發(fā)布時間：2020-12-12 03:05

　　目的:1.了解腹膜透析相關(guān)性腹膜炎（Peritoneal dialysis-associated peritonitis,PDAP）的病原菌分布。2.應(yīng)用微滴式數(shù)字PCR（Droplet Digital PCR,ddPCR）檢測腹膜透析相關(guān)性腹膜炎的致病菌,旨在探討微滴式數(shù)字PCR在檢測PDAP中的臨床應(yīng)用價值方法:本實驗研究方法分為兩個部分。第一部分:回顧性分析2009年1月至2016年9月我院腹透中心發(fā)生的318例次腹膜透析相關(guān)性腹膜炎,對病原學(xué)種類進行分析。第二部分:1.根據(jù)回顧性分析我院腹透中心近8年發(fā)生的318例次腹膜透析相關(guān)性腹膜炎的病原菌分布情況,找出最常見的4種病原菌,分別為表皮葡萄球菌,金黃色葡萄球菌,大腸桿菌,糞腸球菌。2.根據(jù)相關(guān)參考文獻設(shè)計4種實驗菌種的特異引物探針。提取標(biāo)準(zhǔn)菌株DNA后,通過PCR驗證引物可以擴增目的片段。3.收集30例腹膜炎患者的腹透液標(biāo)本,分為兩份,一份行傳統(tǒng)細菌培養(yǎng),另一份置于-80°C冰箱保存,用于后續(xù)數(shù)字PCR檢測。標(biāo)準(zhǔn)菌株DNA提取液為陽性對照,無菌雙蒸水（ddH2O）為陰性對照。結(jié)果:第一部分:腹透液培養(yǎng)陽性185例次,培養(yǎng)陽性率... 

【文章來源】：遵義醫(yī)科大學(xué)貴州省

【文章頁數(shù)】：41 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

各細菌總平均構(gòu)成比

c d圖 2 PCR擴增產(chǎn)物瓊脂糖電泳結(jié)果注：圖a.b.c.d：分別為金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、大腸桿菌、糞腸球菌的標(biāo)準(zhǔn)菌株P(guān)CR擴增產(chǎn)物條帶及產(chǎn)物大小。3.3 標(biāo)本數(shù)字 PCR 檢驗結(jié)果3.3.1 數(shù)字PCR的陽性+陰性對照實驗結(jié)果用 4 種標(biāo)準(zhǔn)菌株（金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、大腸桿菌、糞腸球菌）的DNA做陽性對照，無菌ddH2O做陰性對照。如圖 3 所示，四種細菌特異性引物探針均能通過數(shù)字pcr檢驗其所對應(yīng)的病原菌。

C圖 3 陽性+陰性對照的數(shù)字PCR的一維散點圖注：圖中紅線代表閾值，閾值以上的藍色區(qū)域代表陽性微滴，提示反應(yīng)陽性，閾值以下的灰色區(qū)域代表陰性微滴，提示反應(yīng)陰性。圖a：G12 表示表皮葡萄球菌標(biāo)準(zhǔn)菌株DNA，H12 表示ddH2O；圖b：G10 表示糞腸球菌標(biāo)準(zhǔn)菌株DNA，H10 表示ddH2O；圖c：A12 表示金黃色葡萄球菌標(biāo)準(zhǔn)菌株DNA，B12 表示大腸桿菌標(biāo)準(zhǔn)菌株DNA，C12、D12 均表示ddH2O。3.3.2 細菌培養(yǎng)陽性標(biāo)本的數(shù)字PCR實驗結(jié)果細菌培養(yǎng)陽性標(biāo)本 13 例均用四種探針引物做數(shù)字PCR檢驗，4 種細菌的特異性探針引物數(shù)字PCR檢測結(jié)果均與傳統(tǒng)細菌培養(yǎng)結(jié)果相同。詳見圖 4。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]微滴式數(shù)字PCR對肉制品中羊肉和豬肉定量分析[J]. 陳晨,張巖,李永波,李鵬,李永艷,張濤,張薇,周巍,張志勝.  現(xiàn)代食品科技. 2018(01)
[2]腹膜透析相關(guān)性腹膜炎患者感染病原菌特點分析[J]. 趙馥,楊金國,糜彩霞,陳逸菲,余福海.  中華醫(yī)院感染學(xué)雜志. 2017(18)
[3]熱帶地區(qū)腹膜透析相關(guān)性腹膜炎致病菌及耐藥性臨床分析[J]. 林葉,陳文,莊乙君.  華南國防醫(yī)學(xué)雜志. 2017(05)
[4]腹膜透析相關(guān)性腹膜炎病原菌及其危險因素[J]. 王靜,呂晶,李文冬,辛小龍.  中國感染控制雜志. 2016(10)
[5]腹膜透析相關(guān)性腹膜炎的致病菌及其易感因素分析[J]. 趙麗娟,孫世仁,楊君,周美蘭,許國雙.  中華腎病研究電子雜志. 2016(03)
[6]多重實時PCR檢測腹膜透析相關(guān)性腹膜炎致病菌的應(yīng)用分析[J]. 燕雯雯,沈繼錄,李曉峰,吳永貴.  安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報. 2016(05)
[7]102例次腹膜透析相關(guān)性腹膜炎的致病菌譜和耐藥性分析[J]. 陳越,侯偉偉,崔春黎,李江濤,張昆,余晨.  上海醫(yī)學(xué). 2016(03)
[8]腹膜透析性腹膜炎的病原菌分布與耐藥分析[J]. 宋江勤,孫治華,韓利蓉,歐陽娟,劉兵.  中華臨床實驗室管理電子雜志. 2016(01)
[9]腹膜透析相關(guān)腹膜炎臨床及病原分析[J]. 張云芳,湯嘉敏,國建,化寶軍,林燕群,李紅艷.  中華腎臟病雜志. 2015 (07)
[10]132例腹膜透析相關(guān)性腹膜炎病原菌及其耐藥性分析[J]. 趙珉,戴宏,沈繼錄,張伯科,吳永貴,盧文,徐星銘.  中國感染與化療雜志. 2015(03)

碩士論文
[1]87例腹膜透析相關(guān)性腹膜炎分析及病原菌研究[D]. 龔友才.昆明醫(yī)科大學(xué) 2016
[2]多重實時PCR檢測腹膜透析相關(guān)性腹膜炎致病菌的應(yīng)用分析[D]. 燕雯雯.安徽醫(yī)科大學(xué) 2016
[3]腹膜透析相關(guān)性腹膜炎致病菌PCR檢測和傳統(tǒng)培養(yǎng)對比分析[D]. 王嬋媛.安徽醫(yī)科大學(xué) 2015



本文編號：2911736