醫(yī)學(xué)論文論改良嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)稀釋液及應(yīng)用
嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)臨床常見的是直接計(jì)數(shù)、涂片白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)和血球計(jì)數(shù)儀分類計(jì)數(shù)3種方法。但是臨床上為了解疾病進(jìn)展過程,需要?jiǎng)討B(tài)觀察嗜酸性粒細(xì)胞的變化,往往采用嗜酸性粒細(xì)胞直接計(jì)數(shù)。文獻(xiàn)報(bào)道”。嗜酸性粒細(xì)胞直接計(jì)數(shù)的稀釋液較多,用等滲的生理鹽水配制嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)稀釋液,與《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》推薦的稀釋液相比,各有優(yōu)缺點(diǎn)。
我院探討使用血小板計(jì)數(shù)稀釋液來配制嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)稀釋液,在臨床實(shí)踐了3年,計(jì)數(shù)結(jié)果準(zhǔn)確可靠,報(bào)告如下。
1 材料與方法
1.1 試劑《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》推薦的稀釋液配制詳見《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》。嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)稀釋液。稱取草酸銨1.Og,EDTA.2Na 0.012g,伊紅0.2g,溶于50mL蒸餾水中,再加人0.6mL TritonX一100,加蒸餾水至lOOmL。
1.2 方法于試管中加入稀釋液0.38mL,取患者末梢血(或EDTA.2K抗凝全血)0.02 mL,混勻,5min后沖入計(jì)數(shù)板的兩計(jì)數(shù)池內(nèi),靜置3~5min。用低倍鏡計(jì)數(shù),鏡下嗜酸性粒細(xì)胞被染成桔紅色,其它未被破壞的細(xì)胞幾乎不著色。計(jì)數(shù)兩個(gè)計(jì)數(shù)室10個(gè)大方格(中央和四角大方格)內(nèi)嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)。計(jì)算嗜酸性粒細(xì)胞/L=10個(gè)大方格內(nèi)嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)X20×10 /L。
2 結(jié)果
2.1 對(duì)比試驗(yàn)取住院121例患者的EDTA.2K抗凝全血,分別用《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》推薦的稀釋液(Y)與本法稀釋液(X)進(jìn)行嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù),結(jié)果本法稀釋液(163.4±34.7)×106/L,推薦稀釋液(165.0±35.1)×10/L,2種稀釋液計(jì)數(shù)結(jié)果差異無顯著性(P>0.05),其相關(guān)系數(shù)r=0.991,相關(guān)方程Y=1.0216X +3.1247。
2.2 著色時(shí)問比較 將稀釋液與抗凝全血混合后,分別在120、180、240、270、300s進(jìn)行直接計(jì)數(shù),《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》推薦的稀釋液在300s后嗜酸性粒細(xì)胞被染成紅色,本法稀釋液在180s后嗜酸性粒細(xì)胞被染成紅色。
2.3 重復(fù)性試驗(yàn)用本法稀釋液進(jìn)行嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)25次重復(fù)試驗(yàn),x±S=(226.1±6.9)X 10 /L,CV=3.1%。
3 討論文獻(xiàn)報(bào)道,筆耕論文,嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)稀釋液有很多種,主要是圍繞破壞紅細(xì)胞和部分白細(xì)胞,嗜酸性粒細(xì)胞不被破壞且著色進(jìn)行改進(jìn)的。根據(jù)草酸銨有破壞紅細(xì)胞的作用,巧妙地運(yùn)用血小板計(jì)數(shù)稀釋液來配制嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)稀釋液。我們?cè)谂渲蒲“逵?jì)數(shù)稀釋液的同時(shí),在每100 mL血小板計(jì)數(shù)稀釋液中加入伊紅0.2g、0.6mL TritonX一100即可成為嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)稀釋液,這樣就可以簡(jiǎn)化嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)稀釋液配制過程。ED—TA.2Na有抗凝和防止草酸鈣沉淀作用。表面活性劑TritonX一100能加速染料溶解,增強(qiáng)染料對(duì)細(xì)胞的滲透作用,從而使嗜酸性粒細(xì)胞著色加快。TritonX一100的濃度為0.6%時(shí),只破壞除嗜酸性粒細(xì)胞以外的細(xì)胞,嗜酸性粒細(xì)胞幾乎不受影響。本稀釋液沒使用揮發(fā)性試劑,這樣稀釋液保質(zhì)期就相對(duì)較長,使用一年之久,仍效果很好。本法具有試劑配制簡(jiǎn)單,著色時(shí)間短,試劑保質(zhì)期長,一種試劑2種用途等優(yōu)點(diǎn)。
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