STR基因座嵌合引物復合擴增及其法醫(yī)學應用研究
[Abstract]:Objective to explore a new method for multiplex amplification of STR loci, which is called chimeric primer STR multiplex amplification. A new multiplex amplification system of forensic STR loci was established by using fluorescence labeled capillary electrophoresis laser automatic detection platform. The practicability of forensic science was studied according to the guidance of the Technology working Group on DNA Analysis methods (TWGDAM). Methods D1S1612D9S2026 D20S161D6S477 STR loci were amplified by PCR chimeric primers. PCR products were isolated by polyacrylamide electrophoresis and stained with silver. The fluorescent labeled chimeric primer compound amplification products were detected by capillary electrophoresis laser automatic analysis system, mixed samples, different tissues, different media, common animals in different templates, The chimeric primer compound amplification system was tested under different temperature conditions and verified by practical cases. Results by using common primer and locus specific chimeric primer, a multiplex amplification method of forensic STR locus chimeric primer was established. The amplification conditions of this method are easy to optimize, the homogeneity of different loci amplification conditions is not high, and the primer dimer has a certain degree of inclusiveness. Using domestic Taq enzyme to make Sichuan University Dong Jianguo's stable and satisfactory results in his doctoral thesis, It is a low cost and high efficiency method for multiplex amplification of forensic STR loci. DIS1612 D952026 (D205161) D65477 STR locus fluorescent marker and chimeric primers were used to amplify capillary electrophoresis (CE) laser automatic analysis system, and the results showed that DIS1612, D952026 and D205161D65477 STR locus were amplified by capillary electrophoresis. At the same time, it was proved that the multiplex amplification method of chimeric primers was compatible with the laser automatic analysis method of capillary electrophoresis. In accordance with the basic requirements of the TWGDAM guidance scheme, the forensic practicability of the system was studied. It is proved that the system has the same ability to detect fruit formation in different tissues of the same individual, and has the ability to detect samples and mixed samples from common media. The samples placed in 80OC for 6 days and those stored in outdoor sunlight for 14 days could still be classified. MicroDNA template typing of 0.25ng; no cross reaction with 15 common animals and microbes. It is consistent with the conclusion of identification. Conclusion the multiplex amplification system of four genetic markers, DIS1612, D952026, D205161, D65477, was established. It is proved that the system can be successfully applied to the automatic detection platform of fluorescence labeled capillary electrophoresis with laser. The results of the new fluorescent marker chimeric primer multiplex amplification system were stable, reproducible and sensitive. It has the ability to detect the old marks and mixed spots, and can correctly type the marks on the common media. No cross-reaction with common animals and microorganisms can be successfully used in forensic examination.
【學位授予單位】:四川大學
【學位級別】:博士
【學位授予年份】:2003
【分類號】:D919
【共引文獻】
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本文編號:2135157
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