發(fā)布時(shí)間：2020-11-12 06:30

　　 異補(bǔ)骨脂查爾酮的農(nóng)藥學(xué)命名為苯丙烯菌酮,它是從豆科植物補(bǔ)骨脂種子中提取的抑菌活性成分,對(duì)蘋果腐爛病菌、水稻稻瘟病菌、黃瓜炭疽病菌、番茄炭疽病菌、禾谷鐮刀病菌等15種病原真菌均有較好的抑制活性。本實(shí)驗(yàn)首先以水稻稻瘟病菌為供試菌,采用紫外分光光度法和熒光分光光度法對(duì)細(xì)胞壁幾丁質(zhì)水解酶及其合成酶,葡聚糖水解酶及其合成酶進(jìn)行活性測(cè)定,并對(duì)兩種水解酶相應(yīng)的水解產(chǎn)物進(jìn)行含量測(cè)定,探究苯丙烯菌酮對(duì)水稻稻瘟病菌細(xì)胞壁的作用;測(cè)定了水稻稻瘟病菌細(xì)胞胞外磷物質(zhì)濃度,PI-DNA復(fù)合物熒光強(qiáng)度;采用氣質(zhì)聯(lián)用方法測(cè)定了甾醇類物質(zhì)含量,進(jìn)一步解釋殺菌劑對(duì)菌體細(xì)胞膜的影響;然后結(jié)合計(jì)算機(jī)分子模擬技術(shù),對(duì)幾丁質(zhì)酶進(jìn)行同源建模、活性位點(diǎn)預(yù)測(cè)、幾丁質(zhì)酶動(dòng)力學(xué)分析、幾丁質(zhì)酶與小分子復(fù)合物動(dòng)力學(xué)分析、分子對(duì)接和結(jié)合自由能計(jì)算等工作探究殺菌劑與幾丁質(zhì)酶的相互作用;最后通過SDS-PAGE蛋白凝膠電泳試驗(yàn)觀察苯丙烯菌酮對(duì)菌體內(nèi)蛋白生成及含量的影響。通過以上研究得出以下結(jié)論:苯丙烯菌酮可以調(diào)節(jié)細(xì)胞壁幾丁質(zhì)酶、葡聚糖酶及其合成酶的活性,并以氫鍵方式與幾丁質(zhì)酶的ASP267和ARG276殘基結(jié)合,與TYR270,PRO271,VAL272,LEU310,PRO311,TYR316和LEU317這些非極性的氨基酸殘基形成重要的疏水作用,破壞了細(xì)胞壁的結(jié)構(gòu)和功能;細(xì)胞膜相關(guān)實(shí)驗(yàn)表明苯丙烯菌酮處理組,菌體細(xì)胞膜的流動(dòng)性和完整性遭到破壞,加速了細(xì)胞凋亡進(jìn)程;蛋白電泳結(jié)果也顯示細(xì)胞內(nèi)蛋白的種類和數(shù)量發(fā)生了相應(yīng)的變化。通過以上研究為新型殺菌劑的開發(fā)提供思路。
【學(xué)位單位】：沈陽(yáng)化工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：S435.111.41
【部分圖文】：

圖 1-1 黃酮類化合物的結(jié)構(gòu)柚子，酸橙）的果肉，果皮中含主要包括抗微生物，抗腫瘤，抗物，它對(duì)酵母菌之外的大部分微對(duì)金黃色葡萄球菌有一定的抑制率高于對(duì)照組，膜通透性隨著處用最好；同時(shí)在細(xì)菌蛋白質(zhì)和苷鋅和柚皮苷銅絡(luò)合物后細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞死亡，對(duì)細(xì)胞的破壞作用由柚皮苷及其金屬絡(luò)合物以細(xì)菌細(xì)物質(zhì)外泄，滲透率增大，膜通透

圖 1-1 黃酮類化合物的結(jié)構(gòu)1.3.2 黃酮類化合物殺菌機(jī)制柚皮苷在蕓香科植物（如柚子，酸橙）的果肉，果皮中含量較多，也是水果苦味的來(lái)源（圖 1-2）。柚皮苷的生物活性主要包括抗微生物，抗腫瘤，抗炎，抗氧化等功能。柚皮苷按結(jié)構(gòu)可以歸為雙氫類黃酮化合物，它對(duì)酵母菌之外的大部分微生物生長(zhǎng)都有抑制作用。陳婧等認(rèn)為柚皮苷及其金屬絡(luò)合物對(duì)金黃色葡萄球菌有一定的抑制作用，在膜通透性實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)處理組細(xì)菌的電解質(zhì)相對(duì)滲透率高于對(duì)照組，膜通透性隨著處理時(shí)間的延長(zhǎng)效果更為明顯，其中柚皮苷-Zn 對(duì)葡萄球菌的作用最好；同時(shí)在細(xì)菌蛋白質(zhì)和核酸泄露實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)：分別向菌體培養(yǎng)液中加入柚皮苷，柚皮苷鋅和柚皮苷銅絡(luò)合物后細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)和核酸不斷的泄露，大量的內(nèi)容物流出最終導(dǎo)致菌體細(xì)胞死亡，對(duì)細(xì)胞的破壞作用由強(qiáng)到弱依次是柚皮苷銅，柚皮苷鋅和柚皮苷[53]。由此可見，柚皮苷及其金屬絡(luò)合物以細(xì)菌細(xì)胞膜為靶點(diǎn)，通過破壞細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)使菌體內(nèi)蛋白質(zhì)和核酸類物質(zhì)外泄，滲透率增大，膜通透性增加，細(xì)胞最終變?yōu)榭諝せ蛘咦優(yōu)闅堅(jiān)�達(dá)到殺菌效果。

圖 1-3 查耳酮類化合物的結(jié)構(gòu)菌機(jī)制類化合物殺菌作用時(shí)選用四種化合物進(jìn)行bavachalcone，6-prenylapigenin 和 4-hydrox，2，3，4 對(duì)金黃色葡萄球菌最小抑制濃度下的抑菌作用和慶大霉素，諾氟沙星效果相μg/mL 和 16μg/mL�；�合物 4 的最小抑菌 為了進(jìn)一步探究化合物對(duì)金黃色葡萄球菌物 4 進(jìn)行研究，處理組化合物在最低抑制迅速減少，部分細(xì)胞膜發(fā)生溶解作用。使（35S）甲硫氨酸來(lái)評(píng)估化合物對(duì)細(xì)菌蛋白物 1，2，4 處理后細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)雖然有少量蛋抑制作用，其作用與諾氟沙星、利福平相當(dāng)
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本文編號(hào)：2880383