載體,只添加 p43 啟動(dòng)子和氯霉素的編碼區(qū),沒(méi)有終止子并不能使菌株帶有氯霉素抗性,因此對(duì)先前構(gòu)建的 pUC18+HLarm+p43+cat+HRarm 載體進(jìn)行完善,利用 Pst I、BamH I 酶切位點(diǎn)將質(zhì)粒上的 p43+cat 替換成從 pHT01cas9-p43 質(zhì)粒 上 帶 有 啟 動(dòng) 子 、 編 碼 區(qū) 、 終 止 子 的 CmR 基 因 。 利 用 在 線(xiàn) 網(wǎng) 址(http://molbiol-tools.ca/Promoters.htm)中的 BPROM 和 FindTerm 對(duì) pHT01cas9-p43質(zhì)粒上的 CmR 基因進(jìn)行原核啟動(dòng)子和終止子分析預(yù)測(cè),確定無(wú)誤后進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。構(gòu)建示意圖,如圖 2.1 所示(利用軟件 SnapGene 制作)。
【參考文獻(xiàn)】
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本文編號(hào):2878241
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