發(fā)布時(shí)間：2020-12-07 06:56

　　精原干細(xì)胞（spermatogonial stem cells,SSCs）是哺乳動(dòng)物體內(nèi)唯一可以將遺傳信息傳遞給下一代、功能單一的干細(xì)胞,體外分離培養(yǎng)SSCs為探索其生物學(xué)特性及其增殖、分化與去分化機(jī)制奠定了基礎(chǔ)。SSCs在特定的體外培養(yǎng)條件下,即使無(wú)外源基因操作也可以重編程形成多能干細(xì)胞。多能干細(xì)胞不僅具有自我復(fù)制的能力,而且具有形成多種組織和細(xì)胞的能力,具有很大的潛在應(yīng)用前景。誘導(dǎo)性多能干細(xì)胞（induced pluripotent stem cells,iPSCs）雖然在體內(nèi)外可分化形成三胚層,但由于外源基因的插入使其應(yīng)用受到制約。因此,SSCs更適用于人類臨床及動(dòng)物分子育種應(yīng)用。本研究分為兩部分,第一部分實(shí)驗(yàn)以小鼠作為動(dòng)物模型,分離、純化并體外培養(yǎng)小鼠精原干細(xì)胞（mouse spermatogonial stem cells,m SSCs）。采用機(jī)械分離法、兩步酶消化法結(jié)合連續(xù)差速貼壁法成功分離、純化得到來(lái)源于Oct4/GFP×CD1雜交品系F1代小鼠睪丸的mSSCs,并對(duì)體外培養(yǎng)的mSSCs進(jìn)行鑒定分析。當(dāng)細(xì)胞穩(wěn)定生長(zhǎng)時(shí),通過(guò)觀察細(xì)胞形態(tài)、堿性磷酸酶染色、免疫熒光染色、RT-... 

【文章來(lái)源】：內(nèi)蒙古大學(xué)內(nèi)蒙古自治區(qū) 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：59 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

飼養(yǎng)層細(xì)胞形態(tài)

圖 2.2 差速貼壁法富集的 mSSCs 形態(tài)A：培養(yǎng) 45 min 后貼壁的細(xì)胞 B：培養(yǎng) 1 h 后懸浮的細(xì)胞C：培養(yǎng) 2 h 后懸浮的細(xì)胞 D：過(guò)夜培養(yǎng)后的細(xì)胞Figure 2.2 The morphology of mouse Spermatogonial Stem Cells enriched by differential adhesion methoA: cells adhered for 45 minutes. B:not adhered cells cultured for 1 hour.C: Suspended cells cultured for 2 hours. D: Cells cultured overnight.3.3 mSSCs 的形態(tài)將經(jīng)過(guò)過(guò)夜貼壁富集的細(xì)胞接種到飼養(yǎng)層細(xì)胞上進(jìn)行培養(yǎng)，2 d 后開(kāi)始增殖，4 d 后度顯著提高，7 d 左右可見(jiàn)到經(jīng)典的葡萄狀克隆。以后每 7 d 進(jìn)行一次傳代，在體外傳時(shí)細(xì)胞形態(tài)沒(méi)有發(fā)生變化。由于本實(shí)驗(yàn)使用的小鼠睪丸來(lái)源于 GFP 轉(zhuǎn)基因小鼠，因此

圖 2.3 mSSCs 形態(tài)A：小鼠 SSCs 在飼養(yǎng)層細(xì)胞上培養(yǎng) 7 d 的形態(tài) B：小鼠 SSCs 體外培養(yǎng)第 6 代的形態(tài)C、D：體外培養(yǎng)小鼠 SSCs 的綠色熒光表達(dá)情況Figure 2.3 The morphology of mouse spermatogonial stem cells.: Morphology of mouse SSCs cultured on feeder cells for 7 days. B: Morphology of the sixth generatiomouse SSCs cultured in vitro. C、D:.GFP expression of mouse SSCs in vitro.4 mSSCs 堿性磷酸酶表達(dá)的檢測(cè)結(jié)果在早期胚胎中，AP 活性較高，隨著胚胎細(xì)胞的分化，其表達(dá) AP 的水平逐漸降低，末端，細(xì)胞失去 AP 的活性。通常，干細(xì)胞中都會(huì)表達(dá)一定的 AP 活性。AP 在多能活性最強(qiáng)。因此，可以通過(guò)檢測(cè)細(xì)胞是否表達(dá) AP 陽(yáng)性來(lái)確定其是否具有干性。如


本文編號(hào)：2902844