發(fā)布時間：2020-11-21 12:48

　　 目的:研究表明無機硒離子具有明顯的抗腫瘤作用,但因劑量不易控制,特別是高劑量時表現出較強的細胞毒性,因而限制其臨床應用。本研究擬用有機小分子植酸(IH)作為形貌調控劑,制備一種新型的具有pH敏感性、低毒性并能可控釋放硒離子的含硒無機納米顆粒,從而為無機硒離子應用于臨床提供實驗依據和理論基礎。方法:本文采用仿生合成的方法,利用有機小分子作為形貌控制劑,在常溫和水熱條件下實現了對含硒納米顆粒生長過程的有效調控,從而成功制備出具有不同表面形貌和結晶度的無機含硒納米顆粒。納米顆粒制備方法具體如下:(1)常溫擴散法:將水溶性鈣鹽,IH、亞硒酸鈉依次溶于水中,調整pH至2.5左右。錫箔封口,刺若干小孔,置于盛有氨水的燒杯中,室溫靜置12小時后,離心收集粉末樣品,用蒸餾水洗至中性;(2)水熱合成法:將水溶性鈣鹽,IH、亞硒酸鈉及尿素依次溶于水中,調整p H至2.5左右,轉入水熱反應釜中。120oC下反應3h。收集粉末樣品,蒸餾水洗至中性。為研究IH含量對納米顆粒生長的影響,兩種方法均加入不同量的IH,依次為0,0.33%(v/v),1%(v/v),1.67%(v/v)。接著,采用SEM觀察樣品的形貌;采用XRD對樣品的晶相結構進行表征;采用FTIR表征樣品的化學組成;采用XPS對樣品的元素組成進行表征;采用TG-DTA表征樣品的熱穩(wěn)定性;設置pH=7.4和p H=5.8的兩組磷酸鹽緩沖液,對樣品在不同p H下離子釋放情況進行檢測。此外,在培養(yǎng)基中分別加入亞硒酸鈉和水熱條件下制備的含硒納米顆粒,與Eca109細胞共培養(yǎng),運用CCK-8法檢測細胞增殖情況,通過瑞氏染色觀察細胞形態(tài),并通過檢測細胞周期,細胞凋亡,乳酸分泌等指標,來研究了不同納米結構的無機含硒納米顆粒對腫瘤細胞生長行為的影響。結果:(1)常溫常壓條件下,通過氨水擴散,溶液pH升高,成功得到了不同的粉末狀樣品。SEM電鏡結果顯示未添加IH時,產物為均勻薄片狀。加入IH后,產物由薄片狀逐漸轉變?yōu)槌叽绫砻婀饣�的納米微球;XRD結果結果顯示產物均為Ca H_2O_4Se;FTIR結果顯示產物中含有結晶水和SeO_3~2,且隨著IH添加量的升高,還檢測到PO_4~(3-);XPS分析顯示產物含有Ca、Se、O、C、P元素,其中Se為+4價;TG-DTA分析顯示,產物在高溫下有分解。(2)水熱條件下,通過尿素分解,溶液pH升高,成功得到了不同的粉末狀樣品。SEM電鏡結果顯示未加IH產物為薄片狀,隨著IH加入量的增加,產物由薄片狀向光滑的納米微球轉變,進而轉變?yōu)楸砻婢哂嗅槧罴{米結構的微球;XRD結果顯示當IH添加量≤1%(v/v)時,產物均為CaH_2O_4Se,當IH添加量為1.67%(v/v),產物中出現羥基磷灰石(Ca_5(PO_4)_3(OH))。且隨著IH添加量的增加,產物結晶程度降低,向無定形態(tài)轉變;FTIR結果顯示產物主要中含有結晶水和SeO_3~2,且隨著IH添加量的升高,檢測到PO_4~(3-);XPS結果顯示產物中含有Ca、Se、O、C、P元素,其中Se為+4價;TG-DTA結果顯示,產物在高溫下發(fā)生分解失重。(3)將常溫條件下和水熱條件下制備的納米顆粒,進行離子釋放實驗。結果表明,酸性條件下,硒離子釋放明顯快于中性條件下。在酸性條件下,未添加IH時,常溫下制備的納米薄片硒離子釋放快于水熱條件下制備的納米薄片。添加IH后,能有效延緩硒離子的釋放。(4)無機含硒納米顆粒與腫瘤細胞共培養(yǎng)結果:(1)結果:CCK-8檢測結果顯示未添加IH的產物與腫瘤細胞共培養(yǎng)后,未見細胞增殖,與添加亞硒酸鈉培養(yǎng)基中細胞增殖結果相似;當IH添加量為0.33%(v/v)時,產物與細胞共培養(yǎng)后,細胞未見明顯增殖;當IH添加量為≥1%(v/v)時,產物與細胞共培養(yǎng)后,細胞數量均出現先增加后減少的趨勢;(2)瑞氏染色結果顯示腫瘤細胞膜皺縮,細胞漿結構混亂,胞核固縮,核膜不清晰;(3)細胞凋亡檢測顯示,高濃度組(S2)中死亡細胞占比21.28%,晚期凋亡占比19.22%,早期凋亡占比1.03%。低濃度組(S1)晚期凋亡細胞占比1.39%,control組晚期凋亡細胞占比0.06%。細胞周期檢測結果,S1組、S2組、control組G2/G1分別是1.94,1.93,1.91,G1期、S期、G2期各部分所占比例幾乎相同,實驗組內比較,S1與S2結果大致相同。結論:1.常溫和水熱條件下,添加有機小分子IH均可調控無機納米顆粒的形貌和結晶度,進而影響其降解速度以及離子釋放速度;2.經IH調控生成的納米顆粒具備pH敏感性,在酸性條件下的降解速度明顯快于中性條件下。且可通過調整IH的濃度來可控制硒離子的釋放;3.體外培養(yǎng)的細胞在生長增殖過程中可產生大量的酸性物質,這些酸可加速無機含硒納米顆粒的降解;4.含硒納米顆粒與腫瘤細胞共培養(yǎng)結果表明,通過調節(jié)IH的添加量,可調控產物在體外降解,控制無機硒離子的產生,從而對腫瘤細胞生長產生抑制作用,同時降低無機硒離子的毒性;5.無機硒離子可有效抑制腫瘤細胞的增殖,但具體作用機理還需進一步研究;
【學位單位】：川北醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R914;R96
【文章目錄】：
摘要
abstract
前言
第一部分 無機含硒納米顆粒的制備及表征
    實驗材料與方法
    結果
    討論
    結論
第二部分 無機含硒納米顆粒抗腫瘤性能的體外評價
    實驗材料與方法
    結果
    討論
    結論
全文結論
參考文獻
綜述：硒及其化合物抗腫瘤研究進展
    參考文獻
附錄
個人簡歷
攻讀碩士學位期間發(fā)表的學術論文
致謝

【參考文獻】

相關期刊論文 前3條

1 歐陽健明;單分子膜誘導生物礦物晶體生長中的晶格匹配和電荷匹配[J];化學進展;2005年05期

2 李柱來,林媚,王津,柯曉燕,趙傳春;硒化殼聚糖的制備及其表征[J];海峽藥學;2005年03期

3 高學云,張勁松,張立德;納米紅色元素硒的急性毒性和生物利用性[J];衛(wèi)生研究;2000年01期

本文編號：2893023