發(fā)布時(shí)間：2020-12-16 22:00

　　露濕漆斑菌發(fā)酵4天后，從發(fā)酵液中通過(guò)鹽析、透析濃縮、SephadexG—100凝膠柱層析，分離純化出膽紅素氧化酶，通過(guò)SDS-聚丙烯酰胺電泳鑒定，顯示為一條帶，分子量為68kDa左右。通過(guò)紫外誘變選育到兩株產(chǎn)酶能力稍高的菌株，其產(chǎn)酶能力是原先的1.5～2倍。該酶在37℃以膽紅素為底物的Km值為150μmol／L，最適反應(yīng)溫度為50℃，從60℃開(kāi)始酶的穩(wěn)定性變差。該酶在pH7.5時(shí)酶促反應(yīng)最快，酸堿穩(wěn)定性較高，金屬離子對(duì)酶促反應(yīng)有很大影響，EDTA、尿素等能提高酶促反應(yīng)。利用膽紅素氧化酶可用來(lái)測(cè)定膽紅素含量，進(jìn)行總膽紅素測(cè)定實(shí)驗(yàn)時(shí)表明該酶用于診斷具有線性范圍較寬、準(zhǔn)確性和精密度都較好，可為黃疸等肝膽疾病的診斷提供可靠的依據(jù)。 

【文章來(lái)源】：南京理工大學(xué)江蘇省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：42 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
1 引言
    1.1 生物技術(shù)和醫(yī)學(xué)診斷
    1.2 酶診斷試劑
    1.3 膽紅素的性質(zhì)和測(cè)定方法
        1.3.1 膽紅素的性質(zhì)
        1.3.2 膽紅素的測(cè)定方法
    1.4 膽紅素氧化酶的研究概況
        1.4.1 膽紅素氧化酶的來(lái)源
        1.4.2 膽紅素氧化酶組成和性質(zhì)
        1.4.3 膽紅素氧化酶的其它應(yīng)用
        1.4.4 膽紅素氧化酶的分子生物學(xué)研究進(jìn)展
    1.5 本課題的研究思路和意義
2 材料和方法
    2.1 材料
        2.1.1 生化試劑
        2.1.2 其他化學(xué)試劑
        2.1.3 常用溶液及配法
        2.1.4 儀器設(shè)備
        2.1.5 菌種來(lái)源
    2.2 方法
        2.2.1 培養(yǎng)基的制作
        2.2.2 培養(yǎng)方法
        2.2.3 膽紅素氧化酶的酶活測(cè)定
        2.2.4 膽紅素氧化酶的分離純化
        2.2.5 膽紅素氧化酶性質(zhì)的研究
        2.2.6 膽紅素氧化酶測(cè)定總膽紅素的質(zhì)量評(píng)價(jià)
        2.2.7 菌株的紫外誘變
3 結(jié)果與分析
    3.1 菌株的培養(yǎng)
        3.1.1 產(chǎn)酶菌的觀察
        3.1.2 發(fā)酵培養(yǎng)的分析結(jié)果
    3.2 膽紅素氧化酶的分離純化
    3.3 膽紅素氧化酶的性質(zhì)初步研究
        3.3.1 膽紅素氧化酶的Km值
        3.3.2 膽紅素氧化酶的最適pH和酸堿穩(wěn)定性
        3.3.3 膽紅素氧化酶的反應(yīng)最適溫度和熱穩(wěn)定性
        3.3.4 幾種金屬離子和有機(jī)物對(duì)酶活的影響
    3.4 膽紅素氧化酶測(cè)定總膽紅素的質(zhì)量評(píng)價(jià)
        3.4.1 線性范圍
        3.4.2 準(zhǔn)確度與精密度實(shí)驗(yàn)
    3.5 紫外誘變結(jié)果
4 討論
    4.1 最佳發(fā)酵時(shí)間的確定
    4.2 膽紅素氧化酶酶活測(cè)定
    4.3 膽紅素氧化酶的分離純化
    4.4 膽紅素氧化酶的鑒定
    4.5 膽紅素氧化酶的性質(zhì)研究
    4.6 膽紅素氧化酶用于測(cè)定總膽的質(zhì)量評(píng)價(jià)
    4.7 菌株的紫外誘變實(shí)驗(yàn)
    4.8 膽紅素氧化酶的研究前景
結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)



本文編號(hào)：2920849