發(fā)布時間：2020-11-18 12:44

　　 目的:宮頸癌由于其高發(fā)病率和和轉(zhuǎn)移率一直在女性惡性腫瘤中占據(jù)一席之地,明確宮頸癌細胞的轉(zhuǎn)移擴散機制對于其臨床策略的探索有著非比尋常的意義。細胞內(nèi)氯離子通道蛋白1(chloride intracellular channel 1,CLIC1)在惡性腫瘤進展過程中發(fā)揮的作用已被國內(nèi)外多項研究所證實,但具體功能和機制仍不清楚�；�形血管系統(tǒng)是惡性腫瘤所具有的普遍特征,這種異常的血管系統(tǒng)使得腫瘤細胞周圍生長環(huán)境發(fā)生慢性改變,最終形成一種長期持續(xù)的缺氧-再加氧(hypoxia-reoxygenation,H-R)環(huán)境。而這一轉(zhuǎn)變所帶來的最直接的結(jié)果就是腫瘤細胞中活性氧水平(reactive oxygen species,ROS)的提升,腫瘤細胞的惡性表型在ROS作用下發(fā)生轉(zhuǎn)變,進一步加速腫瘤的惡性進展過程。本研究觀察缺氧-再加氧環(huán)境中CLIC1對宮頸癌SiHa細胞內(nèi)ROS水平的影響,進而對宮頸癌的進展機制進行探討。方法:通過物理條件構(gòu)建宮頸癌SiHa細胞H-R模型和常氧模型;對不同培養(yǎng)環(huán)境中的SiHa細胞給予IAA94(CLIC1特異性抑制劑,20μmol/L)、DPI(NADPH氧化酶抑制劑,15μmol/L)、NAC(抗氧化劑,20 mmol/L)藥物處理,各組細胞中CLIC1蛋白的相對表達量通過Western-blot方法檢測;不同藥物處理后SiHa細胞內(nèi)ROS含量使用2',7'-二氯熒光黃雙乙酸鹽(2,7-Dichlorodi-hydrofluorescein diacetate,DCFH-DA)熒光探針試劑盒檢測;利用劃痕實驗及細胞侵襲實驗觀察常氧及H-R條件下各組細胞遷移及侵襲能力的改變。獲取數(shù)據(jù)通過SPSS22.0軟件完成最終分析處理。結(jié)果:1.Western-blot方法測得H-R組CLIC1蛋白的相對表達量(3.57±0.03)顯著高于常氧組(1.00±1.18)(P0.01),H-R+IAA94組細胞中CLIC1蛋白的相對表達量(2.39±0.01)明顯低于H-R組(3.57±0.03)(P0.01),H-R+DPI組和H-R+NAC組細胞中CLIC1蛋白的相對表達量(2.83±0.03、2.85±0.02)明顯低于H-R組(3.57±0.03)(P0.01)。2.熒光探針技術(shù)檢測各組SiHa細胞內(nèi)ROS含量的結(jié)果顯示,相對于常氧組,缺氧再加氧條件下培養(yǎng)的SiHa細胞內(nèi)ROS的相對含量出現(xiàn)增加(P0.01),而與H-R組相比,H-R+IAA94組細胞內(nèi)ROS的相對含量則出現(xiàn)了降低(P0.01),H-R+DPI組和H-R+NAC組細胞內(nèi)ROS的相對含量也低于H-R組(P0.01)。3.細胞劃痕實驗測得H-R組SiHa細胞的劃痕愈合面積(61.76±0.52)明顯高于常氧組(41.94±1.18)(P0.01),H-R+IAA94組細胞的劃痕愈合面積(50.53±3.18)低于H-R組(61.76±0.52)(P0.01),H-R+DPI組和H-R+NAC組細胞的劃痕愈合面積(49.34±2.15、49.21±3.13)明顯低于H-R組(61.76±0.52)(P0.01)。4.細胞侵襲實驗結(jié)果表明相比于常氧組(46.60±6.19),H-R組SiHa細胞的侵襲個數(shù)(91.80±10.96)明顯增多(P0.01),H-R+IAA94組細胞的侵襲個數(shù)(69.20±9.88)較H-R組(91.80±10.96)較少(P0.01),H-R+DPI組和H-R+NAC組細胞的侵襲個數(shù)(65.20±9.58、64.40±6.80)也明顯少于H-R組(91.80±10.96)(P0.01)。結(jié)論:CLIC1在缺氧-再加氧環(huán)境中可通過上調(diào)細胞內(nèi)ROS參與宮頸癌SiHa細胞的遷移和侵襲過程,促進宮頸癌進展。以CLIC1和ROS作為相關(guān)藥理學靶點的臨床策略可能為宮頸癌治療提供希望。
【學位單位】：山西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2020
【中圖分類】：R737.33
【部分圖文】：

山西醫(yī)科大學碩士學位論文72結(jié)果2.1H-R條件上調(diào)SiHa細胞CLIC1蛋白的表達Western-Blot方法檢測經(jīng)過不同藥物處理后SiHa細胞中CLIC1蛋白的表達量發(fā)現(xiàn)，H-R環(huán)境下SiHa細胞中CLIC1蛋白的表達較常氧環(huán)境下出現(xiàn)較大幅度的增加（P<0.01）；而使用IAA94處理后，細胞內(nèi)CLIC1蛋白含量較H-R組有所降低（P<0.01）（表2-1，圖2-1）。表2-1不同藥物處理對SiHa細胞CLIC1蛋白表達的影響*：與N組相比，P<0.01；#*：與H-R組相比，P<0.01*：與N組相比，P<0.01；#*：與H-R組相比，P<0.01圖2-1不同藥物處理對SiHa細胞CLIC1蛋白表達的影響（相對β-actin）CLIC1蛋白相對表達量F值PN組1.00±1.185925.78>0.05H-R組3.57±0.03*<0.01H-R+IAA94組2.39±0.01#*<0.01H-R+DPI組2.83±0.03#*<0.01H-R+NAC組2.85±0.02#*<0.01

山西醫(yī)科大學碩士學位論文82.2H-R條件下CLIC1上調(diào)SiHa細胞ROS水平實驗發(fā)現(xiàn)H-R組SiHa細胞的熒光強度高于N組，表明H-R環(huán)境中SiHa細胞的ROS含量相比于常氧環(huán)境更高（P<0.01）。而在IAA94的阻滯作用下，隨著CLIC1通道活躍程度的降低，SiHa細胞內(nèi)的ROS水平也顯現(xiàn)出類似的下降趨勢（P<0.01）。與H-R組相比，H-R+DPI組和H-R+NAC組細胞內(nèi)ROS含量也出現(xiàn)了明顯降低（P<0.01）（表2-2，圖2-2）。表2-2H-R對SiHa細胞內(nèi)ROS的影響*：與N組相比，P<0.01；#*：與H-R組相比，P<0.01*：與N組相比，P<0.01；#*：與H-R組相比，P<0.01圖2-2H-R對SiHa細胞內(nèi)ROS的影響2.3H-R條件下CLIC1增強SiHa細胞遷移能力細胞劃痕實驗結(jié)果顯示H-R組細胞遷移能力與N組相比出現(xiàn)明顯提升（P<0.01）；與H-R組相比，經(jīng)過一定濃度的IAA94、DPI、NAC處理后置于H-R環(huán)境下培養(yǎng)的SiHa細胞的遷移能力則出現(xiàn)下降（P<0.01），表明這種增強的遷移能力可被IAA94、DPI以及NAC所抑制（見表2-3，圖2-3）。熒光強度（FI）F值PN組537±14.4256600.04>0.05H-R組27815±127.64*<0.01H-R+IAA94組16079±49.12#*<0.01H-R+DPI組9298±46.16#*<0.01H-R+NAC組9108±77.58#*<0.01

山西醫(yī)科大學碩士學位論文9表2-3H-R對SiHa細胞劃痕愈合面積的影響（%）*：與N組相比，P<0.01；#*：與H-R組相比，P<0.01*：與N組相比，P<0.01；#*：與H-R組相比，P<0.01圖2-3H-R對SiHa細胞劃痕愈合面積的影響（%）2.4H-R條件下CLIC1增強SiHa細胞侵襲能力我們的實驗結(jié)果表明，H-R環(huán)境下培養(yǎng)的SiHa細胞侵襲能力較N組明顯增強（P<0.01）。而與H-R組相比，經(jīng)過IAA94（20μmol/L）處理后，SiHa細胞侵襲數(shù)明顯減少，H-R+DPI組和H-R+NAC組的SiHa細胞侵襲能力較H-R組也有所下降，差異均具有顯著性（P<0.01）（見表2-4，圖2-4）。表2-4H-R對SiHa細胞侵襲的影響細胞侵襲數(shù)F值PN組46.60±6.1916.57>0.05H-R組91.80±10.96*<0.01H-R+IAA94組69.20±9.88#*<0.01H-R+DPI組65.20±9.58#*<0.01H-R+NAC組64.40±6.80#*<0.01*：與N組相比，P<0.01；#*：與H-R組相比，P<0.01劃痕愈合面積（%）F值PN組41.94±1.1829.14>0.05H-R組61.76±0.52*<0.01H-R+IAA94組50.53±3.18#*<0.01H-R+DPI組49.34±2.15#*<0.01H-R+NAC組49.21±3.13#*<0.01
【參考文獻】

相關(guān)碩士學位論文 前2條

1 賈小妮;宮頸癌中CLIC4、TGF-β1和α-SMA的表達及意義[D];鄭州大學;2017年

2 王宏偉;CLIC4介導(dǎo)的成纖維細胞向肌成纖維細胞轉(zhuǎn)化與結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移關(guān)系的研究[D];南方醫(yī)科大學;2012年

本文編號：2888730