發(fā)布時間：2018-04-09 22:17

  本文選題：蘋果品質(zhì)　切入點：RAD測序　出處：《中國農(nóng)業(yè)大學(xué)》2015年博士論文

【摘要】：分子標記和遺傳連鎖圖譜是蘋果等多年生木本植物進行分子育種的有力工具,本試驗以‘紅玉’、‘金冠’以及‘紅玉’ב金冠’F1雜交群體為試材,利用RAD測序和重測序分子生物技術(shù)手段,進行了蘋果高密度遺傳連鎖圖譜的構(gòu)建和SNP標記的開發(fā)。 RAD測序采用EcoRI和HindⅢ分別進行酶切。構(gòu)圖時,分群LOD閾值設(shè)置為6.0,采用回歸算法和Kosambi's函數(shù)計算遺傳距離。最終,得到了一張由3441個SNP標記和297個單株組成的遺傳連鎖圖譜。其中,有2017個標記定位在了‘紅玉’的連鎖圖譜上,圖譜總長為1343.4cM,標記密度為0.67cM/標記；有1932個標記定位在了‘金冠’的連鎖圖譜上,圖譜總長為1516.0cM,標記密度為0.78cM/標記。利用該連鎖圖譜,對蘋果重要的品質(zhì)性狀進行了QTL定位。共得到12個顯著的QTL位點,其中與果實酸度相關(guān)的QTL有6個,定位在J08(3個),G08(1個),J07和J15上；2個與單果重相關(guān)的QTL分別位于J03和J05；硬度相關(guān)的2個QTL均在J11上；而與糖含量相關(guān)的2個QTL位點定位在J01和G01上。 在上述12個QTL中,貢獻率大于20%的主效QTL有8個。位于J08上與蘋果酸,檸檬酸和總酸相關(guān)的QTL,均與標記emC08.14121899緊密連鎖。qtlma.j8和qtlta.j8的LOD峰值均為7.7,貢獻率為39.1%和39.2%,而qtlcj8的LOD峰值為5.5,貢獻率為27.2%。qtlc.j15與檸檬酸相關(guān),定位在J15,峰值標記為huC15.29186826,LOD=3.6,可以解釋20.2%的表型變異。與乙酸相關(guān)的QTL位點qtla.j7,LOD=3.7,貢獻率為20.1%,連鎖標記為euLG07_014。 qtlfj1(LOD=4.3,28.8%)與果糖相關(guān),位于J01,距離其最近的標記為huC01.18233570。qtlff.j11a和qtlffj11b與果實硬度相關(guān),其中qtlff.j11a的LOD值為4.4,可解釋的表型變異為27.5%,連鎖標記為euC11.7408490和huC11.10309880。 qtlff.j11b位于標記hmC11.4173064和euC11.5719084之間,LOD=3.9,貢獻率為21.6%。 隨后對其中5個區(qū)間5cM并能夠?qū)��?yīng)到參考基因組上的QTL進行了候選基因篩選。最終,得到果實酸度候選基因17個,單果重候選基因80個以及硬度候選基因64個。對果實酸度候選基因進行表達分析,發(fā)現(xiàn)MDP0000582174(MYB4)的基因表達變化與蘋果果實酸度變化相一致。 為了深入挖掘雙親的SNP變異,分別對‘紅玉’和‘金冠’進行全基因組重測序。測序采用Illumina Hiseq2000測序平臺,pair-end雙端測序,讀長為100bp,插入片段約為500bp。在‘紅玉’中共得到了4950346個SNP位點,約210bp即有一個標記；在‘金冠’中得到了2222816個SNP位點,約293bp一個標記。雜合度分析顯示,‘紅玉’的雜合度較高,為每206bp一個雜合位點,而‘金冠’則為237一個雜合位點。 對遺傳圖譜和重測序數(shù)據(jù)綜合分析,利用PCR手段,初步證明了‘紅玉’Chr09和Chr13之間的染色體重排為Chrl3的片段復(fù)制后插入了Chr09。此外,還分析了雙親候選基因的序列差異,為基因驗證打下了基礎(chǔ)。
[Abstract]:Molecular markers and genetic linkage maps are powerful tools for molecular breeding of perennial woody plants such as apple.The construction of high density genetic linkage map of apple and the development of SNP markers were carried out by means of RAD sequencing and resequencing molecular biotechnology.RAD sequencing was performed by EcoRI and Hind 鈪，

本文編號：1728408