發(fā)布時間：2020-12-07 21:28

　　乙醇協(xié)同熱處理（60-80℃）能夠殺滅芽孢,而熱能夠影響酶活力,高濃度乙醇能夠鈍化酶活力。所以推測,熱和乙醇協(xié)同作用能夠殺滅芽孢的原因很可能是其鈍化了皮層裂解酶。因此,本文主要從熱、乙醇以及乙醇結合熱對枯草桿菌芽孢皮層裂解酶活力的影響,通過紫外吸收光譜、熒光光譜和傅立葉變換紅外光譜等研究皮層裂解酶的結構變化,探討熱結合乙醇殺滅芽孢的機理。主要研究結果如下:對枯草桿菌芽孢皮層裂解酶進行熱處理發(fā)現(xiàn),皮層裂解酶最佳酶活為40℃,80℃使酶基本失活。紫外吸收光譜顯示皮層裂解酶在280 nm左右出現(xiàn)吸收峰,且吸收強度均有不同,這與皮層裂解酶內(nèi)的Trp殘基和Tyr殘基變化有關。熒光光譜顯示,隨著溫度的增加,發(fā)射峰出現(xiàn)紅移,并產(chǎn)生熒光熱猝滅現(xiàn)象。當溫度為40°C時,紅移程度較小,三級結構相對穩(wěn)定。當溫度為80℃時,紅移程度最大,三級結構最不穩(wěn)定。熱處理皮層裂解酶的紅外光譜中,皮層裂解酶主要以β-轉角為主,其次是β-折疊,α-螺旋和無規(guī)卷曲的含量較低。當溫度范圍在4-30℃時,α-螺旋含量和β-折疊隨溫度的升高幾乎不變,二級結構含量變化較小,二級結構相對穩(wěn)定。當溫度為40℃時,β-折疊含量增加,其酶活... 

【文章來源】：寧夏大學寧夏回族自治區(qū) 211工程院校

【文章頁數(shù)】：56 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２－１溫度對皮層裂解酶活力的影響??Ｆｉｇ．?２－１?Ｅｆｆｅｃｔ?ｏｆ?ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ?ｏｎ?ｃｏｒｔｅｘ－ｌｙｔｉｃ?ｅｎｚｙｍｅ?ａｃｔｉｖｉｔｙ??

４?２０?３０?４０?５０?６０?７０?８０??處理溫度／＾：??圖２－４溫度對芽孢皮層裂解酶的巰基含量變化的影響??Ｆｉｇ．?２－４?Ｅｔｌ＇ｅｃｔ?ｏｆ?ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ?ｏｎ?ｍｅｒｃａｐｔｏ?ｇｒｏｕｐ?ｃｏｎｔｅｎｔ?ｏｆ?ｓｐｏｒｅ?ｃｏｒｔｅｘ－ｌｙｔｉｃ?ｅｎｚｙｍｅ??巰基和二硫鍵在穩(wěn)定蛋白質(zhì)三級結構和保持蛋白質(zhì)活性方面發(fā)揮主要作用，兩者在一定程度??上互相轉化可以反映蛋白質(zhì)折疊和去折疊化。溫度［７９］和壓力［８Ｑ］處理都會引起巰基和二硫鍵的變??化。圖２－４為不同溫度對枯草桿菌芽孢皮層裂解酶巰基含量的變化影響。經(jīng)熱處理后的巰基含量??隨著溫度的上升先下降后上升。２０°Ｃ處理２０?ｍｍ后，枯草桿菌芽孢皮層裂解酶巰基含量為原酶的??９３．１％；當升溫至４０°Ｃ處理２０?ｍｉｎ后，巰基含量降到最低，其巰基含量變?yōu)樵�酶的５１．５２％。隨??后，隨著溫度的繼續(xù)升高，枯草桿菌芽孢皮層裂解酶的巰基含量反而增加。何軒輝等報道對花??生分離蛋白超高壓處理后，其巰基含量隨壓力增大呈現(xiàn)先增加后減小的趨勢，這可能是由于暴露??出的巰基與其他基團組合形成二硫鍵導致。本實驗中，熱處理后的巰基含量隨著溫度的升高而降??低，可能是由于熱處理引起蛋白質(zhì)結構的改變，枯草桿菌芽孢皮層裂解酶表面的巰基與其他基團??組形成新的二硫鍵。當溫度升高至４０°Ｃ時

４５００?４０００?３５００?３０００?２５００?２０００?１５００?１０００?５００?０??據(jù)數(shù)／ｃｎｆ１??圖２－５皮層裂解酶的傅里葉紅外光譜圖??Ｆｉｇ．?２－５?ＦＴＩＲ?ｏｆ?ｃｏｒｔｅｘ－ｌｙｔｉｃ?ｅｎｚｙｍｅ??Ｎ－Ｈ伸縮振動的吸收峰在３４００－３４４０?ｃｎ＾出現(xiàn)，它與氫鍵締合后，向低波數(shù)發(fā)生位移［ｓｙ。由??圖８可以看出，枯草桿菌皮層裂解酶在３４１５?ｃｎｒ１處有一個強吸收峰，這是由蛋白質(zhì)中Ｎ－Ｈ伸縮??振動引起，Ｎ－Ｈ伸縮振動與氫鍵形成了締合體，向低波數(shù)發(fā)生位移�？莶輻U菌芽孢皮層裂解酶在??１６６５、１０８０、５２８?ｃｒｒｒ］波數(shù)處均有吸收峰，１６６５?ｃｍ－：１處的吸收峰是蛋白質(zhì)的特征吸收峰，歸屬于??酰胺１帶的Ｃ＝０伸縮振動引起，１０８０?ｃｎｒ１處的吸收峰是由蛋白質(zhì)中Ｃ－０伸縮振動引起的。而５２８??ｃｍ－１處的吸收峰是由氨基酸的ＣＯＯ面外搖擺振動引起的［Ｓ３］。??（二）枯草桿菌皮層裂解酶釀胺Ｉ帶（１６００－１?ＶＯＯｃｎｒ１）的擬合結果分析??００８｜－?Ｔ?０．２４ｒ??０?０７?－??ｉｊ４滅???Ｉ?｜?｜?｜?｜?｜?｜?｜?｜?｜??｜?！?｜?｜?｜??１６００?丨６］０?１６２０?１６３０?】６４０?１６５０?１６６０?丨６７０?１６８０?１６９０?】７００

【參考文獻】：
期刊論文
[1]加熱溫度對混合肉肌原纖維蛋白質(zhì)結構的影響[J]. 桂萍,羅永康,馮力更.  中國農(nóng)業(yè)大學學報. 2018(05)
[2]枯草芽孢桿菌芽孢表面展示外源功能蛋白的應用[J]. 馮杰,王振華,潘康成.  動物營養(yǎng)學報. 2017(11)
[3]超聲波、超高壓對白鰱魚肌肉脂肪氧合酶構象及酶活力的影響[J]. 王幫國,余振宇,林琳,潘麗軍,姜紹通.  食品科學. 2018(03)
[4]微分干涉差顯微成像方法高通量分析單個蘇金云芽孢桿菌HD-1芽孢萌發(fā)[J]. 陳越,彭立新,王曉春,黎永青,劉軍賢,王桂文.  分析化學. 2015(12)
[5]化學物質(zhì)輔助超高壓處理對枯草桿菌芽孢的作用[J]. 章中,楊宏偉,胡濟美,胡小松,張燕,廖小軍.  中國食品學報. 2015(05)
[6]芽孢桿菌芽孢內(nèi)膜脂質(zhì)的分離及圖譜分析[J]. 董偉,沈清,張漢揚,余水靜,鄧揚悟,潘濤.  有色金屬科學與工程. 2015(02)
[7]高壓對花生分離蛋白物化特性和微觀結構的影響[J]. 何軒輝,劉紅芝,劉麗,胡暉,王強.  中國食品學報. 2014(08)
[8]乳酸對多酚氧化酶活性與構象的影響[J]. 方志超,周磊,劉偉,鄒立強,熊志強.  食品工業(yè)科技. 2014(16)
[9]熱處理對蘑菇多酚氧化酶活性及結構的影響[J]. 周磊,鄒立強,劉偉,方志超,劉軍平.  食品科學. 2014(17)
[10]溫度、超聲、nisin協(xié)同脈沖磁場殺滅枯草芽孢桿菌的研究[J]. 錢靜亞,馬海樂,李樹君,劉斌,張弨.  現(xiàn)代食品科技. 2013(12)

博士論文
[1]蛋白質(zhì)折疊/解折疊研究[D]. 譚翠燕.中國科學院研究生院（上海生命科學研究院） 2007

碩士論文
[1]芽孢皮層裂解酶的提取純化及高壓熱處理對其影響研究[D]. 孫靜.寧夏大學 2018
[2]超高壓結合理化因素對芽孢皮層肽聚糖作用的研究[D]. 張津瑜.寧夏大學 2018
[3]運用光學新技術探究理化因子對蘇云金芽孢桿菌芽孢萌發(fā)的影響[D]. 何樹祥.廣西師范大學 2017
[4]乳酸—熱處理對多酚氧化酶活性與構象的影響[D]. 方志超.南昌大學 2014
[5]蛋白酶在乙醇溶液中性質(zhì)及其應用研究[D]. 劉玉芳.江南大學 2012
[6]動態(tài)高壓微射流技術對胰蛋白酶和菠蘿蛋白酶性質(zhì)和構象變化的影響[D]. 張兆琴.南昌大學 2010
[7]蓮藕多酚氧化酶的純化及環(huán)境因素對其溶液構象的影響[D]. 胡婉峰.華中農(nóng)業(yè)大學 2008
[8]魚鱗酶溶性膠原蛋白的提取、特性及其二級結構的溫度效應研究[D]. 鐘朝輝.華中農(nóng)業(yè)大學 2006
[9]應用圓二色光譜研究電場對蛋白質(zhì)（酶）構象的影響[D]. 姚占全.內(nèi)蒙古大學 2005



本文編號：2903927