發(fā)布時間：2020-11-10 13:14

　　 目的:探討淫羊藿總黃酮(EF)與吡柔比星(THP)聯(lián)用體外抗人骨肉瘤MG-63細胞的作用機制。方法:設立空白對照組和EF組(EF濃度:50、100、200、400、800μg·m L-1)、THP組(THP濃度:1、2、4、8、16μg·m L-1)及兩藥聯(lián)合組(EF+THP濃度:50+1、100+2、200+4、400+8、800+16μg·m L-1)三個實驗組,利用倒置相差顯微鏡觀察不同時間段各組細胞形態(tài);作用48小時后,采用CCK-8法檢測各組不同濃度的細胞抑制率,根據(jù)中效原理計算兩藥聯(lián)用的聯(lián)合指數(shù)(CI),分析其相互作用;采用Annexin V-FITC/PI雙染法流式細胞術檢測各組細胞凋亡情況;RT-PCR及Western-blotting檢測Caspase-3、P21、Bcl-2 m RNA及其蛋白的表達。結果:實驗組細胞呈不同程度凋亡狀態(tài),細胞增殖抑制率隨藥物濃度增加呈遞增趨勢,聯(lián)合組細胞增殖抑制率及凋亡率均明顯高于兩單藥組(P0.05),聯(lián)合組抑制率在10~90%時CI值處于0.374~0.770之間;EF和THP均能使Caspase-3、P21 m RNA及蛋白的表達明顯下降,使Bcl-2 m RNA及蛋白的表達上升(P0.05),聯(lián)合組趨勢更明顯(P0.05)。結論:EF和THP明顯抑制骨肉瘤MG-63細胞活性,并且通過上調(diào)二者Caspase-3、P21 m RNA及其蛋白、下調(diào)Bcl-2 m RNA及其蛋白的表達誘導細胞凋亡,兩藥聯(lián)合后,細胞抑制率在10~90%時均表現(xiàn)為:EF與THP在體外抗骨肉瘤MG-63細胞具有相互協(xié)同作用。
【學位單位】：南昌大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2015
【中圖分類】：R96
【部分圖文】：

第 3 章 結果第 3 章 結果3.1 細胞形態(tài)學觀察骨肉瘤 MG-63 細胞加藥 24 小時后細胞增殖開始受抑制：EF 組細胞逐漸變得不規(guī)則繼而變小變圓，細胞間連接開始消失，細胞周圍折光度開始增高，細胞呈現(xiàn)凋亡改變；THP 組細胞在增殖受抑制的同時反而逐漸增大并伸出偽足，最后逐漸變小變圓，細胞質(zhì)密度開始增高，胞膜逐漸將細胞殘骸包裹形成凋亡小體；聯(lián)合組細胞增殖受抑制程度更明顯，細胞變化呈現(xiàn) EF 和 THP 藥物所致兩種形態(tài)。藥物對細胞的抑制及凋亡作用呈現(xiàn)明顯的時間和濃度依賴性：隨著時間的延長和藥物濃度的增加，細胞抑制及凋亡現(xiàn)象越明顯。見圖 3.1。

圖 3.2 EF 和 THP 作用 MG-63 細胞 48h 后細胞凋亡率（x±s，n=3）注：與對照組相比，*P<0.05；與聯(lián)合組相比，#P<0.05。3.5 Caspase-3、P21 及 Bcl-2 mRNA 的表達EF 和 THP 分別單獨作用 MG-63 細胞 48 小時后，相對于對照組，EF 組、THP 組、聯(lián)合組的 Caspase-3、P21 mRNA 表達均明顯上調(diào)，Bcl-2 mRNA 表達明顯下調(diào)（P<0.05）；而 EF 組與 THP 組相比，Caspase-3、P21 及 Bcl-2 mRNA的表達無明顯區(qū)別（P>0.05）；相對于 EF 組或者 THP 組，聯(lián)合組的 Caspase-3P21 mRNA 的上調(diào)趨勢及 Bcl-2 mRNA 的下調(diào)趨勢更明顯（P<0.05）。如圖 3.所示。

圖 3.2 EF 和 THP 作用 MG-63 細胞 48h 后細胞凋亡率（x±s，n=3）注：與對照組相比，*P<0.05；與聯(lián)合組相比，#P<0.05。3.5 Caspase-3、P21 及 Bcl-2 mRNA 的表達EF 和 THP 分別單獨作用 MG-63 細胞 48 小時后，相對于對照組，EF 組、THP 組、聯(lián)合組的 Caspase-3、P21 mRNA 表達均明顯上調(diào)，Bcl-2 mRNA 表達明顯下調(diào)（P<0.05）；而 EF 組與 THP 組相比，Caspase-3、P21 及 Bcl-2 mRNA的表達無明顯區(qū)別（P>0.05）；相對于 EF 組或者 THP 組，聯(lián)合組的 Caspase-3、P21 mRNA 的上調(diào)趨勢及 Bcl-2 mRNA 的下調(diào)趨勢更明顯（P<0.05）。如圖 3.3所示。
【參考文獻】

相關期刊論文 前10條

1 Hao Wang;Yi-Feng Ye;;Effect of survivin siRNA on biological behaviour of breast cancer MCF7cells[J];Asian Pacific Journal of Tropical Medicine;2015年03期

2 龐博;董軍杰;龐國勛;;清熱解毒類中藥的藥理作用及臨床應用探討[J];臨床合理用藥雜志;2013年31期

3 劉玉亮;梁廣勝;魏強強;何丁文;殷明;殷嫦嫦;;淫羊藿總黃酮及淫羊藿素體外抗骨肉瘤的研究[J];中成藥;2013年10期

4 何焱;王繼雙;張鵬;張文靜;黃啟來;華子春;;薯蕷皂苷元聯(lián)合TRAIL對非小細胞肺癌A549細胞的協(xié)同作用及其中效原理評價[J];藥學學報;2013年01期

5 張春麗;趙亮;;中藥治療骨肉瘤的實驗研究進展[J];湖北中醫(yī)雜志;2012年06期

6 謝顯彪;尹軍強;賈強;王晉;鄒昌業(yè);王姚斐;黃綱;沈靖南;;槲皮素誘導耐甲氨蝶呤骨肉瘤細胞系U2-OS/MTX300凋亡[J];中山大學學報(醫(yī)學科學版);2011年03期

7 蘇海濤;黃永明;許少健;石宇雄;徐逸生;劉金文;;加味六味地黃湯對骨肉瘤化療患者免疫功能的影響[J];南方醫(yī)科大學學報;2010年06期

8 孟寧;孔凱;李師翁;;淫羊藿屬植物化學成分及藥理活性研究進展[J];西北植物學報;2010年05期

9 葉建濤;鄭義磊;劉德育;;蛇葡萄素對K562/ADR細胞耐藥性的逆轉(zhuǎn)作用及機制研究[J];中國中藥雜志;2009年06期

10 程靜;曾葉;潘建青;歐陽曙明;楊業(yè)金;;雷公藤內(nèi)酯醇、順鉑對骨肉瘤細胞體外增殖的影響[J];山東醫(yī)藥;2006年32期

相關博士學位論文 前2條

1 劉艷武;紫檀芪通過抑制JAK2/STAT3信號通路抗人骨肉瘤細胞活性研究[D];第四軍醫(yī)大學;2013年

2 黃永明;扶正固本法對骨肉瘤化療免疫功能影響的臨床及實驗研究[D];廣州中醫(yī)藥大學;2009年

相關碩士學位論文 前1條

1 葉友友;芪癀膠囊對裸鼠原位移植骨肉瘤肺轉(zhuǎn)移的作用及機制探討[D];福建中醫(yī)藥大學;2014年

本文編號：2877969