發(fā)布時間：2020-11-03 15:25

　　 胰高血糖素樣肽-1(GLP-1)具有降低血糖、減輕體重、心血管受益,改善β細胞等多種生理功能,在治療2型糖尿病和肥胖癥方面是最具潛力的一類藥物。然而,天然的GLP-1易被DPP-IV降解、腎臟濾除、血液中酶降解,在體內(nèi)半衰期不足2 min。因此,為了給患者提供更多的選擇,開發(fā)長效或口服的胰高血糖素樣肽-1(GLP-1)類似物已經(jīng)成為熱門的研究方向。本研究設(shè)計合成了胰高血糖素樣肽-1與人血清白蛋白(HSA)的融合蛋白。其結(jié)構(gòu)是把天然GLP-1的第八位丙氨酸突變成甘氨酸或氨基異丁酸,并在C端或第26位賴氨酸側(cè)鏈增加Cys作為偶聯(lián)人血清白蛋白的中介。采用Fmoc固相合成制備化合物,DTNP修飾多肽鏈形成新的二硫鍵,經(jīng)HPLC純化,質(zhì)譜鑒定與理論值一致。與白蛋白定向偶聯(lián)后,SDS-PAGE分析表明偶聯(lián)率較高。動物實驗結(jié)果表明,化合物2-HSA(GLP-1(7-37)(Ala8Gly)-Ala-Ala-Cys-HSA)降糖效果達到72 h,化合物5-HSA(GLP-1(7-37)(Ala8Aib)-Cys-HSA)降糖療效長達1周,在正常小鼠和2型糖尿病模型大鼠中均具有良好的降糖活性,同時胰島素分泌顯著提高,有望一周注射一次應用于治療2型糖尿病。為了提高患者依從性,本文對口服GLP-1類似物進行了初步研究。本研究通過生物信息學分析,將利拉魯肽第8位和第30、33、34、35位氨基酸進行突變,設(shè)計了3個GLP-1類似物。采用Fmoc固相合成制備類似物,HPLC分析純化,質(zhì)譜鑒定結(jié)果均與理論值一致。隨后,分別加入10 mM化合物XLCA、100 mM的SNAC作為輔助滲透劑,分別在胃蛋白酶、胰蛋白酶、糜蛋白酶中進行水解實驗。質(zhì)譜鑒定結(jié)果表明,加100 mM的SNAC在30 min內(nèi)能抵抗胰蛋白酶水解類似物1,而加10 mM化合物XLCA抵抗糜蛋白酶和胰蛋白酶水解作用在大多數(shù)情況下是明顯優(yōu)于SNAC的。類似物1(GLP-1(7-37)(8Aib:26Kε:γGlu-C16))在加4 mM化合物XLCA的情況下在糜蛋白酶、胰蛋白酶中37℃水解24 h仍有大部分存在,有望制成腸溶制劑用于口服給藥。
【學位單位】：湖南理工學院
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2019
【中圖分類】：R96;TQ460.6
【部分圖文】：

南理工學院碩士學位論文 第1章 緒交酯-co-乙交酯，這種材料不僅有著很好的生物相容性，還能在注射部位大大的延緩釋放，半衰期達到 4 d，在 2012 年被 FDA 批準上市。艾塞那肽-QW 以 2 mg/周劑量注射一次治療，可以使糖化血紅蛋白 HbA1c 減少 1.3～1.9%，體重超過 30 周減少 2.7 kg，血糖調(diào)節(jié)相比普通的艾塞那肽更加有效，相比艾塞那肽明顯減少消化道癥狀[65-67

Efpeglenatide Sanofi PhsaeⅢSubcutaneousinjectionWeeklyITCA 650 Intarcia PhsaeⅢSubcutaneouspumpOnce a yearCJC-1131-PC Conjuchem PhsaeⅡSubcutaneousinjectionWeeklyGlymera PHSAeBio PhsaeⅡSubcutaneousinjectionWeeklyTTP273/ TTP054 TransTech PhsaeⅡ Oral Daily（1）Semaglutide(索馬魯肽口服)：為了提高患者順應性，諾和諾德運用了 Eligen系統(tǒng)開發(fā)了口服制劑，其中最重要的成分是輔助促滲劑 N-[8-(2-hydroxybenzoyl) amprylate (SNAC)，通過與多肽類藥物之間通過非共價結(jié)合，增加脂溶性和通透性從多肽類藥物的被動吸收，同時可以減少多肽類藥物吸收轉(zhuǎn)運過程的酶水解失活[86]數(shù)據(jù)表明，索馬魯肽每日口服 40 mg 的療效和每周 1 mg 的注射給藥療效一致，目實驗接近完成[87]。

用 1 M 鹽酸調(diào) pH 至 6.8，加水定容至 100 mL，用棕色瓶 4 ℃保存。（12）1.5 M Tris-HCl（pH 8.8）濃縮膠緩沖液：稱取 18.15 g Tris-HCl，加 80 mL 溶解，用 1 M 鹽酸調(diào) pH 至 8.8，加水定容至 100 mL，用棕色瓶 4 ℃保存。（13）染色液：稱取 1 g 考馬斯亮藍 R-250 至 1 L 燒杯中，加 250 mL 的異丙醇攪溶解，再加入 100 mL 冰醋酸、650 mL 水攪拌均勻，過濾，室溫保存。（14）脫色液：分別量取 100 mL 醋酸、50 mL 乙醇、850 mL 水至 1 L 燒杯混勻。2.2 實驗方法2.2.1 目的多肽設(shè)計由于天然 GLP-1 容易被 DPP-IV 酶水解、腎臟濾除，半衰期不足 2 min。因此，為抵抗 DPP-IV 酶水解，把天然 GLP-1 的第八位丙氨酸突變成甘氨酸或氨基異丁酸，同時了減少腎臟濾除，增大分子量，就在 C 端或第 26 位賴氨酸側(cè)鏈增加 Cys 作為偶聯(lián)人血白蛋白的中介（如圖 2-1 所示）。本文采用化學合成法制備胰高血糖素樣肽-1 與人血清蛋白（HSA）的融合蛋白。
【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 邴新帥;桑丹;孫海洲;李勝利;金鹿;張春華;張崇志;崔爽青;李萌萌;韓勇軍;;胰高血糖素樣肽-2的研究進展[J];家畜生態(tài)學報;2019年06期

2 樸順福;;妊娠期糖尿病患者血清胰高血糖素樣肽-1的臨床分析[J];吉林醫(yī)學;2017年01期

3 范韶華;張麗暉;石亞偉;;胰高血糖素樣肽1與心血管疾病的研究進展[J];生命的化學;2016年06期

4 嚴淋;羅和生;;胰高血糖素樣肽-1在胃腸道中的作用及機制的研究進展[J];胃腸病學和肝病學雜志;2017年08期

5 馬麗娜;畢會民;高凌;;胰高血糖素樣肽-2功能的研究新進展[J];中國醫(yī)藥導報;2017年27期

6 吳夢潔;盧婷婷;王馥婕;沈捷;;胰高血糖素樣肽1在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的作用研究進展[J];醫(yī)學綜述;2016年05期

7 陳麗雄;王俊斌;劉汝文;呂龍寶;陳麗玲;;樹鼩消化道胰高血糖素樣肽-1陽性細胞分布的研究[J];局解手術(shù)學雜志;2016年04期

8 張一馨;匡洪宇;;胰高血糖素樣肽-1與癌癥相關(guān)性的研究進展[J];癌癥進展;2015年03期

9 肖元元;魏麗;;胰高血糖素樣肽1對脂肪因子作用的研究進展[J];醫(yī)學綜述;2015年16期

10 吳明昊;劉劍;高宇;胡桂才;;胰高血糖素樣肽1類降糖藥物與腎臟關(guān)系的研究進展[J];世界華人消化雜志;2015年31期

相關(guān)博士學位論文 前10條

1 董金龍;水楊酸和雙胍類鉻(Ⅲ)配合物的合成、生物活性及毒性初探[D];山西大學;2018年

2 喬安娜;胰高血糖素受體的信號轉(zhuǎn)導機制研究[D];中國科學院大學(中國科學院上海藥物研究所);2019年

3 何媛媛;胰島素治療對初診2型糖尿病患者胰高血糖素的影響[D];安徽醫(yī)科大學;2016年

4 羅梅;高脂飼養(yǎng)胰島素抵抗大鼠胰島內(nèi)胰高血糖素和胰高血糖素樣肽-1（GLP-1）變化的研究[D];四川大學;2006年

5 陳潔;Exendin-4模擬肽結(jié)構(gòu)、活性及穩(wěn)定性研究[D];吉林大學;2007年

6 吳麗莉;胰高血糖素受體的生物化學及生物物理特性分析[D];復旦大學;2013年

7 齊小強;1. 胰高血糖素衍生物基因在鏈霉菌和大腸桿菌的克隆表達及產(chǎn)物的分離純化研究 2. 大鼠α-酰胺化酶基因在大腸桿菌的克隆表達研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學;2006年

8 唐松濤;胰高血糖素樣肽-1對晚期糖基化終末產(chǎn)物誘導血管內(nèi)皮細胞肌球蛋白輕鏈磷酸化的影響及機制研究[D];安徽醫(yī)科大學;2016年

9 金明飛;口服胰高血糖素樣肽-1的篩選和應用研究[D];華東師范大學;2008年

10 高智慧;一種新的胰高血糖素樣肽-1類似物及其緩釋技術(shù)的研究[D];南開大學;2010年

相關(guān)碩士學位論文 前10條

1 王清;胰高血糖素樣肽-1類似物的合成及活性研究[D];湖南理工學院;2019年

2 李雯;2型糖尿病患者不同血脂狀態(tài)下胰島α細胞功能的相關(guān)臨床分析[D];大連醫(yī)科大學;2018年

3 鄭麗;胰高血糖素與糖尿病關(guān)系的研究進展[D];南昌大學;2017年

4 高維鴻;胰高血糖素樣肽-1對抗HUVEC細胞氧化損傷并抑制PANC-1細胞遷移[D];南方醫(yī)科大學;2017年

5 常子濤;胰高血糖素通過cAMP信號通路對胰島β細胞胰島素分泌的調(diào)節(jié)作用及機制的研究[D];石河子大學;2017年

6 吳冬;胰高血糖素樣肽-1重組的減毒沙門氏菌構(gòu)建[D];安徽醫(yī)科大學;2013年

7 馬曉健;胰高血糖素樣肽-2受體在小鼠中樞神經(jīng)系統(tǒng)的表達[D];大連醫(yī)科大學;2009年

8 蔣榮川;胰高血糖素樣肽-2對28日齡斷奶仔豬腸上皮細胞完整性及其增殖的影響[D];四川農(nóng)業(yè)大學;2008年

9 辛靜;重組人過氧化物酶體增殖物激活受體γ-胰高血糖素樣肽-1的克隆、表達及純化[D];山西醫(yī)科大學;2013年

10 綦才輝;胰高血糖素樣肽1對2型糖尿病大鼠大血管病變的影響[D];濱州醫(yī)學院;2014年

本文編號：2868756