發(fā)布時(shí)間：2020-11-21 12:48

　　 目的:研究表明無(wú)機(jī)硒離子具有明顯的抗腫瘤作用,但因劑量不易控制,特別是高劑量時(shí)表現(xiàn)出較強(qiáng)的細(xì)胞毒性,因而限制其臨床應(yīng)用。本研究擬用有機(jī)小分子植酸(IH)作為形貌調(diào)控劑,制備一種新型的具有pH敏感性、低毒性并能可控釋放硒離子的含硒無(wú)機(jī)納米顆粒,從而為無(wú)機(jī)硒離子應(yīng)用于臨床提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)和理論基礎(chǔ)。方法:本文采用仿生合成的方法,利用有機(jī)小分子作為形貌控制劑,在常溫和水熱條件下實(shí)現(xiàn)了對(duì)含硒納米顆粒生長(zhǎng)過(guò)程的有效調(diào)控,從而成功制備出具有不同表面形貌和結(jié)晶度的無(wú)機(jī)含硒納米顆粒。納米顆粒制備方法具體如下:(1)常溫?cái)U(kuò)散法:將水溶性鈣鹽,IH、亞硒酸鈉依次溶于水中,調(diào)整pH至2.5左右。錫箔封口,刺若干小孔,置于盛有氨水的燒杯中,室溫靜置12小時(shí)后,離心收集粉末樣品,用蒸餾水洗至中性;(2)水熱合成法:將水溶性鈣鹽,IH、亞硒酸鈉及尿素依次溶于水中,調(diào)整p H至2.5左右,轉(zhuǎn)入水熱反應(yīng)釜中。120oC下反應(yīng)3h。收集粉末樣品,蒸餾水洗至中性。為研究IH含量對(duì)納米顆粒生長(zhǎng)的影響,兩種方法均加入不同量的IH,依次為0,0.33%(v/v),1%(v/v),1.67%(v/v)。接著,采用SEM觀察樣品的形貌;采用XRD對(duì)樣品的晶相結(jié)構(gòu)進(jìn)行表征;采用FTIR表征樣品的化學(xué)組成;采用XPS對(duì)樣品的元素組成進(jìn)行表征;采用TG-DTA表征樣品的熱穩(wěn)定性;設(shè)置pH=7.4和p H=5.8的兩組磷酸鹽緩沖液,對(duì)樣品在不同p H下離子釋放情況進(jìn)行檢測(cè)。此外,在培養(yǎng)基中分別加入亞硒酸鈉和水熱條件下制備的含硒納米顆粒,與Eca109細(xì)胞共培養(yǎng),運(yùn)用CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞增殖情況,通過(guò)瑞氏染色觀察細(xì)胞形態(tài),并通過(guò)檢測(cè)細(xì)胞周期,細(xì)胞凋亡,乳酸分泌等指標(biāo),來(lái)研究了不同納米結(jié)構(gòu)的無(wú)機(jī)含硒納米顆粒對(duì)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)行為的影響。結(jié)果:(1)常溫常壓條件下,通過(guò)氨水?dāng)U散,溶液pH升高,成功得到了不同的粉末狀樣品。SEM電鏡結(jié)果顯示未添加IH時(shí),產(chǎn)物為均勻薄片狀。加入IH后,產(chǎn)物由薄片狀逐漸轉(zhuǎn)變?yōu)槌叽绫砻婀饣�的納米微球;XRD結(jié)果結(jié)果顯示產(chǎn)物均為Ca H_2O_4Se;FTIR結(jié)果顯示產(chǎn)物中含有結(jié)晶水和SeO_3~2,且隨著IH添加量的升高,還檢測(cè)到PO_4~(3-);XPS分析顯示產(chǎn)物含有Ca、Se、O、C、P元素,其中Se為+4價(jià);TG-DTA分析顯示,產(chǎn)物在高溫下有分解。(2)水熱條件下,通過(guò)尿素分解,溶液pH升高,成功得到了不同的粉末狀樣品。SEM電鏡結(jié)果顯示未加IH產(chǎn)物為薄片狀,隨著IH加入量的增加,產(chǎn)物由薄片狀向光滑的納米微球轉(zhuǎn)變,進(jìn)而轉(zhuǎn)變?yōu)楸砻婢哂嗅槧罴{米結(jié)構(gòu)的微球;XRD結(jié)果顯示當(dāng)IH添加量≤1%(v/v)時(shí),產(chǎn)物均為CaH_2O_4Se,當(dāng)IH添加量為1.67%(v/v),產(chǎn)物中出現(xiàn)羥基磷灰石(Ca_5(PO_4)_3(OH))。且隨著IH添加量的增加,產(chǎn)物結(jié)晶程度降低,向無(wú)定形態(tài)轉(zhuǎn)變;FTIR結(jié)果顯示產(chǎn)物主要中含有結(jié)晶水和SeO_3~2,且隨著IH添加量的升高,檢測(cè)到PO_4~(3-);XPS結(jié)果顯示產(chǎn)物中含有Ca、Se、O、C、P元素,其中Se為+4價(jià);TG-DTA結(jié)果顯示,產(chǎn)物在高溫下發(fā)生分解失重。(3)將常溫條件下和水熱條件下制備的納米顆粒,進(jìn)行離子釋放實(shí)驗(yàn)。結(jié)果表明,酸性條件下,硒離子釋放明顯快于中性條件下。在酸性條件下,未添加IH時(shí),常溫下制備的納米薄片硒離子釋放快于水熱條件下制備的納米薄片。添加IH后,能有效延緩硒離子的釋放。(4)無(wú)機(jī)含硒納米顆粒與腫瘤細(xì)胞共培養(yǎng)結(jié)果:(1)結(jié)果:CCK-8檢測(cè)結(jié)果顯示未添加IH的產(chǎn)物與腫瘤細(xì)胞共培養(yǎng)后,未見(jiàn)細(xì)胞增殖,與添加亞硒酸鈉培養(yǎng)基中細(xì)胞增殖結(jié)果相似;當(dāng)IH添加量為0.33%(v/v)時(shí),產(chǎn)物與細(xì)胞共培養(yǎng)后,細(xì)胞未見(jiàn)明顯增殖;當(dāng)IH添加量為≥1%(v/v)時(shí),產(chǎn)物與細(xì)胞共培養(yǎng)后,細(xì)胞數(shù)量均出現(xiàn)先增加后減少的趨勢(shì);(2)瑞氏染色結(jié)果顯示腫瘤細(xì)胞膜皺縮,細(xì)胞漿結(jié)構(gòu)混亂,胞核固縮,核膜不清晰;(3)細(xì)胞凋亡檢測(cè)顯示,高濃度組(S2)中死亡細(xì)胞占比21.28%,晚期凋亡占比19.22%,早期凋亡占比1.03%。低濃度組(S1)晚期凋亡細(xì)胞占比1.39%,control組晚期凋亡細(xì)胞占比0.06%。細(xì)胞周期檢測(cè)結(jié)果,S1組、S2組、control組G2/G1分別是1.94,1.93,1.91,G1期、S期、G2期各部分所占比例幾乎相同,實(shí)驗(yàn)組內(nèi)比較,S1與S2結(jié)果大致相同。結(jié)論:1.常溫和水熱條件下,添加有機(jī)小分子IH均可調(diào)控?zé)o機(jī)納米顆粒的形貌和結(jié)晶度,進(jìn)而影響其降解速度以及離子釋放速度;2.經(jīng)IH調(diào)控生成的納米顆粒具備pH敏感性,在酸性條件下的降解速度明顯快于中性條件下。且可通過(guò)調(diào)整IH的濃度來(lái)可控制硒離子的釋放;3.體外培養(yǎng)的細(xì)胞在生長(zhǎng)增殖過(guò)程中可產(chǎn)生大量的酸性物質(zhì),這些酸可加速無(wú)機(jī)含硒納米顆粒的降解;4.含硒納米顆粒與腫瘤細(xì)胞共培養(yǎng)結(jié)果表明,通過(guò)調(diào)節(jié)IH的添加量,可調(diào)控產(chǎn)物在體外降解,控制無(wú)機(jī)硒離子的產(chǎn)生,從而對(duì)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)產(chǎn)生抑制作用,同時(shí)降低無(wú)機(jī)硒離子的毒性;5.無(wú)機(jī)硒離子可有效抑制腫瘤細(xì)胞的增殖,但具體作用機(jī)理還需進(jìn)一步研究;
【學(xué)位單位】：川北醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R914;R96
【文章目錄】：
摘要
abstract
前言
第一部分 無(wú)機(jī)含硒納米顆粒的制備及表征
    實(shí)驗(yàn)材料與方法
    結(jié)果
    討論
    結(jié)論
第二部分 無(wú)機(jī)含硒納米顆粒抗腫瘤性能的體外評(píng)價(jià)
    實(shí)驗(yàn)材料與方法
    結(jié)果
    討論
    結(jié)論
全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述：硒及其化合物抗腫瘤研究進(jìn)展
    參考文獻(xiàn)
附錄
個(gè)人簡(jiǎn)歷
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
致謝

【參考文獻(xiàn)】

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1 歐陽(yáng)健明;單分子膜誘導(dǎo)生物礦物晶體生長(zhǎng)中的晶格匹配和電荷匹配[J];化學(xué)進(jìn)展;2005年05期

2 李柱來(lái),林媚,王津,柯曉燕,趙傳春;硒化殼聚糖的制備及其表征[J];海峽藥學(xué);2005年03期

3 高學(xué)云,張勁松,張立德;納米紅色元素硒的急性毒性和生物利用性[J];衛(wèi)生研究;2000年01期

本文編號(hào)：2893023