作用醉酒、酗酒兩會引起身體的小適，大量酒精攝人會造成人體多種器官損害，其中對肝臟的損害尤其嚴(yán)重。隨著人民生活水平的提高，酒精性肝病(Alcohol Liver Disease)已經(jīng)成為繼病毒性肝炎后的另外一種多發(fā)的肝損傷疾病 。但目前為止尚沒有一種高效的方法可以減輕酒后『互應(yīng)及飲灑帶來的肝損傷。白藜蘆醇(resveratrol，Res)是一種廣泛存在于自然界多種植物中的多酚類化合物，具有抗氧化、降低血液粘倒度、預(yù)防癌癥的發(fā)生、抗過敏、抗突變、抗驗證、調(diào)節(jié)免疫等藥理活性，被廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、保健品、化妝品和食品添加劑等領(lǐng)域。近年研究表明，Res對過氧化氖、四氯化碳、酒精等所致肝損傷具有抑制作用，且對肝纖維化和肝癌的治療有重要的潛在意義 。本研究擬通過小鼠酒精性肝損傷模型，研究Res防止灑精性肝損傷的作心機理，為開發(fā)利用其類似物提供試驗資料和 論依據(jù)。

　　1 材料與方法

　　1．1 材料

　　1．1．1 動物。SPF級昆明種雄性小白鼠(北京中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院實驗動物研究所，許可證號：SCKX(京)2004—0001)，6～8周齡，體質(zhì)量18～22 g。常規(guī)顆粒飼料喂養(yǎng)，自由飲水，室溫22-25℃，相對濕度40％ ～70％ 。

　　1．1．2 藥品與試劑。白藜蘆醇(購白巾同藥品生物制品檢定所，批號：110742—200517，純度99．9％)；超氧化物歧化酶SOD測定試劑(南京建成生物工程研究所，批號：20100503)，丙二醛MDA測定試劑(南京建成生物工程研究所，批號：20100503)，考馬斯亮蘭蛋白測定試劑(南京建成生物工程研究所，批號：

　　20100515)，ALT試劑盒(廣州標(biāo)佳科技公司生產(chǎn)，批號：021129)，AST試劑盒(廣州標(biāo)佳科技公司生產(chǎn)，批號：020926)；10％的甲醛由PBS液稀釋得到，其它試劑均為分析純。

　　1．1．3 儀器。X一22R低溫離心機(德同BECKMAN公司)，MH2000電子水浴恒溫槽(北京醫(yī)療設(shè)備總廠)，酶標(biāo)儀(BIO—RAD)，玻璃研磨器(田產(chǎn))；CO 培養(yǎng)箱(型號2123TC)；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海 榮生化儀器廠)；電子天平(上海菁海儀器有限公司，型號A2104N)；CX9仝自動生化分析儀(BECKMAN公司生產(chǎn))；微量移液器eppendorf(Made in USA)。

　　1．2 方法

　　1．2．1 小鼠肝損傷模型制備級分組給藥。實驗小鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周，隨機分成5組，每組l2只：①正常組：每火上午、下午分別按照10mL／kg灌胃0．9％生理鹽水；②模型組：每人上午按照10mL／kg灌胃0．9％生理鹽水，下午灌胃0mL／kg，50％ 的乙醇；③ 低劑量白藜蘆醇給藥組：每天上午按照10mL／kg灌胃0．02g／kg白藜蘆醇．下午灌胃10mL／kg，50％ 的乙醇； ④中劑量白藜蘆醇給藥組：每天上午按照10mL／kg灌胃0．04g／kg白藜蘆醇，下午灌胃10mL／kg，50％ 的乙醇；⑤ 高劑量白藜蘆醇給藥組：每天上午按照10mL／kg灌胃0．08g／kg白藜蘆醇，下午灌胃10mL／kg，50％的乙醇。各組均連續(xù)灌胃10天。

　　1．2．2 指標(biāo)檢測。上述各組小鼠灌胃期間每天觀察精神活動、毛色、飲食、體質(zhì)量等一般狀態(tài)；末次給予乙醇后禁食不禁水12h，稱重，采用摘眼球取血，3000 r／min離心，取血清按試劑盒說明書測定血清谷雨轉(zhuǎn)氬酶(ALT)和谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)活性；取血后頸椎脫臼處死小鼠，迅速取出肝臟稱重(計算肝指數(shù)=肝重／體質(zhì)量X 100％)，左葉用冷生理鹽水制備成100g／i 肝勻漿，測定肝勻漿上清液SOD活力及MDA含量，取肝組織勻漿用考馬斯亮蘭蛋白測定法測定蛋白含量；取肝右葉用10％}f]醛固定，石蠟包埋切片，進行HE染色，觀察其病理變化。

　　1．2．3 統(tǒng)計學(xué)處理。實驗數(shù)據(jù)用計算機instate件處理，所有數(shù)據(jù)以均數(shù)加減標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，采用× 分析方法，P<0．05表明有 著性差異。

　　2 結(jié)果

　　2．1 小鼠一股狀態(tài)除正常對照組外，各組小鼠自灌胃乙醇第3天出現(xiàn)易激惹、反抗性增強或減弱、聚堆，部分小鼠出現(xiàn)腹部脹大，進食及飲水量減少，毛色無潤澤，稍豎立，隨著灌胃時間的延長上述現(xiàn)象加重。與模型組比較，不同劑量白藜蘆醇給藥組小鼠一般狀態(tài)有改善，高劑量組更明顯。

　　2．2 白藜蘆醇對小鼠體重、肝指數(shù)的影響見表1。由表1可以看出灌胃乙醇可使小鼠體質(zhì)量和肝指數(shù)降低，與模型組比較，白藜蘆醇各給藥組體質(zhì)量和肝指數(shù)有所增加，且有劑量依賴性。

　　2．3 白藜蘆醇對小鼠血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶的影響見表2。表2結(jié)果顯示，模型組小鼠血清A 和AST明 高于正常組，高自藜蘆醇各劑量組血清ALT活力和AST活力顯著低于模型組(P <0．05，P<0．01)，高劑量組作用更明顯。

　　2．4 白藜蘆醇對小鼠肝組織MDA、SOD的影響見表3。由表3可見，模型組高肝組織SOD的活性明顯降低，而MDA含量明顯升高；與模型組比較，白藜蘆醇可以顯著提高肝組織SOD的活性和降低MDA的含量，呈明顯劑量效應(yīng)關(guān)系。

　　2．5 白藜蘆醇對小鼠肝組織外觀及病理改變的影響 正常對照組肝臟外觀呈紅褐色，質(zhì)地軟而富有彈性；模型組則肝臟表砸呈黃褐色，筆耕論文，有些呈灰白色，彈性差；白藜蘆醇符給藥組多數(shù)外觀介于對照組與模型紺之間。HE染色光鏡下見：正常組肝小葉結(jié)構(gòu)清晰，肝細(xì)胞索排列規(guī)則，以中央靜脈為中心，呈放射狀排列，肝細(xì)胞未見異常改變；模型組小鼠肝細(xì)胞索排列紊亂，細(xì)胞可見大小不等、分布不均的脂滴，有空泡樣病變，部分肝細(xì)胞溶解壞死或細(xì)胞核溶解，大量炎細(xì)胞浸潤；白藜蘆醇各給藥組肝組織病理改變有所減輕，部分肝細(xì)胞出現(xiàn)水腫與脂肪變性，可見點狀壞死，高劑量組有少數(shù)肝細(xì)胞水腫，輕度脂肪變性及壞死。

　　3 討論肝臟足酒精的代謝器官，肝細(xì)胞對酒精及其衍生物乙醛的影響極為敏感，過量飲酒可造成肝臟不同程度的損傷。據(jù)統(tǒng)計，重度飲酒精者巾90％～100％ 有一定程度的脂肪肝，lO％～35％ 可發(fā)展成酒精性肝炎，8 ～20％將發(fā)展為肝硬化。

　　酒精在肝細(xì)胞內(nèi)會產(chǎn)生過多的氧應(yīng)激產(chǎn)物，如OH一、O，H0等自由基。這些自由基可激活磷脂酶及脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，降低膜磷脂，改變其通透性和流動性，從而改變與膜結(jié)合的酶、受體和離子通道的微環(huán)境，影響其功能。因此，血清轉(zhuǎn)氨酶活性升高是肝細(xì)胞受損的敏感性指標(biāo) 。實驗結(jié)果顯示，模型紺小鼠血清ALT~AST活性與正常對照組相比明最升高，白藜蘆醇可呈劑量依賴性明顯降低血清ALT、AST活性，說明白藜蘆醇對乙醇誘導(dǎo)的小鼠急性肝損傷具有一定的保護作用。