發(fā)布時(shí)間：2020-12-07 23:59

　　六價(jià)鉻Cr（VI）是金屬鉻多種價(jià)態(tài)之一。研究表明,六價(jià)鉻在所有價(jià)態(tài)中毒性最強(qiáng),具有皮膚黏膜腐蝕性和致癌性,能夠引起機(jī)體的肝損傷和細(xì)胞損傷。ATF-6是內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上的三大感受蛋白之一,作為ER應(yīng)激的近端傳感器能夠引起細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)未折疊蛋白反應(yīng)的發(fā)生。同時(shí)ATF-6也是內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡途徑中的一個(gè)重要的調(diào)節(jié)因子,能夠激活多種內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激和凋亡相關(guān)蛋白的轉(zhuǎn)錄與表達(dá)。細(xì)胞凋亡通常被稱為I型程序性死亡,是一種細(xì)胞在生理或病理?xiàng)l件下程序性的主動(dòng)死亡模式。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)是細(xì)胞穩(wěn)態(tài)的重要因素,線粒體是細(xì)胞凋亡調(diào)節(jié)的重要中樞,兩者在細(xì)胞凋亡過(guò)程中都有著十分重要的作用。本研究旨在探討ATF6對(duì)Cr（VI）誘導(dǎo)的DF-1細(xì)胞凋亡的調(diào)控作用,并通過(guò)siRNA干擾ATF6表達(dá)從而抑制細(xì)胞凋亡,為Cr（VI）中毒病的解毒劑篩選提供理論依據(jù)。將DF-1細(xì)胞暴露于不同濃度的Cr（VI）中建立細(xì)胞毒性和細(xì)胞凋亡模型。通過(guò)CCK-8試劑盒測(cè)定DF-1的細(xì)胞活力,結(jié)果顯示Cr（VI）處理DF-1細(xì)胞可以誘導(dǎo)DF-1細(xì)胞以時(shí)間和劑量依賴性方式發(fā)生細(xì)胞損傷,使用150μM的Cr（VI）處理細(xì)胞8小時(shí)的抑制率為49.3%。通過(guò)Hoechs... 

【文章來(lái)源】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)山東省

【文章頁(yè)數(shù)】：58 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

六價(jià)鉻誘導(dǎo)的DF-1細(xì)胞損傷Figure1.Cr(VI)-inducedinsulttoDF-1cells.

ATF-6調(diào)控Cr(VI)誘導(dǎo)DF1細(xì)胞凋亡的機(jī)理研究18圖2.不同處理?xiàng)l件的六價(jià)鉻對(duì)DF-1細(xì)胞活力影響Figure2EffectofCr(VI)ontheactivityofDF-1cellsunderdifferenttreatmentconditions注：與對(duì)照組相比較。不同字母間P<0.05，表示差異顯著。Comparedwiththecontrolgroup.Betweendifferentletters，P<0.05indicatessignificantdifference.3.2Cr(VI)對(duì)DF-1細(xì)胞形態(tài)與核形態(tài)的影響為了研究Cr(VI)對(duì)DF-1細(xì)胞凋亡形態(tài)的影響，使用不同濃度Cr(VI)處理DF-1細(xì)胞8小時(shí)，15μMCCCP處理細(xì)胞8小時(shí)作為陽(yáng)性對(duì)照組。細(xì)胞處理后使用光學(xué)顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)，使用Hoechst33342試劑進(jìn)行細(xì)胞核染色，置于激光共聚焦顯微鏡下觀察細(xì)胞核形態(tài)變化。圖3A中可見(jiàn)，在分別使用100μMCr(VI)和200μMCr(VI)單獨(dú)處理細(xì)胞8小時(shí)后，觀察到細(xì)胞形態(tài)發(fā)生顯著變化，包括細(xì)胞皺縮，懸浮以及數(shù)量減少等。并且這種變化在200μMCr(VI)處理時(shí)更加明顯，并且與陽(yáng)性對(duì)照組(15μMCCCP)處理后變化相同。在圖3B中，用Cr(VI)處理后細(xì)胞核形態(tài)發(fā)生明顯的改變，表現(xiàn)為核濃縮，核內(nèi)陷以及核碎片的出現(xiàn)。同樣的，相較于100μMCr(VI)處理組，200μMCr(VI)處理組核變形現(xiàn)象增多更為明顯。對(duì)核形變細(xì)胞進(jìn)行定量分析，結(jié)果如圖4所示，與對(duì)照組相比100μMCr(VI)處理組核損傷細(xì)胞顯著增多(P<0.01)。與100μMCr(VI)處理組相比，200μMCr(VI)處理組中核損傷細(xì)胞數(shù)量顯著增多(P<0.01)。以上結(jié)果表明，Cr(VI)能夠誘導(dǎo)細(xì)胞形態(tài)發(fā)生改變并造成細(xì)胞核損傷，并且呈濃度依賴性。

山東農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士專業(yè)學(xué)位論文19圖3.六價(jià)鉻誘導(dǎo)DF-1細(xì)胞形態(tài)變化(200×)Figure3.Cr(VI)inducesmorphologicalchangesinDF-1cells(200×)

【參考文獻(xiàn)】：
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本文編號(hào)：2904104