發(fā)布時(shí)間：2020-11-16 18:12

　　 華山松大小蠹(Dendroctonus armandi Tsai et Li),主要分布于我國(guó)秦嶺巴山林區(qū),是危害華山松(Pinus armandi Franch)的主要蛀干害蟲(chóng),其主要選擇危害樹(shù)齡30年以上的健康華山松,給秦嶺巴山林區(qū)的生態(tài)系統(tǒng)帶來(lái)巨大損失,嚴(yán)重地影響了該區(qū)域的生態(tài)環(huán)境健康和林業(yè)可持續(xù)發(fā)展。研究表明西部松小蠹誘劑(exo-brevicomin)在大小蠹信息素合成中起重要作用,并受保幼激素及喂食誘導(dǎo)調(diào)節(jié)。因此,研究大小蠹exo-brevicomin路徑相關(guān)基因在不同時(shí)期、不同組織和不同處理?xiàng)l件的表達(dá)水平,對(duì)揭示大小蠹信息素的合成具有具有十分重要的價(jià)值和意義。應(yīng)用RACE和qRT-PCR等分子生物學(xué)技術(shù),研究華山松大小蠹(Z)-6-壬烯-2-醇脫氫酶(ZnoDH)和CYP6CR1基因在不同時(shí)期、組織和不同處理下的表達(dá),取得以下研究結(jié)果:1.通過(guò)同源克隆,獲得華山松大小蠹exo-brevicomin路徑CYP6CR1基因序列全長(zhǎng),為1769 bp,經(jīng)氨基酸序列相似度比較分析,確定為P450家族基因;獲得華山松大小蠹exo-brevicomin路徑ZnoDH基因序列片段,確定為SDR家族基因,片段長(zhǎng)度為566 bp。2.華山松大小蠹CYP6CR1基因分子質(zhì)量為146.93 kDa,編碼507個(gè)氨基酸,等電點(diǎn)為5.00。3.華山松大小蠹CYP6CR1和ZnoDH基因在不同發(fā)育期表達(dá)差異顯著(p0.01),其中蛹期表達(dá)量最高,完全羽化成蟲(chóng)期和入侵成蟲(chóng)期表達(dá)差異顯著。4.華山松大小蠹CYP6CR1和ZnoDH基因在不同組織和雌雄成蟲(chóng)間的表達(dá)量差異顯著(p0.01),雌雄成蟲(chóng)在后腸表達(dá)量最高;雌性成蟲(chóng)CYP6CR1在脂肪體中的表達(dá)量高于雄性成蟲(chóng),而ZnoDH則在雌性成蟲(chóng)前中腸的表達(dá)量高于雄性成蟲(chóng);CYP6CR1和ZnoDH在其余各組織中的表達(dá)量均為雄性成蟲(chóng)高于雌性成蟲(chóng)。5.華山松大小蠹CYP6CR1和ZnoDH基因在不同時(shí)間保幼激素處理?xiàng)l件下差異顯著(p0.05),2個(gè)基因的表達(dá)量隨保幼激素處理時(shí)間的延長(zhǎng)而增加,到達(dá)最大表達(dá)量后逐漸降低,36 h時(shí)CYP6CR1基因在雄性成蟲(chóng)中的表達(dá)量高于雌性成蟲(chóng),而在其它時(shí)間雄性成蟲(chóng)的表達(dá)量低于雌性成蟲(chóng)。6.華山松大小蠹CYP6CR1和ZnoDH基因表達(dá)量隨喂食時(shí)間的延長(zhǎng)而降低,到達(dá)最低表達(dá)量后逐漸回升;華山松大小蠹雄性成蟲(chóng)CYP6CR1和ZnoDH基因在不同喂食時(shí)間表達(dá)量差異顯著(p0.05),雄性成蟲(chóng)在不同時(shí)間的表達(dá)量均高于雌性成蟲(chóng)。
【學(xué)位單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類(lèi)】：S763.7
【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 華山松大小蠹研究概況
        1.1.1 小蠹的種類(lèi)及其分布
        1.1.2 主要大小蠹種類(lèi)和分布
        1.1.3 華山松大小蠹生物學(xué)特性及相關(guān)研究
    1.2 信息素研究概況
        1.2.1 昆蟲(chóng)信息素
        1.2.2 大小蠹化學(xué)信息素
    1.3 昆蟲(chóng)信息素exo-brevicomin合成路徑研究概況
        1.3.1 exo-brevicomin合成途徑研究
        1.3.2 exo-brevicomin路徑相關(guān)酶基因
    1.4 研究的目的和意義
        1.4.1 研究的目的和意義
        1.4.2 研究?jī)?nèi)容
第二章 華山松大小蠹CYP6CR1和ZnoDH基因的克隆
    2.1 材料與方法
        2.1.1 試驗(yàn)材料
            2.1.1.1 采樣地概況和供試?yán)ハx(chóng)采集
            2.1.1.2 主要試劑
            2.1.1.3 主要試驗(yàn)儀器
        2.1.2 試驗(yàn)方法
            2.1.2.1 華山松大小蠹總RNA提取
            2.1.2.2 cDNA第一鏈合成
            2.1.2.3 引物的設(shè)計(jì)及合成
        2.1.3 基因保守片段的獲取
            2.1.3.1 CYP6CR1和ZnoDH基因保守片段的擴(kuò)增
            2.1.3.2 CYP6CR1和ZnoDH基因保守片段的純化回收
            2.1.3.3 CYP6CR1和ZnoDH基因保守片段的連接與轉(zhuǎn)化
            2.1.3.4 CYP6CR1和ZnoDH基因保守片段的陽(yáng)性克隆篩選與檢測(cè)
        2.1.4 基因全長(zhǎng)的獲取
            2.1.4.1 華山松大小蠹CYP6CR1和ZnoDH基因全長(zhǎng)模板的準(zhǔn)備
            2.1.4.2 華山松大小蠹CYP6CR1和ZnoDH基因RACE引物的設(shè)計(jì)與合成
            2.1.4.3 華山松大小蠹CYP6CR1和ZnoDH基因5′和3′的擴(kuò)增
    2.2 試驗(yàn)結(jié)果與分析
        2.2.1 CYP6CR1 基因全長(zhǎng)序列
        2.2.2 ZnoDH基因片段
第三章 華山松大小蠹CYP6CR1和ZnoDH基因的生物信息學(xué)分析
    3.1 材料與方法
        3.1.1 試驗(yàn)材料
        3.1.2 試驗(yàn)方法
    3.2 試驗(yàn)結(jié)果與分析
        3.2.1 CYP6CR1 基因序列全長(zhǎng)及其分析
        3.2.2 系統(tǒng)發(fā)育分析
            3.2.2.1 華山松大小蠹CYP6CR
            3.2.2.2 華山松大小蠹ZnoDH
        3.2.3 親水性/疏水性分析
        3.2.4 亞細(xì)胞定位與功能結(jié)構(gòu)域分析
        3.2.5 二級(jí)結(jié)構(gòu)和三級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)
第四章 華山松大小蠹CYP6CR1和ZnoDH基因在不同發(fā)育階段、不同組織、以及不同處理下的表達(dá)分析
    4.1 材料與方法
        4.1.1 試驗(yàn)材料
        4.1.2 試驗(yàn)方法
            4.1.2.1 華山松大小蠹總RNA的提取
            4.1.2.2 華山松大小蠹cDNA反轉(zhuǎn)錄
            4.1.2.3 定量引物的設(shè)計(jì)與合成
            4.1.2.4 熒光定量檢測(cè)
        4.1.3 定量數(shù)據(jù)處理與分析
    4.2 結(jié)果與分析
        4.2.1 不同發(fā)育階段CYP6CR1、ZnoDH基因表達(dá)分析
        4.2.2 不同組織CYP6CR1、ZnoDH基因表達(dá)分析
        4.2.3 喂食處理對(duì)CYP6CR1、ZnoDH基因表達(dá)分析
        4.2.4 保幼激素處理對(duì)CYP6CR1、ZnoDH基因表達(dá)分析
第五章 討論
第六章 結(jié)論
附錄
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡(jiǎn)介

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