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人乳酸脫氫酶C4基因突變的檢測及其在男性不育發(fā)病中的作用

發(fā)布時(shí)間:2024-07-03 01:04
  乳酸脫氫酶C4(lactate dehydrogenase-C4,LDH-C4)為LDH蛋白家族中一個(gè)特殊的同工酶,僅在哺乳動(dòng)物成熟的睪丸(testis)和精子(spermatozoa)中表達(dá),在精子的能量代謝中發(fā)揮重要作用,是精子運(yùn)動(dòng)、獲能及受精等過程的一個(gè)關(guān)鍵酶,其功能或活性異常與男性不育有密切關(guān)系。本研究進(jìn)一步優(yōu)化了以2-羥基戊酸為LDH-C4底物檢測精子LDH-C4活性的染色方法,建立了該方法酶活性積分的正常參考范圍,繪制了ROC曲線,并初步得到該方法診斷的靈敏度為89.5%,特異性為91.2%。同時(shí),開發(fā)了一種以2-羥基丁酸鈉為底物的LDH-C4活性顯色方法。在此基礎(chǔ)上,對(duì)一組精子LDH-C4活性降低的特發(fā)性不育患者進(jìn)行Ldhc基因突變檢測,并通過T克隆加以確證。結(jié)果顯示,一名患者編碼區(qū)第5外顯子的40位堿基產(chǎn)生T→G雜合突變,對(duì)應(yīng)Ldhc基因的第153位密碼子由TTA變?yōu)門GA,將其命名為L153X突變。為研究L153X突變引起男性不育的致病機(jī)制,本研究采用分子克隆技術(shù),構(gòu)建了野生型Ldhc的原核、真核重組載體,并利用人工誘導(dǎo)突變技術(shù)獲得了L153X突變體的重組質(zhì)粒,通過誘...

【文章頁數(shù)】:129 頁

【學(xué)位級(jí)別】:博士

【文章目錄】:
英文縮略詞表
中文摘要
Abstract
前言
第一部分 乳酸脫氫酶C4活性檢測方法的建立
    材料與方法
    結(jié)果
    討論
第二部分Ldhc基因突變的檢測及鑒定
    材料與方法
    結(jié)果
    討論
第三部分L153X突變體原核、真核表達(dá)載體的構(gòu)建及鑒定
    材料與方法
    結(jié)果
    討論
第四部分L153X突變體的生物信息學(xué)分析及其亞基間相互作用的研究
    材料與方法
    結(jié)果
    討論
第五部分L153X基因突變患者精子功能評(píng)價(jià)
    材料與方法
    結(jié)果
    討論
全文小結(jié)
參考文獻(xiàn)
致謝
綜述
    參考文獻(xiàn)
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本文編號(hào):4000288

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