FGF23對雞成骨細胞礦化的作用及其分子機理
發(fā)布時間：2020-12-08 17:29
磷對家禽生產(chǎn)至關(guān)重要,不僅能促進骨骼的正常生長發(fā)育,還能保證良好的蛋殼品質(zhì)。作為骨源性激素,成纖維細胞生長因子23（Fibroblast growth factor 23,FGF23）能夠抑制哺乳動物腎臟中磷酸鹽的重吸收,促進磷酸鹽的排出,是機體內(nèi)調(diào)控磷代謝的關(guān)鍵因子。因此研究FGF23如何調(diào)控家禽磷代謝及其骨骼發(fā)育,對深入了解FGF23作用機制以及生產(chǎn)實踐有重要意義。本論文研究了影響雞成骨細胞FGF23 mRNA表達的因素以及過表達FGF23腺病毒對成骨細胞礦化的影響,初步確定了FGF23在調(diào)控雞成骨細胞礦化的中的作用。1.調(diào)控雞成骨細胞FGF23表達的因素分析體外培養(yǎng)雞骨髓間充質(zhì)干細胞（Bone marrow stem cells,BMSCs）,并誘導(dǎo)其分化為成骨細胞。在誘導(dǎo)細胞分化的第8天,使用茜素紅S染色,可以觀察到大量紅色礦化結(jié)節(jié),表明大多BMSCs已經(jīng)被誘導(dǎo)分化為成骨細胞。為了探究影響成骨細胞FGF23表達的因素,使用β-甘油磷酸鈉（β-glycerol phosphate disodium salt,β-Gly,5mM、10M、20mM）、氯化鈣（Calcium chlo...
【文章來源】： 呂正天 山東農(nóng)業(yè)大學(xué)
【文章頁數(shù)】：79 頁
【學(xué)位級別】：碩士
【部分圖文】：
總RNA電泳圖
FGF23對雞成骨細胞礦化的作用及其分子機理20標(biāo)準(zhǔn)曲線：隨機取對照組、不同處理組的cDNA混合，制作5個濃度梯度（依次進行5×倍比稀釋）：1×、5×、25×、125×、625×。按照上述PCR步驟進行擴增，得到管家基因和個目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線（本論文中管家基因為β-actin，如圖2-3）。根據(jù)斜率（k）計算擴增效率，計算公式為：擴增效率e=101/(-k)-1。標(biāo)準(zhǔn)曲線中斜率k在-3至-3.5之間，RT-PCR的擴增效率在0.9-1.1之間時，說明引物擴增效果最佳。當(dāng)目的基因的擴增效率和持家基因的擴增效率相同時（即二者的斜率相差不超過0.2），以β-actin的表達水平作為內(nèi)參，采用“平均相對表達量=2-△△Ct”計算該基因的相對表達量。為了消除不同PCR板之間的差異，每個批次擴增目的基因的同時都會添加管家基因，而且每個樣品作兩個重復(fù)，即每個樣品可得到兩個Ct值，取兩個Ct值計算平均值來作為該樣品的Ct值進行分析統(tǒng)計。圖2-2Real-TimePCR反應(yīng)條件Fig2-2ThermalcyclerprotocolofReal-TimePCR圖2-3β-actin擴增曲線Figure2-3Amplificationcurveofβ-actin
FGF23對雞成骨細胞礦化的作用及其分子機理20標(biāo)準(zhǔn)曲線：隨機取對照組、不同處理組的cDNA混合，制作5個濃度梯度（依次進行5×倍比稀釋）：1×、5×、25×、125×、625×。按照上述PCR步驟進行擴增，得到管家基因和個目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線（本論文中管家基因為β-actin，如圖2-3）。根據(jù)斜率（k）計算擴增效率，計算公式為：擴增效率e=101/(-k)-1。標(biāo)準(zhǔn)曲線中斜率k在-3至-3.5之間，RT-PCR的擴增效率在0.9-1.1之間時，說明引物擴增效果最佳。當(dāng)目的基因的擴增效率和持家基因的擴增效率相同時（即二者的斜率相差不超過0.2），以β-actin的表達水平作為內(nèi)參，采用“平均相對表達量=2-△△Ct”計算該基因的相對表達量。為了消除不同PCR板之間的差異，每個批次擴增目的基因的同時都會添加管家基因，而且每個樣品作兩個重復(fù)，即每個樣品可得到兩個Ct值，取兩個Ct值計算平均值來作為該樣品的Ct值進行分析統(tǒng)計。圖2-2Real-TimePCR反應(yīng)條件Fig2-2ThermalcyclerprotocolofReal-TimePCR圖2-3β-actin擴增曲線Figure2-3Amplificationcurveofβ-actin
【參考文獻】：
期刊論文
[1]蛋雞缺磷癥的誘因、癥狀及治療措施[J]. 賈飛. 中國畜禽種業(yè). 2019(07)
[2]Decreased osteogenesis of adult mesenchymal stem cel s by reactive oxygen species under cyclic stretch: a possible mechanism of age related osteoporosis[J]. Jiali Tan,Xin Xu,Zhongchun Tong,Jiong lin,Qiujun Yu,Yao Lin,Wei Kuang. Bone Research. 2015(01)
[3]家禽磷營養(yǎng)研究進展與應(yīng)用[J]. 韓進誠,王玉玲,王家慶,施傳信,姚軍虎. 飼料工業(yè). 2009(15)
[4]植酸磷和植酸酶研究進展[J]. 賀建華. 動物營養(yǎng)學(xué)報. 2005(01)
本文編號：2905416
【文章來源】： 呂正天 山東農(nóng)業(yè)大學(xué)
【文章頁數(shù)】：79 頁
【學(xué)位級別】：碩士
【部分圖文】：
總RNA電泳圖
FGF23對雞成骨細胞礦化的作用及其分子機理20標(biāo)準(zhǔn)曲線：隨機取對照組、不同處理組的cDNA混合，制作5個濃度梯度（依次進行5×倍比稀釋）：1×、5×、25×、125×、625×。按照上述PCR步驟進行擴增，得到管家基因和個目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線（本論文中管家基因為β-actin，如圖2-3）。根據(jù)斜率（k）計算擴增效率，計算公式為：擴增效率e=101/(-k)-1。標(biāo)準(zhǔn)曲線中斜率k在-3至-3.5之間，RT-PCR的擴增效率在0.9-1.1之間時，說明引物擴增效果最佳。當(dāng)目的基因的擴增效率和持家基因的擴增效率相同時（即二者的斜率相差不超過0.2），以β-actin的表達水平作為內(nèi)參，采用“平均相對表達量=2-△△Ct”計算該基因的相對表達量。為了消除不同PCR板之間的差異，每個批次擴增目的基因的同時都會添加管家基因，而且每個樣品作兩個重復(fù)，即每個樣品可得到兩個Ct值，取兩個Ct值計算平均值來作為該樣品的Ct值進行分析統(tǒng)計。圖2-2Real-TimePCR反應(yīng)條件Fig2-2ThermalcyclerprotocolofReal-TimePCR圖2-3β-actin擴增曲線Figure2-3Amplificationcurveofβ-actin
FGF23對雞成骨細胞礦化的作用及其分子機理20標(biāo)準(zhǔn)曲線：隨機取對照組、不同處理組的cDNA混合，制作5個濃度梯度（依次進行5×倍比稀釋）：1×、5×、25×、125×、625×。按照上述PCR步驟進行擴增，得到管家基因和個目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線（本論文中管家基因為β-actin，如圖2-3）。根據(jù)斜率（k）計算擴增效率，計算公式為：擴增效率e=101/(-k)-1。標(biāo)準(zhǔn)曲線中斜率k在-3至-3.5之間，RT-PCR的擴增效率在0.9-1.1之間時，說明引物擴增效果最佳。當(dāng)目的基因的擴增效率和持家基因的擴增效率相同時（即二者的斜率相差不超過0.2），以β-actin的表達水平作為內(nèi)參，采用“平均相對表達量=2-△△Ct”計算該基因的相對表達量。為了消除不同PCR板之間的差異，每個批次擴增目的基因的同時都會添加管家基因，而且每個樣品作兩個重復(fù)，即每個樣品可得到兩個Ct值，取兩個Ct值計算平均值來作為該樣品的Ct值進行分析統(tǒng)計。圖2-2Real-TimePCR反應(yīng)條件Fig2-2ThermalcyclerprotocolofReal-TimePCR圖2-3β-actin擴增曲線Figure2-3Amplificationcurveofβ-actin
【參考文獻】：
期刊論文
[1]蛋雞缺磷癥的誘因、癥狀及治療措施[J]. 賈飛. 中國畜禽種業(yè). 2019(07)
[2]Decreased osteogenesis of adult mesenchymal stem cel s by reactive oxygen species under cyclic stretch: a possible mechanism of age related osteoporosis[J]. Jiali Tan,Xin Xu,Zhongchun Tong,Jiong lin,Qiujun Yu,Yao Lin,Wei Kuang. Bone Research. 2015(01)
[3]家禽磷營養(yǎng)研究進展與應(yīng)用[J]. 韓進誠,王玉玲,王家慶,施傳信,姚軍虎. 飼料工業(yè). 2009(15)
[4]植酸磷和植酸酶研究進展[J]. 賀建華. 動物營養(yǎng)學(xué)報. 2005(01)
本文編號：2905416
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