發(fā)布時間：2020-11-18 16:50

　　 獼猴桃潰瘍病(Kiwifruit bacterial canker)嚴(yán)重阻礙了獼猴桃產(chǎn)業(yè)的發(fā)展,造成該病害的病原主要是丁香假單胞獼猴桃致病變種(Pseudomonas syringae pv.Actinidiae,Psa)。該病害爆發(fā)快,不僅對陜西省,對全球的獼猴桃產(chǎn)區(qū)都造成了嚴(yán)重的損失。目前,生產(chǎn)上主要應(yīng)用化學(xué)藥劑對獼猴桃潰瘍病進(jìn)行防治,研究發(fā)現(xiàn)Psa已對部分農(nóng)藥產(chǎn)生抗性,很多學(xué)者認(rèn)為防治獼猴桃潰瘍病最有效的方法是栽培抗病品種,但對陜西省品種的抗病機(jī)理研究較少。本研究對陜西省9個常見栽培品種對獼猴桃潰瘍病進(jìn)行抗性評價,明確品種的抗病性,并以篩選出的抗、感品種為材料,比較病原菌在侵染過程的差異、防御酶活性的變化、抗性相關(guān)基因的表達(dá),初步分析獼猴桃抗?jié)�瘍病的機(jī)制,為利用抗病品種防治病害提供理論依據(jù)。取得的主要研究結(jié)果如下:1.通過離體枝條定量接種試驗(yàn),比對分析了陜西省9個常見獼猴桃栽培品種對潰瘍病的抗性,結(jié)果表明:9個品種的抗病性差異顯著,抗病性強(qiáng)弱表現(xiàn)為徐香海沃德秦美、亞特金艷、翠香、華優(yōu)西選紅陽;中華品種紅陽(Actinidia chinensis cv.Hongyang)顯癥最早(10 d)、病斑長度最大(15.99 cm)抗病性最弱,顯著低于其它測試品種,相比較感病品種紅陽而言,美味品種徐香(A.deliciosa cv.Xuxiang)表現(xiàn)為顯癥最晚(15 d)、病斑最小(1.76 cm)、抗病性最強(qiáng),顯著優(yōu)于其它測試品種。2.對Psa標(biāo)記菌株M228-GFPuv在抗病品種徐香和感病品種紅陽枝條和葉片中的定殖和擴(kuò)展動態(tài)進(jìn)行檢測。結(jié)果顯示:在枝條中,感病品種紅陽的顯癥時間早,10 d就能觀察到明顯癥狀,在0-4 cm范圍內(nèi)都可以檢測到大量Psa,菌量最大為5.67×10~8CFU/g;而抗病品種徐香的顯癥時間較晚,15d時才觀察到輕微癥狀,Psa只存在于0-1cm范圍內(nèi),菌量最大為2.86×10~8 CFU/g。對葉盤的真空滲透接種發(fā)現(xiàn),徐香和紅陽都在接種后2d顯癥,在紅陽中,病斑的擴(kuò)展速度較快,6 d時幾乎布滿整個葉盤;而在徐香葉盤的病斑大小擴(kuò)展緩慢,5 d后病斑不再擴(kuò)展,也僅占整個葉盤面積的10%。對葉脈的注射接種發(fā)現(xiàn),紅陽在接種后12 d時熒光強(qiáng)度及擴(kuò)展距離達(dá)到最大;徐香在接種后15 d時熒光強(qiáng)度最強(qiáng)扔比紅陽弱,擴(kuò)展范圍也僅限接種點(diǎn)附近。3.測定接種前后不同時間點(diǎn)的4種防御酶活性的變化�？共∑贩N徐香和感病品種紅陽的防御酶活性與對照相比沒有顯著差異,上升幅度存在顯著差異,接種后均出現(xiàn)“先升高后降低”的變化趨勢。在枝條中,接種后徐香的POD和PAL活性顯著高于紅陽,顯癥前期達(dá)到峰值分別是對照的2.81倍和2.56倍,而在紅陽中峰值出現(xiàn)時間晚(20d),分別是對照的1.9倍和1.87倍。SOD活性在抗、感病品種接種前后均沒有顯著性差異,而徐香的CAT活性在顯癥前酶活性上升快在5 d時達(dá)到峰值,在紅陽中顯癥后期達(dá)到峰值且高于徐香。在葉片中,2個品種的四種防御酶活性變化較對照顯著升高,徐香的酶活性峰值較紅陽早。其中徐香的POD和PAL活性變化顯著,分別于接種后10 d和6 d達(dá)到峰值為對照的3.15倍和2.09倍,峰值出現(xiàn)時間早于紅陽且酶活性變化幅度比紅陽大;SOD活性在兩品種中自接種后呈現(xiàn)持續(xù)升高的趨勢品種間差異較小;CAT活性在徐香中6 d時達(dá)到峰值比紅陽早2 d,酶活性變化差異不明顯,分別為對照的2.37倍和2.26倍。4.利用qRT-PCR對接種前后獼猴桃枝條和葉片中已報道的防御相關(guān)基因的定量分析發(fā)現(xiàn),接種后徐香中各基因均上調(diào)表達(dá)且高于紅陽;特別是PR1、PR5基因、PAL和POD基因的表達(dá)量,在徐香的枝條和葉片中的顯著上調(diào)表達(dá);而在紅陽的枝條和葉片中低量上調(diào)表達(dá);R類基因PRS2和Rpm1及響應(yīng)PAMP的基因Rboh及CDPK在徐香中上調(diào)表達(dá)階段對應(yīng)在紅陽中的下調(diào)表達(dá),表明這些基因的表達(dá)或在徐香的抗病性中起重要作用。
【學(xué)位單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：S436.634
【部分圖文】：

圖 2-3 徐香和紅陽獼猴桃枝條中病原菌定殖的動態(tài)變化Fig 2-3 Dynamic changes of colonization of pathogenic bacteria in the branches of kiwifruit canes inXuxiang and Hongyang2.2.3 Psa 在獼猴桃品種徐香和紅陽葉片中的定殖動態(tài)為了實(shí)時觀察 Psa 在不同品種中的侵染情況，對徐香和紅陽的離體葉片葉盤滲透接種比較，如圖 2-4 試驗(yàn)結(jié)果所示：對葉盤真空滲透后，兩種葉片的發(fā)病程度呈現(xiàn)出顯著的差異，2 d 后徐香和紅陽葉盤都出現(xiàn)了病斑，此后徐香葉盤的病斑大小擴(kuò)展緩慢，5 d 后病斑不再擴(kuò)展，也僅占整個葉盤面積的 10%；而在紅陽中，病斑的擴(kuò)展速度較快，6 d 時病斑面積達(dá)到最大，幾乎布滿整個葉盤。01002002d 4d 6d 8d 10d 12d 14d 16d 18d 20dC接種時間Inoculation time

圖 2-5 Psa 在徐香和紅陽葉脈中擴(kuò)展動態(tài)比較注：接種后葉片在綠色熒光顯微鏡（Leica MZ12）下觀察。標(biāo)尺=2mm。Fig 2-5 The dynamic comparison of GFPuv-labeled Psa colonization and migration in the leaf veins ofXuxiang and HongyangNote: The inoculated leaves were observed under a fluorescence stereomicroscope (Leica MZ12) atdifferent days after inoculation. Bar = 2 mm.2.3 討論目前，國內(nèi)外對獼猴桃品種抗性評價較多，通過室內(nèi)離體接種的方法對品種之間進(jìn)行評價抗性，可變因素少，不受外界環(huán)境的變化，被認(rèn)為是一種行之有效且較為簡單、高效和準(zhǔn)確的方法。基于前人的研究經(jīng)驗(yàn)，本研究通過離體枝條接種對陜西省獼猴桃常見栽培品種進(jìn)行了品種抗性鑒定，試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)不同品種對潰瘍病的抗性具有顯著性的差異。根據(jù)發(fā)病枝條病斑大小的統(tǒng)計結(jié)果，徐香的病斑長度最小，僅為 1.76cm，表現(xiàn)為抗性最強(qiáng)；紅陽枝條的病斑長度最大為 15.99 cm，表現(xiàn)為抗性最弱，為最易感病品種。室內(nèi)抗性評價結(jié)果與本實(shí)驗(yàn)室田間連續(xù) 3 年的統(tǒng)計結(jié)果趨于一致（秦虎

西北農(nóng)林科技大學(xué)碩士學(xué)位論文著高于紅陽，隨后酶活性有所降低，15 d 時與對照水平相當(dāng)，直到接種 20 d 時酶活性再次達(dá)到峰值，酶活性出現(xiàn)的兩次高峰分別是對照組酶活性的 2.02 倍和 1.88 倍。而紅陽在受到病原菌侵染后，CAT 活性持續(xù)升高，且變化幅度顯著高于徐香，于接種后 2d 酶活性達(dá)到峰值為對照組酶活性的 2.68 倍。上述結(jié)果表明感病前期（5 d）徐香較紅陽的 CAT 酶活性上升快，表明該階段 CAT 活性可能與抗性有關(guān)。
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本文編號：2888950