家蠶絲—蛹營養(yǎng)平衡的代謝組學分析及甘氨酸轉(zhuǎn)運蛋白基因BmGT1的功能研究
發(fā)布時間:2020-12-30 18:49
家蠶(Bombyx mori)是完全變態(tài)的鱗翅目昆蟲,一生經(jīng)歷卵、幼蟲、蛹和蛾四個在形態(tài)結(jié)構(gòu)和機能上完全不同的發(fā)育階段。其中, 幼蟲期是家蠶攝取食物進行生長的階段,所汲取的營養(yǎng)物質(zhì)除了完成個體的生長外,還在幼蟲末期用來合成絲蛋白以形成蠶繭,同時為蛹體的構(gòu)建儲備營養(yǎng)物質(zhì);家蠶幼蟲生民到合適的大小,遂開始吐絲結(jié)繭,并在繭層內(nèi)完成幼蟲向蛹的轉(zhuǎn)變。蛹期是幼蟲過渡到成蟲的變態(tài)階段,為生殖系統(tǒng)的發(fā)育和成蟲器官的形成提供關鍵支持。毫無疑問,蠶蛹對于家蠶的繁衍至關重要,而繭層則主要保護蠶蛹免遭自然環(huán)境危害、微生物感染和天敵獵食,同時可以用來生產(chǎn)具有重要經(jīng)濟價值的蠶絲。一個蠶繭的繭層和蠶蛹的重量通常是平衡的,如果繭層太少,不利于蠶蛹保護;而蠶蛹太小,又不利于生殖。正因為如此精妙的進化,家蠶在地球上才能生存至今。繭層和蠶蛹的平衡關系通常用繭層率來反映,該指標是指繭層重占繭重的百分比。目前,生產(chǎn)上使用的家蠶,其繭層率分布范圍大概在10%到30%之間。盡管雜交選育可以使該性狀得到一定程度的優(yōu)化,但是很難突破30%。究其原因有以下幾個方面:繭層率性狀受到遺傳調(diào)控,其遺傳穩(wěn)定性受環(huán)境影響較小,而受品種的影響相對較...
【文章來源】:西南大學重慶市 211工程院校 教育部直屬院校
【文章頁數(shù)】:136 頁
【學位級別】:博士
【文章目錄】:
摘要
ABSTRACT
第一章 文獻綜述
1.1 營養(yǎng)物質(zhì)在昆蟲體內(nèi)的轉(zhuǎn)運方式
1.2 家蠶對營養(yǎng)物質(zhì)的汲取、代謝和利用
1.2.1 家蠶的生命周期
1.2.2 家蠶所需的主要營養(yǎng)物質(zhì)
1.2.3 家蠶營養(yǎng)物質(zhì)的代謝
1.2.4 家蠶營養(yǎng)物質(zhì)的分配及利用
1.3 家蠶若干數(shù)量性狀的遺傳相關通徑分析
1.4 提高蠶絲產(chǎn)量的方法
1.5 代謝組學研究
1.5.1 代謝組學的研究流程
1.5.2 代謝組學技術(shù)的應用
第二章 引言
2.1 研究背景
2.2 研究目的及意義
2.3 主要研究內(nèi)容
2.3.1 自然條件下家蠶絲-蛹營養(yǎng)失衡的血淋巴代謝組學
2.3.2 人為阻礙絲合成導致家蠶絲-蛹營養(yǎng)失衡的血淋巴代謝組學
2.3.3 家蠶絲素重鏈(Bmfib-H)基因敲除組脂肪體的蛋白質(zhì)組學分析
2.3.4 生物學功能驗證
2.4 技術(shù)路線
第三章 家蠶絲-蛹營養(yǎng)失衡突變體血淋巴代謝組學分析
3.1 材料與方法
3.1.1 家蠶的飼養(yǎng)和樣本準備
3.1.2 主要試劑耗材及儀器設備
3.1.3 主要溶液及配制
3.1.4 實驗方法
3.2 結(jié)果與分析
3.2.1 家蠶不同品種經(jīng)濟性狀調(diào)查
3.2.2 家蠶三個品種糖、脂、蛋白質(zhì)和ATP含量測定
3.2.3 家蠶血淋巴代謝指紋GC-MS分析方法的表征
3.2.4 家蠶血淋巴代謝指紋中代謝物結(jié)構(gòu)鑒定
3.2.5 家蠶Nd、Dazao和21-872血淋巴的代謝組學分析
3.3 討論
第四章 人為阻礙絲合成導致絲-蛹營養(yǎng)失衡的代謝組學研究
4.1 材料與方法
4.1.1 樣本準備
4.1.2 主要試劑耗材及儀器設備
4.1.3 實驗方法
4.2 結(jié)果與分析
4.2.1 Bmfib-H基因敲除或摘除絲腺后家蠶經(jīng)濟性狀調(diào)查
4.2.2 Bmfib-H基因敲除或摘除絲腺血淋巴PLS-DA分析
4.2.3 Bmfib-H基因敲除或摘除絲腺血淋巴差異代謝物的篩選與分析
4.2.4 Bmfib-H基因敲除組差異代謝的相關網(wǎng)絡分析
4.2.5 三組實驗差異代謝物的整合以及代謝途徑的分析
4.3 討論
第五章 家蠶FGKO組脂肪體的蛋白質(zhì)組學研究
5.1 材料與方法
5.1.1 家蠶的飼養(yǎng)和樣本準備
5.1.2 主要試劑耗材及儀器設備
5.1.3 主要溶液及配制
5.1.4 實驗方法
5.2 結(jié)果與分析
5.2.1 蛋白質(zhì)的SDS-PAGE檢測
5.2.2 蛋白質(zhì)的等電點和分子量分析
5.2.3 蛋白質(zhì)的功能聚類分析
5.2.4 蛋白種類的豐度分析
5.2.5 蛋白質(zhì)的LFQ分析
5.2.7 差異蛋白質(zhì)的代謝通路分析
5.2.8 脂肪體中糖原和蛋白質(zhì)含量測定
5.3 討論
第六章 家蠶甘氨酸轉(zhuǎn)運蛋白基因BmGT1的功能探索
6.1 材料與方法
6.1.1 家蠶的飼養(yǎng)和樣本準備
6.1.2 主要試劑耗材及儀器設備
6.1.3 主要溶液及配制
6.1.4 實驗方法及步驟
6.2 結(jié)果與分析
6.2.1 關鍵代謝物對繭層率的影響
6.2.2 甘氨酸轉(zhuǎn)運蛋白基因及甘氨酸-絲氨酸合成途徑酶的qPCR分析
6.2.3 家蠶甘氨酸轉(zhuǎn)運蛋白基因的生物信息分析
6.2.4 細胞水平添加甘氨酸或ACPC
6.2.5 細胞水平干涉家蠶甘氨酸轉(zhuǎn)運蛋白基因
6.2.6 細胞水平過量表達家蠶甘氨酸轉(zhuǎn)運蛋白基因
6.2.7 甘氨酸轉(zhuǎn)運蛋白抑制劑處理家蠶
6.3 討論
第七章 綜合與結(jié)論
論文的創(chuàng)新點
參考文獻
附錄
在讀期間發(fā)表論文及參與課題
致謝
【參考文獻】:
期刊論文
[1]蒽酮-硫酸法測定靈芝破壁孢子粉中多糖含量的研究[J]. 許玲,李曄,黃晉之,宋玉娥. 海峽藥學. 2009(07)
[2]代謝組學研究進展[J]. 許國旺,路鑫,楊勝利. 中國醫(yī)學科學院學報. 2007(06)
[3]氣相色譜衍生試劑的研究進展[J]. 楊小玲. 中國科技信息. 2005(07)
[4]非蛋白氨基酸ACC對動物的生理作用[J]. 朱旭祥,徐俊良. 科技通報. 1991(04)
[5]家蠶若干數(shù)量性狀的遺傳通徑網(wǎng)絡[J]. 楊明觀,鐘伯雄. 蠶業(yè)科學. 1987(04)
[6]家蠶幼蟲血液中海藻糖含量及其酶的活性測定[J]. 趙祖康. 蠶業(yè)科學. 1983(03)
[7]植源性蛻皮激素對家蠶后部絲腺谷氨酸—丙酮酸轉(zhuǎn)氨酶活力的影響(初報)[J]. 李瑞,戴玉錦,朱江,金琇玨,李才蓉. 蠶業(yè)科學. 1982(02)
[8]昆蟲激素調(diào)節(jié)控制的研究——保幼激素類似物對合成甘氨酸和丙氨酸有關酶系的調(diào)節(jié)控制[J]. 林浩,戴祝英,鄒柏祥,許廷森. Acta Biochimica et Biophysica Sinica. 1980(04)
[9]保幼激素類似物對家蠶氨基酸代謝一些酶的影響[J]. 許廷森,戴祝英,莊大桓,項美華,鄒柏祥,林浩. 蠶業(yè)科學. 1979(04)
博士論文
[1]家蠶分子圖譜的構(gòu)建及繭質(zhì)性狀的QTL定位研究[D]. 司馬楊虎.西南農(nóng)業(yè)大學 2003
本文編號:2948125
【文章來源】:西南大學重慶市 211工程院校 教育部直屬院校
【文章頁數(shù)】:136 頁
【學位級別】:博士
【文章目錄】:
摘要
ABSTRACT
第一章 文獻綜述
1.1 營養(yǎng)物質(zhì)在昆蟲體內(nèi)的轉(zhuǎn)運方式
1.2 家蠶對營養(yǎng)物質(zhì)的汲取、代謝和利用
1.2.1 家蠶的生命周期
1.2.2 家蠶所需的主要營養(yǎng)物質(zhì)
1.2.3 家蠶營養(yǎng)物質(zhì)的代謝
1.2.4 家蠶營養(yǎng)物質(zhì)的分配及利用
1.3 家蠶若干數(shù)量性狀的遺傳相關通徑分析
1.4 提高蠶絲產(chǎn)量的方法
1.5 代謝組學研究
1.5.1 代謝組學的研究流程
1.5.2 代謝組學技術(shù)的應用
第二章 引言
2.1 研究背景
2.2 研究目的及意義
2.3 主要研究內(nèi)容
2.3.1 自然條件下家蠶絲-蛹營養(yǎng)失衡的血淋巴代謝組學
2.3.2 人為阻礙絲合成導致家蠶絲-蛹營養(yǎng)失衡的血淋巴代謝組學
2.3.3 家蠶絲素重鏈(Bmfib-H)基因敲除組脂肪體的蛋白質(zhì)組學分析
2.3.4 生物學功能驗證
2.4 技術(shù)路線
第三章 家蠶絲-蛹營養(yǎng)失衡突變體血淋巴代謝組學分析
3.1 材料與方法
3.1.1 家蠶的飼養(yǎng)和樣本準備
3.1.2 主要試劑耗材及儀器設備
3.1.3 主要溶液及配制
3.1.4 實驗方法
3.2 結(jié)果與分析
3.2.1 家蠶不同品種經(jīng)濟性狀調(diào)查
3.2.2 家蠶三個品種糖、脂、蛋白質(zhì)和ATP含量測定
3.2.3 家蠶血淋巴代謝指紋GC-MS分析方法的表征
3.2.4 家蠶血淋巴代謝指紋中代謝物結(jié)構(gòu)鑒定
3.2.5 家蠶Nd、Dazao和21-872血淋巴的代謝組學分析
3.3 討論
第四章 人為阻礙絲合成導致絲-蛹營養(yǎng)失衡的代謝組學研究
4.1 材料與方法
4.1.1 樣本準備
4.1.2 主要試劑耗材及儀器設備
4.1.3 實驗方法
4.2 結(jié)果與分析
4.2.1 Bmfib-H基因敲除或摘除絲腺后家蠶經(jīng)濟性狀調(diào)查
4.2.2 Bmfib-H基因敲除或摘除絲腺血淋巴PLS-DA分析
4.2.3 Bmfib-H基因敲除或摘除絲腺血淋巴差異代謝物的篩選與分析
4.2.4 Bmfib-H基因敲除組差異代謝的相關網(wǎng)絡分析
4.2.5 三組實驗差異代謝物的整合以及代謝途徑的分析
4.3 討論
第五章 家蠶FGKO組脂肪體的蛋白質(zhì)組學研究
5.1 材料與方法
5.1.1 家蠶的飼養(yǎng)和樣本準備
5.1.2 主要試劑耗材及儀器設備
5.1.3 主要溶液及配制
5.1.4 實驗方法
5.2 結(jié)果與分析
5.2.1 蛋白質(zhì)的SDS-PAGE檢測
5.2.2 蛋白質(zhì)的等電點和分子量分析
5.2.3 蛋白質(zhì)的功能聚類分析
5.2.4 蛋白種類的豐度分析
5.2.5 蛋白質(zhì)的LFQ分析
5.2.7 差異蛋白質(zhì)的代謝通路分析
5.2.8 脂肪體中糖原和蛋白質(zhì)含量測定
5.3 討論
第六章 家蠶甘氨酸轉(zhuǎn)運蛋白基因BmGT1的功能探索
6.1 材料與方法
6.1.1 家蠶的飼養(yǎng)和樣本準備
6.1.2 主要試劑耗材及儀器設備
6.1.3 主要溶液及配制
6.1.4 實驗方法及步驟
6.2 結(jié)果與分析
6.2.1 關鍵代謝物對繭層率的影響
6.2.2 甘氨酸轉(zhuǎn)運蛋白基因及甘氨酸-絲氨酸合成途徑酶的qPCR分析
6.2.3 家蠶甘氨酸轉(zhuǎn)運蛋白基因的生物信息分析
6.2.4 細胞水平添加甘氨酸或ACPC
6.2.5 細胞水平干涉家蠶甘氨酸轉(zhuǎn)運蛋白基因
6.2.6 細胞水平過量表達家蠶甘氨酸轉(zhuǎn)運蛋白基因
6.2.7 甘氨酸轉(zhuǎn)運蛋白抑制劑處理家蠶
6.3 討論
第七章 綜合與結(jié)論
論文的創(chuàng)新點
參考文獻
附錄
在讀期間發(fā)表論文及參與課題
致謝
【參考文獻】:
期刊論文
[1]蒽酮-硫酸法測定靈芝破壁孢子粉中多糖含量的研究[J]. 許玲,李曄,黃晉之,宋玉娥. 海峽藥學. 2009(07)
[2]代謝組學研究進展[J]. 許國旺,路鑫,楊勝利. 中國醫(yī)學科學院學報. 2007(06)
[3]氣相色譜衍生試劑的研究進展[J]. 楊小玲. 中國科技信息. 2005(07)
[4]非蛋白氨基酸ACC對動物的生理作用[J]. 朱旭祥,徐俊良. 科技通報. 1991(04)
[5]家蠶若干數(shù)量性狀的遺傳通徑網(wǎng)絡[J]. 楊明觀,鐘伯雄. 蠶業(yè)科學. 1987(04)
[6]家蠶幼蟲血液中海藻糖含量及其酶的活性測定[J]. 趙祖康. 蠶業(yè)科學. 1983(03)
[7]植源性蛻皮激素對家蠶后部絲腺谷氨酸—丙酮酸轉(zhuǎn)氨酶活力的影響(初報)[J]. 李瑞,戴玉錦,朱江,金琇玨,李才蓉. 蠶業(yè)科學. 1982(02)
[8]昆蟲激素調(diào)節(jié)控制的研究——保幼激素類似物對合成甘氨酸和丙氨酸有關酶系的調(diào)節(jié)控制[J]. 林浩,戴祝英,鄒柏祥,許廷森. Acta Biochimica et Biophysica Sinica. 1980(04)
[9]保幼激素類似物對家蠶氨基酸代謝一些酶的影響[J]. 許廷森,戴祝英,莊大桓,項美華,鄒柏祥,林浩. 蠶業(yè)科學. 1979(04)
博士論文
[1]家蠶分子圖譜的構(gòu)建及繭質(zhì)性狀的QTL定位研究[D]. 司馬楊虎.西南農(nóng)業(yè)大學 2003
本文編號:2948125
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