發(fā)布時(shí)間：2017-12-12 04:03

  本文關(guān)鍵詞：性類固醇激素對(duì)尼羅羅非魚雌雄生長(zhǎng)差異與生長(zhǎng)相關(guān)基因表達(dá)的影響

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【摘要】：因?yàn)榫哂猩�長(zhǎng)快、食性雜和適應(yīng)性強(qiáng)等特點(diǎn),羅非魚已成為世界重要養(yǎng)殖魚類。其雌雄生長(zhǎng)差異明顯,雄性生長(zhǎng)快、個(gè)體大,而雌性生長(zhǎng)慢、個(gè)體小;性成熟前雄魚較雌魚生長(zhǎng)快,性成熟后更加明顯,部分原因可能性有:性類固醇激素水平、生長(zhǎng)與生殖能量配置、攝食消化等差異。本論文以尼羅羅非魚為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,首先比較了性成熟前雌雄魚生長(zhǎng)特征與性類固醇激素分泌水平關(guān)系;通過體外注射性類固醇激素,分別研究了性類固醇激素對(duì)生長(zhǎng)軸相關(guān)基因、生肌因子、攝食基因的表達(dá)調(diào)節(jié)影響;最后比較了雌雄魚性類固醇激素受體表達(dá)差異,旨在為羅非魚雌雄性別生長(zhǎng)差異的調(diào)節(jié)機(jī)理研究提供資料,主要結(jié)果如下:(1)利用分子標(biāo)記法、醋酸洋紅壓片法、組織切片技術(shù)等方法進(jìn)行個(gè)體性別鑒定,比較了性成熟前期(0.5~4月齡)尼羅羅非魚雌、雄魚生長(zhǎng)差異,并檢測(cè)了2.5~4.0月齡雌、雄魚血清睪酮(T)、雌二醇(E_2)激素含量。結(jié)果發(fā)現(xiàn),雌、雄魚全長(zhǎng)、體重分別自3.0月齡、2.5月齡開始出現(xiàn)差異顯著(P0.05)。Logistic擬合全長(zhǎng)、體重生長(zhǎng)方程為:Lt(♀)=16.443/(1+e~(2.821-1.363*t)),Lt(♂)=18.248/(1+e~(2.752-1.295*t));Wt(♀)=107.704/(1+e~(5.157-1.464*t),Wt(♂)=134.796/(1+e~(5.080-1.417*t),雌、雄魚全長(zhǎng)、體重的擬合度均大于0.94,擬合效果均較好。隨著月齡增加,雌、雄魚全長(zhǎng)、體重差異逐漸增大,全長(zhǎng)生長(zhǎng)速度最大時(shí)月齡為2.069和2.125,全長(zhǎng)生長(zhǎng)曲線不具拐點(diǎn),隨著月齡的增加,逐漸趨向漸進(jìn)值;體重的拐點(diǎn)月齡為3.523和3.585,拐點(diǎn)體重值為52.352g和67.398g,雄魚體重拐點(diǎn)月齡與拐點(diǎn)體重值均大于雌魚。對(duì)Logistic方程求一階導(dǎo)數(shù)和二階導(dǎo)數(shù),分別得雌、雄魚生長(zhǎng)速度、生長(zhǎng)加速度。雌、雄魚的全長(zhǎng)、體重生長(zhǎng)速度均是先上升后下降,隨著生長(zhǎng)發(fā)育,雌、雄魚體重差異逐漸增大,體重生長(zhǎng)速度的差異也逐漸增大。雌、雄魚全長(zhǎng)、體重生長(zhǎng)加速度變化規(guī)律類似,呈上升-下降-再上升趨勢(shì)。在全長(zhǎng)生長(zhǎng)速度最大時(shí),加速度為零,此后為負(fù)值,生長(zhǎng)速度減小。體重生長(zhǎng)加速度的最大值和最小值(兩個(gè)極值)分別對(duì)應(yīng)始速點(diǎn)和終速點(diǎn),相應(yīng)分為三個(gè)時(shí)期:緩慢生長(zhǎng)期、快速生長(zhǎng)期和漸進(jìn)生長(zhǎng)期,雌魚進(jìn)入快速生長(zhǎng)期的始速點(diǎn)(2.623月齡)和終速點(diǎn)(4.422月齡)都比雄魚(2.655月齡,4.514月齡)提前,雄魚快速增長(zhǎng)期的凈增長(zhǎng)量(77.831g)和快速增長(zhǎng)期持續(xù)時(shí)間(1.859月)大于雌魚(1.799g,60.525月),雄魚體重增加顯著大于雌魚。2.5月齡之后,雌、雄魚E_2含量差異顯著(P0.05),3月齡之后,雌、雄魚T含量差異顯著(P0.05),雄魚雄激素水平高、雌激素水平低,生長(zhǎng)更快;而雌魚雄激素水平相對(duì)低,雌激素水平高,生長(zhǎng)較慢,這可能與雌、雄魚在性腺發(fā)育過程中進(jìn)行的生殖投入不同有關(guān)。推測(cè)E_2、T含量差異是引起尼羅羅非魚雌雄性別生長(zhǎng)差異的原因之一。(2)采用體外注射雌二醇、睪酮的方法結(jié)合熒光定量PCR方法,比較了E_2和T對(duì)雌雄尼羅羅非魚的生長(zhǎng)、攝食、血清性類固醇激素水平、肝臟GH-IGF生長(zhǎng)軸基因、肌肉生肌因子基因表達(dá)量的影響,結(jié)果表明:對(duì)照組雄魚較雌魚T水平更高,E_2水平更低。E_2注射后升高血清E_2水平,T注射后升高血清T水平,對(duì)照組雌魚較雄魚生長(zhǎng)率較低,E_2促進(jìn)雌魚生長(zhǎng),對(duì)雄魚生長(zhǎng)影響不明顯,T顯著促進(jìn)雄魚生長(zhǎng),對(duì)雌魚生長(zhǎng)影響不明顯;E_2顯著促進(jìn)雌魚igf1,igf2,ghr1,ghr2表達(dá);但不顯著影響雄魚igf1,igf2,一定程度降低ghr1,ghr2表達(dá)T對(duì)雄魚作用大于雌魚;顯著升高雄魚igf1,igf2,ghr1,ghr2表達(dá);升高雌魚ghr1,ghr2表達(dá),顯著降低igf2表達(dá)。E_2顯著升高雌魚myod1,myf5表達(dá)量,T顯著升高雄魚myod1,myod2,myf5表達(dá)量,E_2降低雄魚myog2,myf5表達(dá)量,不影響myod1表達(dá)量,T升高雌魚myog表達(dá)量,不顯著影響myod1,myod2表達(dá)量。性類固醇激素對(duì)GH-IGF生長(zhǎng)軸、生肌因子相關(guān)基因表達(dá)有一定的作用,這種作用表現(xiàn)出明顯的雌雄差異性,推測(cè)性雌雄類固醇激素水平不同可能是導(dǎo)致雌雄個(gè)體生長(zhǎng)差異顯著的一個(gè)重要原因。(3)攝食與消化水平是影響魚類生長(zhǎng)的重要環(huán)節(jié)。通過體外注射雌二醇(E_2)、睪酮(T),測(cè)定注射后6h、12h、24h尼羅羅非魚雌雄魚消化酶(胃蛋白酶、腸淀粉酶、腸脂肪酶)活性,并采用熒光定量PCR方法,比較腦組織ghrelin、leptin、orexin、NPY、CCK mRNA表達(dá)量的差異。結(jié)果表明,注射后24h,T顯著提高雄魚淀粉酶活性(P0.05);注射E_2和T后12h,對(duì)照組三種消化酶活性均升高,且此時(shí)對(duì)照組雄魚淀粉酶、脂肪酶活性較雌魚高(P0.05)。注射后6h、12h、24h,E_2顯著升高雌魚ghrelin、NPY mRNA表達(dá)量(P0.05),但不顯著影響雄魚,E_2降低雌魚leptin mRNA表達(dá)量,6h時(shí)E_2升高雄魚leptin mRNA表達(dá)量(P0.05),12h、24h影響不明顯;注射T顯著升高雄魚ghrelin、NPY mRNA表達(dá)量(P0.05),但不顯著影響雌魚,降低雄魚leptin mRNA表達(dá)量,6h、24h時(shí)T顯著升高雌魚leptin mRNA表達(dá)量,12h時(shí)影響不明顯;24h時(shí)E_2顯著升高雌魚orexin表達(dá)量(P0.05),其他時(shí)間點(diǎn)影響不顯著,24h時(shí)T顯著升高雄魚orexin表達(dá)量(P0.05),其他時(shí)間點(diǎn)影響不顯著;6h、12h、24h時(shí)E_2顯著降低雌魚CCK mRNA表達(dá)量,T顯著降低雄魚表達(dá)量。結(jié)果表明,E_2顯著升高雌魚、T顯著升高雄魚促攝食基因表達(dá)量降低抑制食欲基因表達(dá)量,對(duì)雌雄魚脂肪酶、蛋白酶影響不明顯,攝食基因可能參與了性類固醇激素對(duì)雌雄尼羅羅非魚生長(zhǎng)的調(diào)節(jié)。(4)采用Western-blot、免疫組化、熒光定量PCR的方法,對(duì)尼羅羅非魚雌雄魚肝臟、性腺、腸、腎臟進(jìn)行雌雄激素受體(ER、AR)基因、蛋白質(zhì)表達(dá)水平進(jìn)行了比較,Western-blot表明:性腺(精巢、卵巢)ER蛋白表達(dá)量最高,腸、腎臟中差異不明顯,雌雄魚肝臟中ER蛋白表達(dá)量差異明顯(P0.05),卵巢和精巢ER蛋白表達(dá)量差異明顯(P0.05);卵巢和精巢AR蛋白表達(dá)量差異明顯,雌雄魚腎臟AR蛋白表達(dá)量差異明顯,性腺(精巢、卵巢)AR蛋白表達(dá)量最高。免疫組化結(jié)果表明:雌雄魚性腺、腸、腎中均檢測(cè)到了ER和AR免疫陽(yáng)性反應(yīng),雌魚肝臟陽(yáng)性細(xì)胞主要分布在中央靜脈附近,雌魚肝臟未發(fā)現(xiàn)AR陽(yáng)性反應(yīng),雄魚肝臟未發(fā)現(xiàn)ER陽(yáng)性反應(yīng);雄魚腸免疫陽(yáng)性細(xì)胞主要分布在腸絨毛和腸粘膜下層;雌魚腎ER較雄魚陽(yáng)性反應(yīng)增強(qiáng),雄魚腎AR較雌魚陽(yáng)性反應(yīng)增強(qiáng),免疫陽(yáng)性反應(yīng)主要分布在腎小管中;卵巢ER陽(yáng)性細(xì)胞分布在濾泡膜周圍,且其ER陽(yáng)性反應(yīng)較雄魚明顯,精巢AR陽(yáng)性細(xì)胞分布在精小管周圍,且其AR陽(yáng)性反應(yīng)較雌魚明顯。熒光定量PCR結(jié)果表明:在四種組織中均可檢測(cè)到ER mRNA表達(dá),AR也可在四種組織中監(jiān)測(cè)到,并且在性腺中表達(dá)量最高,雄魚腸道、腎臟表達(dá)量高于肝臟。相同組織中,雌魚卵巢、肝臟ER mRNA顯著高于雄魚(P0.05);雄魚精巢、腸組織AR mRNA表達(dá)量顯著高于雌魚(P0.05)。推測(cè)肝臟處于性類固醇激素對(duì)雌雄生長(zhǎng)調(diào)節(jié)的關(guān)鍵位置,雌雄魚性腺ER差異明顯,且雌雄魚AR差異明顯,性類固醇激素受體參與性腺發(fā)育,且對(duì)雌雄生長(zhǎng)同時(shí)有調(diào)節(jié)作用。
【學(xué)位授予單位】：上海海洋大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：S917.4

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2 林苑春;葉富良;譚斌;梁妹;;溫度對(duì)尼羅羅非魚急性耐鹽性的影響[J];廣東海洋大學(xué)學(xué)報(bào);2007年04期

3 齊紅莉;沈偉良;喬秀亭;楊廣;;飼料磷和維生素D_3含量對(duì)尼羅羅非魚磷收支的影響[J];天津師范大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2010年02期

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本文編號(hào)：1281066