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HPV16型L1蛋白優(yōu)勢表位原核表達及其血清學驗證

發(fā)布時間:2020-12-03 09:50
  目的利用原核系統(tǒng)對人乳頭瘤病毒(HPV)16型L1蛋白優(yōu)勢抗原表位進行重組表達與純化,并檢測血清學反應(yīng)。方法對HPV16型L1蛋白優(yōu)勢抗原表位進行全基因合成,將核酸片段克隆至pET-DsbC原核表達載體,重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸埃希菌Rosetta(DE3),經(jīng)異丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)誘導(dǎo)表達,采用親和層析對表達產(chǎn)物進行純化,采用免疫印跡法、酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)驗證重組蛋白的免疫學活性。結(jié)果成功構(gòu)建了pET-DsbC-HPV16 L1表達載體,并在大腸埃希菌Rosetta(DE3)中實現(xiàn)了穩(wěn)定的可溶性表達。重組DsbC-HPV16 L1蛋白經(jīng)親和層析進行純化,相對分子質(zhì)量為45 000,純度為95%,重組蛋白純化得率為22%。免疫印跡法結(jié)果顯示,重組DsbC-HPV16 L1蛋白可與HPV16型陽性血清產(chǎn)生特異的抗原-抗體反應(yīng),與重組DsbC蛋白或健康人血清無交叉反應(yīng),具有良好的特異性。ELISA結(jié)果顯示,重組DsbC-HPV16 L1蛋白與HPV16型陽性血清有較強的免疫反應(yīng)性,A450 nm均值為0.56,高于健康人血清和磷酸鹽緩沖液(PBS)陰性對照(A450n... 

【文章來源】:檢驗醫(yī)學. 2020年09期 第928-932頁

【文章頁數(shù)】:5 頁

【部分圖文】:

HPV16型L1蛋白優(yōu)勢表位原核表達及其血清學驗證


HPV16 L1 C端核酸PCR鑒定凝膠電泳結(jié)果

原核,產(chǎn)物,蛋白,目的


Dsb C-HPV16 L1融合表達載體經(jīng)轉(zhuǎn)化大腸埃希菌Rosetta(DE3)宿主菌后以IPTG誘導(dǎo),可獲得目的蛋白的原核表達,冰浴超聲破碎后進行SDS-PAGE。結(jié)果顯示,在目的相對分子質(zhì)量46 000處(Dsb C蛋白為28 000)有明顯的蛋白表達,目的蛋白占菌體蛋白的30%以上。超聲破碎后的上清液中可溶目的蛋白占表達蛋白的50%以上。見圖2。超聲破碎后的上清液以親和層析純化,150 mmol/L咪唑洗脫獲得的純化融合蛋白經(jīng)SDS-PAGE分析,純度為95%,見圖3。采用BCA蛋白定量法(重組蛋白純化得率=純化后的目的蛋白/上樣前上清液總蛋白×50%)計算得重組蛋白純化得率為22%。

電泳圖,電泳,蛋白,融合蛋白


超聲破碎后的上清液以親和層析純化,150 mmol/L咪唑洗脫獲得的純化融合蛋白經(jīng)SDS-PAGE分析,純度為95%,見圖3。采用BCA蛋白定量法(重組蛋白純化得率=純化后的目的蛋白/上樣前上清液總蛋白×50%)計算得重組蛋白純化得率為22%。2.3 重組融合蛋白抗原性的免疫印跡法結(jié)果

【參考文獻】:
期刊論文
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本文編號:2896272

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