發(fā)布時間：2020-11-15 02:40

　　 本實驗以尼羅羅非魚(Oreochromis niloticus)為實驗對象,探索羅非魚前脂肪細(xì)胞的誘導(dǎo)分化及傳代培養(yǎng)方法。本論文首先設(shè)計不同的原代培養(yǎng)條件:培養(yǎng)時間、接種密度、換液方式,探索最佳的首次傳代培養(yǎng)條件。實現(xiàn)傳代后,通過比較不同血清、堿性成纖維細(xì)胞生長因子(bFGF)、谷氨酰胺(Gln)對羅非魚前脂肪細(xì)胞傳代培養(yǎng)的影響,探索羅非魚前脂肪細(xì)胞的新傳代培養(yǎng)基,并對細(xì)胞進(jìn)行了凍存、復(fù)蘇,從而建立了羅非魚前脂肪細(xì)胞傳代培養(yǎng)模型。之后,本論文分析了傳代培養(yǎng)的羅非魚前脂肪細(xì)胞及在其他不同離體培養(yǎng)條件下(24小時離體培養(yǎng);原代培養(yǎng)匯合期;原代誘導(dǎo)分化)的脂肪細(xì)胞與活體中脂肪組織的脂肪酸組成差異。研究發(fā)現(xiàn),細(xì)胞離體培養(yǎng)時間越長,脂肪酸組成成分越少、越簡單,但C16:0、C18:0、C18:1n-9和C18:2這4種脂肪酸一直存在且保持較高比例。羅非魚脂肪組織里,不飽和脂肪酸比例顯著高于飽和脂肪酸,其中,單不飽和脂肪酸含量最高。然而,體外培養(yǎng)的脂肪細(xì)胞里,飽和脂肪酸所占比重都高于不飽和脂肪酸。最后,本文探索了傳代培養(yǎng)的羅非魚前脂肪細(xì)胞的誘導(dǎo)分化方法。本文設(shè)計了四種誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基:(1)培養(yǎng)基1:15%FBS+10μg/ml胰島素+DMEM/F12;(2)培養(yǎng)基2:培養(yǎng)基1+1.0mmol/L DEX+0.5mmol/L IBMX;(3)培養(yǎng)基3:培養(yǎng)基2+0.4mmol/L吲哚美辛;(4)培養(yǎng)基4:培養(yǎng)基2+2μg/ml鱈魚肝油脂肪酸(甲基酯)。12天后,采用油紅染色比較觀察細(xì)胞的生長狀況,結(jié)果發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基4對細(xì)胞的誘導(dǎo)結(jié)果最佳。本論文工作建立了較為系統(tǒng)的羅非魚前脂肪細(xì)胞的傳代培養(yǎng)和分化誘導(dǎo)方法,并對體外培養(yǎng)的脂肪細(xì)胞與脂肪組織間的脂肪酸組成有了新的認(rèn)識,為進(jìn)一步開展羅非魚脂代謝提供了可靠的細(xì)胞研究平臺。
【學(xué)位單位】：華東師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：Q813.11
【部分圖文】：

圖 2-3-1 不同換液方式對羅非魚前脂肪細(xì)胞原代培養(yǎng)的影響（A）不換液；（B）半數(shù)換液； （C）完全換液Picture 2-3-1 The effects of different medium exchange methods on primaryculture of preadipocytes in tilapia(A)No fluid exchange; (B) Half fluid exchange; (C) Complete fluid exchang由圖，在羅非魚前脂肪細(xì)胞原代培養(yǎng)時，不換液或半數(shù)換液對細(xì)胞的生長更為有利，其中以半數(shù)換液結(jié)果最佳，而完全換液組細(xì)胞反而生長不好，甚至不貼壁增值。2.3.2 羅非魚前脂肪細(xì)胞首次傳代前， 原代培養(yǎng)時間的確定（A）5 天

15 天 20 天圖 2-3-2 羅非魚前脂肪細(xì)胞不同原代培養(yǎng)時間的細(xì)胞生長情況Figure 2-3-2 The growth of preadipocytes of tilapia in different primary time如圖 2-3-2，圖 A、B、C、D 分別表示羅非魚前脂肪細(xì)胞原代培養(yǎng) 5天、15 天、20 天時，細(xì)胞的生長狀況，又分為低密度接種組（1×104）與接種組（2×105）。其中圖 A、B 中左邊均為高密度接種組，右邊均為低密組；圖 C、D 均為高密度接種組。由圖可知，羅非魚前脂肪細(xì)胞原代培養(yǎng)達(dá)到匯合期，之后分 2 種情況：（1）對于高密度接種組，隨著培養(yǎng)時間增胞繼續(xù)增值，細(xì)胞間接觸十分緊密，出現(xiàn)覆層現(xiàn)象，但 15 天后細(xì)胞胞質(zhì)逐漸變圓，不再貼壁，20 天左右細(xì)胞懸浮于培養(yǎng)皿中，此時首次傳代時

-3羅非魚前脂肪細(xì)
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本文編號：2884246