發(fā)布時(shí)間：2017-12-10 05:23

  本文關(guān)鍵詞：賈第蟲(chóng)病毒microRNA克隆及功能研究

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【摘要】：賈第蟲(chóng)是一個(gè)原始的真核生物,同時(shí)也是一個(gè)重要的人獸共患病病原,具有重要的進(jìn)化生物學(xué)研究?jī)r(jià)值,賈第蟲(chóng)作為模式生物仍然有很多問(wèn)題需要解決。賈第蟲(chóng)病毒是由一個(gè)線形的末端開(kāi)放的7.0 Kb ds RNA和100 KDa的衣殼蛋白組成。microRNA是由內(nèi)含子或編碼基因間隔區(qū)的RNA基因編碼的,長(zhǎng)度大小為18-24個(gè)堿基的小分子RNA,能通過(guò)與靶m RNA特異性的堿基配對(duì)引起靶m RNA的降解或抑制其翻譯,從而對(duì)基因進(jìn)行轉(zhuǎn)錄后的表達(dá)調(diào)控。但對(duì)于賈第蟲(chóng)病毒是否存在microRNA尚不清楚。本研究通過(guò)Solexa高通量測(cè)序及生物信息學(xué)分析結(jié)合VMIR軟件預(yù)測(cè),初步確定5條賈第蟲(chóng)病毒候選非編碼小RNA,利用RT-PCR、Northern雜交、Dicer酶切割、熒光定量PCR等方法驗(yàn)證賈第蟲(chóng)病毒一條小RNA為賈第蟲(chóng)病毒的microRNA,命名為GLV microRNA1,其大小為22nt,尤為重要的是其位于pol蛋白編碼區(qū),這也是目前所發(fā)現(xiàn)的第一條原蟲(chóng)病毒的microRNA。熒光原位雜交試驗(yàn)顯示賈第蟲(chóng)病毒GLV microRNA1確實(shí)存在,且定位在細(xì)胞質(zhì)中,符合經(jīng)典的microRNA定位。賈第蟲(chóng)病毒microRNA功能研究通過(guò)knock-down GLV MicroRNA1,熒光定量PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)抑制GLV microRNA1后,賈第蟲(chóng)病毒拷貝數(shù)增長(zhǎng)30%左右,表明GLV microRNA1能有效控制賈第蟲(chóng)病毒的拷貝數(shù)。流式細(xì)胞術(shù)和激光共聚焦顯微鏡激光掃描共聚焦顯微鏡也顯示,轉(zhuǎn)染GLV microRNA1組賈第蟲(chóng)滋養(yǎng)體的數(shù)量及亮度均明顯下降,而轉(zhuǎn)染反義GLV microRNA1組賈第蟲(chóng)滋養(yǎng)體的數(shù)量及亮度均明顯上升。但GLV microRNA1對(duì)賈第蟲(chóng)形態(tài)和生長(zhǎng)曲線等尚未發(fā)現(xiàn)有明顯的影響。雙熒光素酶報(bào)告試驗(yàn)測(cè)定表明GLV microRNA1的靶標(biāo)gag-pol的3'UTR發(fā)揮重要作用,同時(shí)其作用方式為切割靶序列。GLV microRNA1是目前發(fā)現(xiàn)的第一條位于基因的編碼區(qū)域的microRNA。該發(fā)現(xiàn)可能進(jìn)一步拓寬了人們對(duì)非編碼RNA的生成方式認(rèn)知,即m RNA可能需要在編碼小RNA和翻譯蛋白質(zhì)之間有一個(gè)平衡,這種平衡可能是基因表達(dá)調(diào)控的一種新方式。
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S852.7

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 田明;費(fèi)菁;胡曉湘;李寧;劉娣;孟慶勇;;microRNA-1,-133,-206在鼠肌肉中的表達(dá)譜[J];中國(guó)畜牧獸醫(yī);2009年08期

2 王春梅;李慶章;;microRNA在小鼠乳腺不同發(fā)育時(shí)期差異表達(dá)譜及作用(英文)[J];遺傳學(xué)報(bào);2007年11期

3 蔡斌;李成慧;彭日荷;熊愛(ài)生;高峰;姚泉洪;章鎮(zhèn);;葡萄microRNA的計(jì)算識(shí)別[J];華北農(nóng)學(xué)報(bào);2008年S2期

4 鄒文輝;;新奇的調(diào)控分子——microRNA[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2008年34期

5 李賀;印東升;王志剛;黃飛飛;常琳琳;張志宏;;草莓不同器官中microRNA表達(dá)差異研究[J];果樹(shù)學(xué)報(bào);2009年05期

6 魏娟;吳建勇;邢朝柱;郭立平;戚廷香;王海林;;棉花MicroRNA研究進(jìn)展[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2011年15期

7 穆松;鐘金城;陳智華;徐利娟;;�；�因組per-microRNA SNP多態(tài)性[J];西北農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào);2011年10期

8 李構(gòu);張辰宇;;血清microRNA在癌癥診斷中的進(jìn)展[J];東北林業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào);2012年06期

9 李瑩;鞠輝明;白立景;李奎;敖紅;;豬microRNA-378-1過(guò)表達(dá)載體構(gòu)建及細(xì)胞水平驗(yàn)證[J];農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào);2012年08期

10 焦晶凱;莫蓓紅;高紅艷;;microRNA功能研究新進(jìn)展[J];中國(guó)畜牧獸醫(yī);2013年02期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 荊清;袁文俊;秦永文;;microRNA的基因調(diào)控新功能[A];中國(guó)生理學(xué)會(huì)第五屆全國(guó)心血管、呼吸和腎臟生理學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要匯編[C];2005年

2 靳新;駱志剛;王金華;管乃洋;;microRNA靶標(biāo)研究進(jìn)展[A];中國(guó)遺傳學(xué)會(huì)功能基因組學(xué)研討會(huì)論文集[C];2006年

3 ;Comparasion of Inhibitory Effects on Survivin Gene Expression in Prostate Cancer by Vector-based microRNA and siRNA[A];2008年全國(guó)生物化學(xué)與分子生物學(xué)學(xué)術(shù)大會(huì)論文摘要[C];2008年

4 朱丹霞;徐衛(wèi);繆扣榮;方成;朱華淵;董華潔;王冬梅;范磊;喬純;李建勇;;慢性淋巴細(xì)胞白血病microRNA異常表達(dá)研究[A];第13屆全國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)會(huì)議論文摘要[C];2011年

5 Yangchao Chen;;Small molecule modulators of microRNA-34a with anti-cancer activities[A];2013醫(yī)學(xué)前沿論壇暨第十三屆全國(guó)腫瘤藥理與化療學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2013年

6 金希;厲有名;;單純性脂變與非酒精性脂肪性肝炎間差異microRNA表達(dá)譜研究[A];2009香港-北京-杭州內(nèi)科論壇暨2009年浙江省內(nèi)科學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2009年

7 賈新正;盧肖男;聶慶華;張細(xì)權(quán);;雞部分microRNA的同源預(yù)測(cè)與克隆驗(yàn)證[A];中國(guó)動(dòng)物遺傳育種研究進(jìn)展——第十五次全國(guó)動(dòng)物遺傳育種學(xué)術(shù)討論會(huì)論文集[C];2009年

8 李炯;段德民;鄭克孝;;新型非標(biāo)記高通量microRNA芯片技術(shù)[A];第一屆全國(guó)生物物理化學(xué)會(huì)議暨生物物理化學(xué)發(fā)展戰(zhàn)略研討會(huì)論文摘要集[C];2010年

9 徐小濤;陸曉;孫婧;束永前;;肺癌側(cè)群細(xì)胞microRNA表達(dá)譜檢測(cè)及初步分析[A];2010’全國(guó)腫瘤分子標(biāo)志及應(yīng)用學(xué)術(shù)研討會(huì)暨第五屆中國(guó)中青年腫瘤專家論壇論文匯編[C];2010年

10 王俊峰;李巍;吳小江;阮康成;;大鼠附睪microRNA表達(dá)譜的研究[A];第十一次中國(guó)生物物理學(xué)術(shù)大會(huì)暨第九屆全國(guó)會(huì)員代表大會(huì)摘要集[C];2009年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 陳英云 喬蕤琳;哈醫(yī)大成功研發(fā)國(guó)內(nèi)首例microRNA轉(zhuǎn)基因及敲減小鼠模型[N];黑龍江經(jīng)濟(jì)報(bào);2010年

2 記者 陳青;2厘米以下肝癌檢出率88%[N];文匯報(bào);2011年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 崔洪亮;microRNA的腫瘤表達(dá)研究及協(xié)同調(diào)控網(wǎng)絡(luò)分析[D];中南大學(xué);2014年

2 馬建華;高粱低磷低氮形態(tài)生理特征及低氮響應(yīng)的microRNA研究[D];山西農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

3 李虔楨;microRNA相關(guān)基因遺傳多態(tài)性與冠心病臨床關(guān)聯(lián)及預(yù)后研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

4 王耀輝;血清microRNA作為乳腺癌診斷標(biāo)志物的研究[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

5 周霽子;環(huán)境因素對(duì)心臟畸形胎兒影響的表觀遣傳學(xué)機(jī)制[D];復(fù)旦大學(xué);2013年

6 張麗;microRNA通過(guò)調(diào)控小膠質(zhì)細(xì)胞炎性反應(yīng)參與血管性認(rèn)知障礙發(fā)生發(fā)展[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

7 查若鵬;肝癌轉(zhuǎn)移相關(guān)microRNA的鑒定及其分子機(jī)制研究[D];復(fù)旦大學(xué);2013年

8 方硯田;結(jié)腸癌干細(xì)胞分選、差異microRNA表達(dá)譜檢測(cè)以及miR-449b-CCND1、E2F3通路在結(jié)腸癌干細(xì)胞自我更新的機(jī)制研究[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

9 辛成齊;椰棗microRNA鑒定及其在果實(shí)發(fā)育過(guò)程中的表達(dá)譜研究[D];中國(guó)科學(xué)院北京基因組研究所;2015年

10 李棟;先天性心臟病血漿microRNA表達(dá)譜及與GATA4靶序列單核苷酸多態(tài)性的關(guān)聯(lián)研究[D];山東大學(xué);2015年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 高智紅;應(yīng)用多樣性增量方法識(shí)別人類基因組microRNA前體序列[D];內(nèi)蒙古大學(xué);2010年

2 王娜娜;microRNA進(jìn)化關(guān)系及編碼特性研究[D];內(nèi)蒙古大學(xué);2007年

3 王玫;小麥microRNA的鑒定與分析[D];南昌大學(xué);2007年

4 秦保東;原發(fā)性膽汁性肝硬化microRNA表達(dá)譜的檢測(cè)及其功能研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2013年

5 徐嬌陽(yáng);循環(huán)microRNA用于低氧性肺動(dòng)脈高壓早期診斷的實(shí)驗(yàn)研究[D];石河子大學(xué);2015年

6 余綺荷;晚期結(jié)直腸癌一線化療的臨床療效預(yù)后分析及療效相關(guān)microRNA的初步篩選[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

7 蔡雨函;乙型腦炎病毒的分離鑒定及其在microRNA水平上與PK-15細(xì)胞的相互作用研究[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

8 葉泥;山羊地方性鼻內(nèi)腺瘤microRNA的表達(dá)差異研究[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

9 李敏;活血化痰安神方對(duì)冠心病心絞痛痰瘀互結(jié)證患者臨床及microRNA研究[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2016年

10 程冉;桂枝茯苓丸加味治療子宮肌瘤的療效觀察及對(duì)血清microRNA表達(dá)譜的影響[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2016年

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本文編號(hào)：1273299