發(fā)布時間：2020-11-07 19:06

　　 鏈霉菌產生的次級代謝產物結構豐富,活性廣泛,常具有抗菌、抗腫瘤、抗病毒、免疫抑制等生物活性,是微生物藥物的重要來源。人們從土壤鏈霉菌中發(fā)現新穎結構及活性物質的幾率越來越小,昆蟲共生微生物一般存在于昆蟲腸道、外骨骼、特殊器官或者細胞中,這種特殊的生境為結構獨特、活性多樣的代謝產物的產生提供了可能。因此,對昆蟲鏈霉菌化學成分的研究可以為研發(fā)新藥提供潛在的先導化合物,具有一定的研究價值。黃柄壁泥蜂膜翅目、泥蜂科昆蟲,多獨棲、捕食蜘蛛與其它昆蟲幼蟲。采用稀釋涂布平板法從黃柄壁泥蜂幼蜂體內外共分離得到22株放線菌。經16S rDNA的序列分析,結果表明大多數菌株屬于鏈霉菌屬。采用濾紙片法和平板對峙法抗菌活性檢測,發(fā)現2株對枯草芽孢桿菌和金黃色葡萄球菌有良好的抑菌效果,其他的菌株活性很弱或者無活性。本論文對兩株具有較強抗菌活性的鏈霉菌菌株1512-3和1510-2的次級代謝產物進行了初步研究。鏈霉菌1512-3基因組測序,通過antiSMASH軟件分析,發(fā)現其含有23個次級代謝產物生物合成基因簇,并對基因簇合成的次級代謝產物進行了預測,包括萘啶霉素、淺內紅霉素、拒霉素等,采用柱色譜等分離技術從發(fā)酵液中分離得到4個化合物,采用HR-ESI-MS及NMR等波譜數據分析鑒定其結構為resistomycin(拒霉素)、genistein(染料木素)、daidzein(大豆甙元)和 pyrrole-2-carboxylic acid。Resistomycin對銅綠假單胞,金黃色葡萄球菌和枯草芽孢桿菌都沒有活性,pyrrole-2-carboxylicacid對金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、銅綠假單胞都有良好的抗菌活性,其抑菌圈分別為9 mm、10.5 mm、11mm。采用MTT法對細胞細胞毒性進行檢測。Resistomycin 對 MCF-7、MCF-10A、MDA-MB-231 這三株人乳腺癌細胞的增殖都具有較好的抑制作用,IC50分別為1.32 μM、2.47 μM、0.64μM。鏈霉菌1510-2基因組測序,通過antiSMASH分析,發(fā)現含有32個次級代謝產物的生物合成基因簇,并對基因簇合成的次級代謝產物進行了預測,包括抗霉素A、噻可拉林和放線菌素等。采用柱色譜等分離技術從發(fā)酵液中分離得到7個化合物,HR-ESI-MS及NMR、X-RAY等數據分析鑒定其結構為三個新的三聯苯化合物SGr-02、SGr-06、SGr-07、放線菌素V、放線菌素D及兩個酸性化合物pyrrole-2-carboxylic acid、(E)-3-甲硫基丙烯酸。采用濾紙片法活性檢測,放線菌素V對革蘭氏陽性菌銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌有抑菌效果,抑菌圈分別為42 mm、30 mm、38 mm;其MIC分別為0.976 μg/mL、3.906 μg/mL、1.953 μg/mL。而對大腸桿菌沒有活性,放線菌V還對多種致病真菌都有活性。又對SGr-02、SGr-06、SGr-07這三個測試了已糖激酶Ⅱ活和人肝癌細胞系(HEPG-2、SMMC-7721、PLC-PRF-5)活性,發(fā)現這三個化合物對已糖激酶Ⅱ和人肝癌細胞都有抑制作用�；�合物SGr-02對已糖激酶Ⅱ和PLC-PRF-5肝癌細胞抑制作用活性最強(IC50分別為7.959 μM、1.944 μM)。
【學位單位】：山東大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R915
【部分圖文】：

這些產物是基因簇所編碼的，這些基因簇一旦能夠在菌體細胞中表達，那么??該基因所表達的產物就可以通過搖瓶大批量的發(fā)酵生產萃取粗提物，并利用ＨＰＬＣ－ＭＳ??分析，完成對物質的結構進一步鑒定（圖１）［１９］?＿??ｐｒｅｄｉｃｔ８〇ｎ?＞??ｘ?Ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ??人??圖１生物信息學輔助分析過程來自參考文獻１９??在確定基因序列后，用生物信息學分析基因組序列進行功能挖掘，盡可能地預測酶的??結構。生物信息學軟件主要包括?ＢＬＡＳＴ［３１＿３２丨?ＧｅｎｏｍｅＴｈｒｅａｄｅｒ［３３＿３４］，?ＨＭＭＥＲ［３＇?ＮＯＲ??ＩＮＥ［３６］，ＳＢＳＰＫＳ［３＇?ａｎｔｉＳＭＡＳＨ［３８］，ＮＲＰＳｓｐ［３９］，ＮＲＰＳｐｒｅｄｉｃｔｏｒ２［４０］，ＰＫＳ／ＮＲＰＳ?Ａｎａｌｙｓ??ｉｓ［４１］，這些數據庫和分析軟件在基因組挖掘的過程中有著很重要的作用，比如對發(fā)現生??３??

息分析的前體）加入培養(yǎng)基中，從而能夠識別天然產物。通過同位素標記技術發(fā)現熒假單胞菌通過生物代謝產生具有生物活性的ｏｒｆａｍｉｄｅｓ?Ａ－Ｃ化合物，利用生物信息學件預測出ｏｒｆａｍｉｄｅ?Ａ的結構，然后在發(fā)酵液中添加用同位素標記好的亮氨酸，最終測發(fā)現目標產物，是從ＰＦ－５的培養(yǎng)中分離出來的，稱為ｏｒｆａｍｉｄｅＡ，它被證明在產細菌的活動中起作用，并顯示出抗菌活性［４４］。如下圖２??

ｎ．圖３異源表達的方法??基因敲除技術方法很直觀的分析預測基因功能，避免了生物信息學預測結果的不定性，利用基因敲除技術把生物體特定功能的本來就有的基因失活缺失，表達產物無產生，與野生型相比，利用色譜法分析無法檢測基因敲除突變體的目標產物，從而對
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3 韋洪娟;林貞建;李德海;顧謙群;朱天驕;;單菌多次級代謝產物方法及其在微生物代謝產物研究中的應用[J];微生物學報;2010年06期

4 王金翠;孫寶盛;;污水生物處理中微生物次級代謝產物的研究進展[J];給水排水;2007年S1期

5 宋琦;;你了解次級代謝產物嗎?[J];消費指南;2011年07期

6 潘園園;李二偉;車永勝;劉鋼;;絲狀真菌次級代謝產物的研究現狀與發(fā)展趨勢[J];菌物學報;2015年05期

7 雷秀清;李力;黃建忠;;提高放線菌次級代謝產物產量方法的研究進展[J];生物技術通報;2014年05期

8 ;微生物的次級代謝產物——質體控制與各種結構產物[J];抗菌素;1976年03期

9 王淑霞;朱天驕;盧圳域;顧謙群;朱偉明;;海洋新放線菌及其次級代謝產物研究進展[J];中國抗生素雜志;2007年09期

10 張慶榮;;關于次級代謝產物產生的遺傳機制的研究[J];國外藥學(抗生素分冊);1980年01期

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本文編號：2874358