發(fā)布時(shí)間：2018-05-03 09:55

  本文選題：肥育豬 + 熱應(yīng)激��； 參考：《中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院》2016年博士論文

【摘要】：高溫應(yīng)激和氧化應(yīng)激是生豬生產(chǎn)中面臨的最普遍的應(yīng)激。這兩種應(yīng)激都會(huì)導(dǎo)致肥育豬生產(chǎn)性能下降,肉品質(zhì)降低。本研究首先通過(guò)肥育豬持續(xù)高溫應(yīng)激模型研究熱應(yīng)激對(duì)背最長(zhǎng)肌能量代謝及蛋白質(zhì)組的影響;其次研究熱應(yīng)激和采食量對(duì)肝臟蛋白質(zhì)組和抗氧化能力的影響。另外,利用硫辛酸(LA)具有抗氧化和促進(jìn)能量代謝的特性,通過(guò)構(gòu)建動(dòng)物和細(xì)胞氧化應(yīng)激模型,從體內(nèi)體外兩個(gè)方面探討LA是否能緩解肥育豬遭受的氧化應(yīng)激和肉品質(zhì)下降及可能的作用機(jī)制。本論文開(kāi)展了下列5項(xiàng)研究:試驗(yàn)一持續(xù)高溫應(yīng)激對(duì)肥育豬背最長(zhǎng)肌能量代謝和蛋白質(zhì)組的影響。本試驗(yàn)選取24頭體重為79.0±1.5 kg杜長(zhǎng)大(Duroc x Landrace x Yorkshire)三元雜交閹公豬,隨機(jī)分配到3個(gè)組:熱中性組(22℃)、熱應(yīng)激組(30℃)和采食量配對(duì)組(22℃),每組8頭豬,試驗(yàn)期為21 d。結(jié)果發(fā)現(xiàn):熱應(yīng)激導(dǎo)致背最長(zhǎng)肌乳酸含量顯著上升(P=0.02),極顯著提高己糖激酶和丙酮酸激酶的活性(P0.01),顯著增加了磷酸化AMPK的表達(dá)量(P=0.02);熱應(yīng)激引起背最長(zhǎng)肌蛋白質(zhì)組改變,共發(fā)現(xiàn)30個(gè)差異蛋白質(zhì)點(diǎn),15個(gè)表達(dá)量上調(diào),15個(gè)下調(diào)。這些差異蛋白參與糖代謝、肌纖維和細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)、應(yīng)激響應(yīng)、抗氧化和解毒、鈣離子結(jié)合和細(xì)胞凋亡。結(jié)果表明,熱應(yīng)激通過(guò)上調(diào)p-AMPK表達(dá),增強(qiáng)糖酵解代謝,導(dǎo)致乳酸含量升高,從而降低肌肉pH;熱應(yīng)激影響細(xì)胞程序化死亡和肌纖維蛋白質(zhì)的降解,抑制了肉的熟化過(guò)程,影響肉的嫩度。試驗(yàn)二熱應(yīng)激和采食量對(duì)肥育豬肝臟抗氧化能力和蛋白質(zhì)組的影響。本研究在試驗(yàn)一建立的熱應(yīng)激模型基礎(chǔ)上,研究持續(xù)高溫應(yīng)激對(duì)肥育豬肝臟蛋白質(zhì)組和抗氧化酶的影響。研究發(fā)現(xiàn):環(huán)境高溫和采食量都顯著降低肝臟重量和肝臟指數(shù)(P0.05)。熱應(yīng)激和采食量下降都引起肝臟蛋白質(zhì)組改變,共發(fā)現(xiàn)45個(gè)差異蛋白質(zhì)點(diǎn)。通過(guò)GO和KEGG功能和代謝通路富集,發(fā)現(xiàn)這些蛋白質(zhì)主要參與熱應(yīng)激響應(yīng)和免疫防御、氧化應(yīng)激響應(yīng)和凋亡三個(gè)生物學(xué)過(guò)程。結(jié)果表明,環(huán)境高溫而不是采食量下降引起肝細(xì)胞發(fā)生免疫應(yīng)答;為了應(yīng)對(duì)持續(xù)熱應(yīng)激,肝臟細(xì)胞形成了適應(yīng)性保護(hù)機(jī)制:通過(guò)上調(diào)熱應(yīng)激蛋白穩(wěn)定蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu);增加抗氧化酶的活力和表達(dá)量維持氧化還原平衡;增加蛋白酶體的表達(dá)量清除被氧化和錯(cuò)誤折疊的蛋白質(zhì)。試驗(yàn)三硫辛酸(LA)緩解小鼠成肌細(xì)胞(C2C12)氧化應(yīng)激的可能信號(hào)通路本研究利用H_2O_2構(gòu)建小鼠成肌細(xì)胞(C2C12)氧化應(yīng)激模型,研究LA對(duì)氧化應(yīng)激狀態(tài)下C2C12細(xì)胞增殖、抗氧化酶活性和Nrf2、P-MAPK表達(dá)量的影響。向氧化應(yīng)激C2C12細(xì)胞(H_2O_2的濃度為0.4mM)培養(yǎng)液中添加不同濃度的LA(0 mM、0.2mM、0.4 mM、0.8 mM和1.2 mM),培養(yǎng)時(shí)間為0.5 h。結(jié)果發(fā)現(xiàn):當(dāng)H_2O_2的濃度為0.4mM時(shí),與模型組(應(yīng)激組)相比,隨著LA濃度的增加,細(xì)胞增殖率、SOD酶活性、GSH含量以及Nrf2和P-MAPK表達(dá)量顯著上升(P0.05)。結(jié)果表明,應(yīng)激時(shí)間為0.5h,H_2O_2的濃度為0.4 mM,LA的濃度為:0.2 mM、0.4 mM、0.8 mM和1.2 mM時(shí)LA對(duì)H_2O_2誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激有緩解作用,且LA可能通過(guò)誘導(dǎo)Nrf2和P-MAPK表達(dá)調(diào)控抗氧化酶的合成。試驗(yàn)四硫辛酸對(duì)氧化應(yīng)激肥育豬生產(chǎn)性能和血液抗氧化酶的影響本試驗(yàn)是在試驗(yàn)三的基礎(chǔ)上,通過(guò)腹腔滴注Diquat誘導(dǎo)肥育豬氧化應(yīng)激,通過(guò)檢測(cè)LA對(duì)肥育豬生長(zhǎng)性能、血液抗氧化指標(biāo)的影響,旨在探討硫辛酸對(duì)氧化應(yīng)激造成的損傷是否有緩解作用。選用24頭體重為70.64±3.61 kg的大白閹公豬,按照體重相近的原則隨機(jī)分為2組,每組12頭,分別飼喂基礎(chǔ)日糧和添加硫辛酸日糧(800 mg/kg日糧)14 d后,再將每種日糧組的試豬隨機(jī)分為應(yīng)激組與非應(yīng)激組,應(yīng)激組靜脈滴注Diquat(8 mg/kg體重),非應(yīng)激組滴注相同劑量的生理鹽水。應(yīng)激后繼續(xù)單籠飼養(yǎng)14 d。于試驗(yàn)第29 d對(duì)所有試豬前腔靜脈采血后電擊暈懸掛屠宰取樣。結(jié)果發(fā)現(xiàn):Diquat極顯著降低肥育豬ADG、ADFI、F/G及血漿抗氧化酶(P0.01),表明豬只處于氧化應(yīng)激狀態(tài)。在非應(yīng)激狀態(tài)下,日糧添加LA對(duì)試豬生產(chǎn)性能和血漿抗氧化酶活性無(wú)顯著影響;在應(yīng)激狀態(tài)下,日糧添加LA能顯著升高血漿SOD活性(P0.05),緩解ADFI和ADG下降(P0.01)。本研究結(jié)果表明,腹腔滴注8mg/kg.BW的Diquat顯著降低試豬生產(chǎn)性能和血漿抗氧化酶活性,使試豬處于氧化應(yīng)激狀態(tài)。日糧添加LA對(duì)試豬氧化損傷有一定的緩解作用。試驗(yàn)五硫辛酸對(duì)氧化應(yīng)激肥育豬骨骼肌和肉品質(zhì)的影響及調(diào)控機(jī)制本研究是在試驗(yàn)三和試驗(yàn)四的基礎(chǔ)上,通過(guò)LA對(duì)氧化應(yīng)激肥育豬背最長(zhǎng)肌肌纖維類(lèi)型、抗氧化酶SOD活性及其表達(dá)、氧化應(yīng)激調(diào)控因子Nrf2和MAPK蛋白表達(dá)及肉品質(zhì)的影響,探討LA緩解氧化應(yīng)激對(duì)肥育豬骨骼肌和肉品質(zhì)影響的可能機(jī)制。結(jié)果發(fā)現(xiàn):注射Diquat顯著降低肥育豬宰后24 h背最長(zhǎng)肌pH值(pH24 h);添加LA極顯著升高宰后45min背最長(zhǎng)肌紅度值(a45min),和宰后24 h背最長(zhǎng)肌的黃度值(b24 h)以及剪切力(P0.01);注射Diquat顯著增加SOD酶的活性及SOD基因和蛋白表達(dá)(P0.05)。日糧添加LA顯著增加SOD基因的表達(dá)(P0.05);注射Diquat顯著降低p-p38的表達(dá)(P0.05),極顯著增加Nrf2表達(dá)(P0.01),日糧添加LA顯著降低了Nrf2的表達(dá)(P0.05)。研究結(jié)論:持續(xù)高溫應(yīng)激激活A(yù)MPK代謝通路,增加糖酵解供能,乳酸合成增加,從而增加肌肉的pH;持續(xù)高溫應(yīng)激影響宰后肌纖維蛋白的降解和骨骼肌細(xì)胞程序化死亡,延緩肉的熟化排酸,降低肉的嫩度。因此,持續(xù)高溫應(yīng)激影響肉品質(zhì)。熱應(yīng)激和采食量影響肥育豬肝臟蛋白質(zhì)組和谷胱甘肽抗氧化系統(tǒng)。高溫而不是采食量下降引起肝臟細(xì)胞免疫應(yīng)答。熱應(yīng)激引起肝臟氧化應(yīng)激,熱應(yīng)激和采食量限制都會(huì)導(dǎo)致肝臟細(xì)胞凋亡。氧化應(yīng)激降低肥育豬生產(chǎn)性能和血液抗氧化能力,日糧添加LA對(duì)氧化應(yīng)激豬有一定緩解作用。通過(guò)體外和體內(nèi)氧化應(yīng)激試驗(yàn)研究表明,LA通過(guò)調(diào)控核轉(zhuǎn)錄因子Nrf2和蛋白激酶MAPK的表達(dá),增加骨骼肌細(xì)胞抗氧化酶活性和表達(dá),從而減輕氧化應(yīng)激的危害。
[Abstract]:In this study , the effects of heat stress on the energy metabolism and protein concentration in the liver were studied . The results showed that the effects of heat stress on the energy metabolism and protein group were studied . The effect of LA on oxidative stress induced by oxidative stress was studied . The effects of LA on the activity of SOD and the expression of SOD gene and protein were studied . The results showed that the effect of LA on the activity of SOD gene and the expression of SOD gene and protein in pigs were significantly decreased ( P0.05 ) .

【學(xué)位授予單位】：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：S828

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本文編號(hào)：1838035