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鹿角多肽的分離純化及成骨活性研究

發(fā)布時(shí)間:2024-06-30 11:35
  目的:采用酶解超濾方法提取鹿角多肽,考察鹿角多肽對(duì)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)活性的影響,從而為應(yīng)用鹿角多肽構(gòu)建細(xì)胞支架打下實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。方法:(1)精制鹿角,選取四種酶分別進(jìn)行酶解,進(jìn)行定性分析和氨基酸分析。(2)采用星點(diǎn)設(shè)計(jì)-效應(yīng)面法優(yōu)化制備鹿角多肽,以酶用量、底物濃度、溫度為自變量,多肽含量峰面積為因變量,分別進(jìn)行多元線性回歸和二項(xiàng)式方程擬合,結(jié)合最佳數(shù)學(xué)模型描繪效應(yīng)面,確定最佳工藝并進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)。(3)采用超濾提取分子量(800-1500)鹿角多肽;無(wú)菌條件下培養(yǎng)傳代BMSCs;篩選最佳濃度;考察最佳濃度鹿角多肽對(duì)BMSCs增殖、生長(zhǎng)周期、堿性磷酸酶(ALP)的影響。結(jié)果:(1)采用TLC法檢測(cè)鹿角膠,檢測(cè)結(jié)果符合藥典相關(guān)標(biāo)準(zhǔn);采用胃蛋白酶酶解鹿角膠,可以得到分子量在800-1500鹿角多肽;該鹿角多肽溶液的氨基酸濃度為21.025μmol/m L。(2)星點(diǎn)設(shè)計(jì)-效應(yīng)面法優(yōu)選出的最佳工藝條件為酶用量4.0%、底物濃度6%、溫度40℃,最佳工藝驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果,與二項(xiàng)式擬合方程預(yù)測(cè)值偏差為1.41%,最佳工藝具...

【文章頁(yè)數(shù)】:48 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】:碩士

【部分圖文】:

圖1鹿角膠的TLC鑒別

圖1鹿角膠的TLC鑒別

蒸干,殘?jiān)?.02mo.02mol/L鹽酸溶液稀釋至試品溶液20μl注入氨基試品與對(duì)照品色譜相應(yīng)的在相同位置有明顯相同顏


圖2底物濃度與肽含量面積關(guān)系

圖2底物濃度與肽含量面積關(guān)系

5:55:0.1(體積比);檢測(cè)波長(zhǎng):UV220nm;流速:0.5mL/min;柱溫積:10μL)備的樣品溶液在上述色譜條件下分析。然后用GPC數(shù)據(jù)處理軟件,將據(jù)代入校正曲線方程中進(jìn)行計(jì)算,即可達(dá)到樣品中肽的相對(duì)分子質(zhì)量及用峰面積歸一化法計(jì)算相對(duì)分子質(zhì)量范圍在1000μ以下....


圖3酶用量與肽含量面積關(guān)系

圖3酶用量與肽含量面積關(guān)系

圖3酶用量與肽含量面積關(guān)系度配置底物濃度5%,酶用量2.5%,酶解時(shí)間6h,PH3.5,酶解溫度分、40、45、50℃,酶解。隨著溫度的升高,多肽面積先增加在40℃左右然后降低后繼續(xù)增加。(圖4)圖4溫度與肽含量面積關(guān)系配置底物濃度5%,酶用量2.5%....


圖4溫度與肽含量面積關(guān)系

圖4溫度與肽含量面積關(guān)系

酶解時(shí)間6h,PH3.5,酶解溫度40℃,酶解。隨著酶用量的增加,出現(xiàn)了先增加再降低,再增加降低的過(guò)程,在1.5%左右達(dá)到最高。(圖3)圖3酶用量與肽含量面積關(guān)系度配置底物濃度5%,酶用量2.5%,酶解時(shí)間6h,PH3.5,酶解溫度分別、40、45、50℃....



本文編號(hào):3998717

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