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吉首鉀長石礦區(qū)土壤中固氮細菌的選育

發(fā)布時間:2020-12-25 23:22
  我國作為農(nóng)業(yè)生產(chǎn)大國,每年需消耗大量的工業(yè)氮肥,工業(yè)氮肥的使用會造成農(nóng)產(chǎn)品品質(zhì)下降、土壤板結(jié)、水體富營養(yǎng)化、生產(chǎn)成本增加等一系列問題,而微生物復(fù)合肥料能解決這些問題,所以,選育高效率的微生物固氮菌株對發(fā)展可持續(xù)綠色農(nóng)業(yè)具有重要的意義。為了得到高效固氮菌,在吉首鉀長石礦區(qū)采集土壤樣品,采用純培養(yǎng)方法從中分離、篩選得到具有較強固氮能力的細菌28株。對28株細菌進行形態(tài)學(xué)觀察,生理生化鑒定,以及采用分子生物學(xué)手段進行16S r RNA序列分析,發(fā)現(xiàn)28株細菌別屬于8個科,10個屬,其中11株菌為根瘤菌屬,6株菌為芽胞桿菌屬,表明從鉀長石礦區(qū)土壤中分離獲得的固氮菌具有較好的多樣性,根瘤菌為優(yōu)勢種群。分別從每個屬中選取生長狀況較好的菌株作為代表菌株,通過發(fā)酵和凱氏定氮法測定,發(fā)現(xiàn)各屬代表菌株的固氮能力存在較大差異,根瘤菌和芽孢桿菌屬代表菌株的固氮能力最強,其中根瘤菌代表菌株L13的96h發(fā)酵液氮含量達到10.71 mg/L,其次是芽孢桿菌代表菌株L10。為了能夠更好的了解和掌握菌株L13和L10的生長特性,對菌株L13和L10生長的溫度、p H、滲透壓、不同碳源等因子對固氮能力的影響進行了比較。... 

【文章來源】:吉首大學(xué)湖南省

【文章頁數(shù)】:46 頁

【學(xué)位級別】:碩士

【部分圖文】:

吉首鉀長石礦區(qū)土壤中固氮細菌的選育


各固氮菌發(fā)酵液中氮含量

序列,PCR擴增,固氮細菌,芽胞桿菌屬


2.3.3 固氮細菌的 16S rRNA 基于片段的 PCR 擴增瓊脂糖電泳結(jié)果用16S rRNA基因的特異性引物從細菌基因組DNA中成功的擴增出大小約為1.6 kb的DNA片段,和預(yù)期的DNA片段大小一致。(如圖2.2)圖 2.2 細菌 16S rRNA 基因片段的 PCR 擴增Fig.2.2 PCR amplification of 16S rRNA gene fragments from bacterial strains2.3.4 固氮細菌的系統(tǒng)發(fā)育分析對28株固氮細菌的16S rDNA進行序列測定,將獲得的序列通過BLAST程序與GenBank數(shù)據(jù)庫中已報發(fā)道的16S rDNA序列進行相似性比對分析。結(jié)果表明,28株固氮細菌分別屬于腸桿菌科、假單胞菌科、伯克菌科、葉桿菌科、布魯菌科、根瘤菌科、芽胞桿菌科和類芽胞桿菌科8個科。分屬伯克霍爾德屬、腸桿菌屬、劍菌屬、芽胞桿菌屬、葉桿菌屬、Mitsuaria、假單胞屬、類芽胞桿菌屬、檸檬酸桿菌屬等共10個屬,表明鉀長石礦區(qū)土壤中固氮菌種群具有多樣性。其中11株(39.28%)在系統(tǒng)發(fā)育上與根瘤菌屬(Rhizobium)關(guān)系密切,16S rDNA序列相似性高達98%~100%,為優(yōu)勢菌屬。其次6株為芽胞桿菌屬(Bacillus)。選取不同

生長曲線,生長曲線,菌株


3.3 結(jié)果與分析3.3.1 固氮細菌 L10 和 L13 的生長曲線兩株固氮能力最高的L10、L13細菌的生長曲線(如圖3.1)圖 3.1 菌株 L10、L13 的生長曲線Fig 3.1 Growht curve of strain L10 of L13由圖3.1可知,固氮菌株L10和L13的延滯期分別為0~12h和0~6h,對數(shù)生長期分別為12~72h和6~54h,穩(wěn)定期分別為72~96h和54~96h。對比L10和L13我們可以發(fā)現(xiàn)兩者的生長曲線存在差異,4個時期都不同,與L13相比,菌株L10的適應(yīng)期稍長,而其對數(shù)期也較長,但是平穩(wěn)期較短,較快的進入了衰亡期。表明相同情況下

【參考文獻】:
期刊論文
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博士論文
[1]微生物肥料及其微生態(tài)效應(yīng)研究[D]. 郭春景.東北林業(yè)大學(xué) 2004

碩士論文
[1]水稻根際促生菌的分離鑒定及其對水稻作用效果的研究[D]. 胡雪.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2010
[2]微生物肥料作用機理的初步研究[D]. 劉健.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2000



本文編號:2938577

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