發(fā)布時(shí)間：2020-12-27 07:11

　　腮腺炎病毒（MuV）同其他囊膜病毒相似，在融合蛋白（F）中具有兩個(gè)七肽重復(fù)序列結(jié)構(gòu)域（HR）。有關(guān)其他囊膜病毒F蛋白的研究表明，HR區(qū)在F蛋白介導(dǎo)的病毒侵染中起著至關(guān)重要的作用，在結(jié)合蛋白或結(jié)合亞基的協(xié)助作用下，兩段HR結(jié)構(gòu)域的構(gòu)像發(fā)生變化形成熱穩(wěn)定的富含α螺旋的發(fā)夾異源三聚體結(jié)構(gòu)，并由此得到一個(gè)共同的融合機(jī)制。但目前并不清楚MuV是否有類似于其他囊膜病毒的侵染機(jī)制。 本研究構(gòu)建了HR區(qū)（HR1、HR2和2-Helix）的重組載體，并在大腸桿菌中以融合蛋白的形式表達(dá)了HR1、HR2和2-Helix。GST融合的HR1、HR2和2-Helix單體蛋白都以可溶形式表達(dá)，利用親和層析及凝膠過濾層析純化獲得了高純度的目的蛋白。經(jīng)pull-down實(shí)驗(yàn)，初步證實(shí)HR1和HR2之間存在相互作用，HR1和HR2的混合物在凝膠過濾層析中以聚體形式存在。HR1／HR2和2-Helix的化學(xué)交聯(lián)實(shí)驗(yàn)表明，等摩爾的HR1和HR2可形成異源三聚體，其中2-Helix蛋白隨著交聯(lián)劑濃度的增加，呈現(xiàn)明顯的單體和聚體的濃度梯度；HR1／HR2蛋白由于濃度較低雖未見清晰的單體和聚體的濃度梯度，但仍可看到明顯的異... 

【文章來源】：浙江大學(xué)浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：69 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖上分別為B、c所對(duì)應(yīng)的一級(jí)結(jié)構(gòu)示意圖.在由激活前向激活后狀態(tài)的轉(zhuǎn)變過

這時(shí)的N一pePtide被暴露出來，使得合成的c一pePtide可以與之結(jié)合，假設(shè)這種結(jié)不可逆的，便可使即41失去融合活性。許多試驗(yàn)結(jié)果都支持發(fā)卡前體中間態(tài)的比如，c一pePtide必須在有宿主細(xì)胞存在的情況下才能發(fā)揮作用。若病毒先與C一pe預(yù)作用，而后在加入靶細(xì)胞膜前除去C一pePtide，病毒的感染就不能被抑制190】，并著抗原表位的c一pePtide只能對(duì)有cD4存在情況下的gP41進(jìn)行免疫沉淀。這說體介導(dǎo)的構(gòu)象變化對(duì)N一pePtide區(qū)的暴露是必須的[90〕。c一pePtide的抑制動(dòng)力學(xué)顯個(gè)短暫的中間態(tài)可能維持?jǐn)?shù)分鐘[2’，24]。受體結(jié)合引發(fā)的構(gòu)象變化在1分鐘內(nèi)就開1391，而c一pePtide在受體結(jié)合后巧min加入仍有抑制活性[92]。流感病毒HA可能在一個(gè)瞬時(shí)中間態(tài)[5，8]，但還需進(jìn)一步驗(yàn)證。HA由自然態(tài)到融合態(tài)的結(jié)構(gòu)變化可連續(xù)發(fā)生的，首先是彈簧負(fù)載機(jī)制的發(fā)生，使融合膚插入到宿主細(xì)胞膜中，這一gP41的發(fā)卡前體形成相似，接著coiled一coll三聚體的底部回轉(zhuǎn)使整個(gè)分子對(duì)折，將兩層膜拉近，這恰與gP41的發(fā)卡三聚體相似。

腮腺炎病毒F蛋白七膚重復(fù)序列的結(jié)構(gòu)生物學(xué)研究能障阻斷它向最穩(wěn)定構(gòu)象的轉(zhuǎn)變。當(dāng)?shù)鞍妆┞队谌诤霞せ顥l件下時(shí)，它就克服自然態(tài)的動(dòng)力學(xué)能障并開始融合所必需的構(gòu)象變化。對(duì)流感病毒來講，這時(shí)其HAI結(jié)構(gòu)域喪失三聚體間的接觸并從緊湊的糖蛋白結(jié)構(gòu)中發(fā)生輕微分離，融合膚從其包埋位置釋放出來并以類似噴泉噴出或彈簧彈出的方式推動(dòng)到中心三聚體的氨基端，一旦暴露，融合膚便與靶細(xì)胞膜發(fā)生相互作用。對(duì)Hlv-1來講，當(dāng)gp120與cD4結(jié)合后引起gP120構(gòu)象的變化，使它能與輔助受體結(jié)合，隨后gp120和gP41的進(jìn)一步構(gòu)象變化大大減弱它們間的相互作用，形成gP41短暫的發(fā)卡前體中間態(tài)，釋放出包埋著的融合膚與宿主細(xì)胞膜相互作用并暴露出N一pePtide區(qū)(也可能暴露C一pePtide區(qū))，但由于缺少即120/即41融合前的晶體結(jié)構(gòu)，還不知道HIV-1發(fā)卡前體中間態(tài)的形成是否同流感病毒一樣也利用噴泉機(jī)制，或融合膚在融合前后的位置未變，只是少了gp120的覆蓋。


本文編號(hào)：2941316