發(fā)布時(shí)間：2024-06-11 05:15

　　目的:煙草除用于制造卷煙外,還是心血管疾病防治藥物輔酶Q10(CoQ10)的化學(xué)合成前體物茄尼醇的最主要原料。煙葉中茄尼醇含量為0.3%-3%左右,但煙葉次生代謝物種類豐富,從中較難提取高純度的茄尼醇。毛狀根生長(zhǎng)迅速,可以合成次生代謝物。本研究用四種發(fā)根農(nóng)桿菌(Agrobacterium rhizogenes)感染煙草葉片誘導(dǎo)產(chǎn)生毛狀根,探討適合煙草毛狀根誘導(dǎo)的適宜菌株,以誘導(dǎo)子作為調(diào)控因子對(duì)煙草毛狀根的生長(zhǎng)和茄尼醇積累進(jìn)行研究,篩選對(duì)煙草毛狀根生長(zhǎng)和茄尼醇積累誘導(dǎo)效果更好的誘導(dǎo)子。方法:本研究利用四種發(fā)根農(nóng)桿菌誘導(dǎo)煙草無(wú)菌葉片,篩選適合煙草毛狀根誘導(dǎo)的菌株。在接種量和基本培養(yǎng)基兩個(gè)方面優(yōu)化培養(yǎng)條件,以獲得生長(zhǎng)迅速、茄尼醇含量相對(duì)較高的煙草毛狀根根系,通過(guò)PCR分子檢測(cè)農(nóng)桿菌基因rolB驗(yàn)證是否發(fā)生農(nóng)桿菌基因的轉(zhuǎn)移。在培養(yǎng)的0d,9d,18d分別添加5μM,10μM,20μM,50μM的H₂O₂和10μM,50μM,100μM,200μM的水楊酸(SA),研究煙草毛狀根茄尼醇誘導(dǎo)的適宜誘導(dǎo)子以及其添加時(shí)間和濃度對(duì)煙草毛狀根生長(zhǎng)量茄尼醇含量的影...

【文章頁(yè)數(shù)】：49 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
abstract
第一章 引言
    1.1 研究意義
    1.2 文獻(xiàn)綜述
        1.2.1 茄尼醇概述
        1.2.2 毛狀根及次生代謝物
    1.3 本論文所要解決的問(wèn)題
第二章 煙草毛狀根的誘導(dǎo)和茄尼醇含量分析
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料和儀器試劑
        2.1.1 植物材料及菌株
        2.1.2 儀器與主要試劑
        2.1.3 主要試劑配制
        2.1.4 培養(yǎng)基配制
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 煙草無(wú)菌苗培養(yǎng)
        2.2.2 農(nóng)桿菌的活化
        2.2.3 毛狀根的誘導(dǎo)與篩選
        2.2.4 毛狀根再生苗的獲得
        2.2.5 毛狀根基因組提取
        2.2.6 毛狀根的PCR檢測(cè)
        2.2.7 茄尼醇和其他主要次生代謝物含量測(cè)定
    2.3 結(jié)果分析
        2.3.1 煙草無(wú)菌苗培養(yǎng)
        2.3.2 毛狀根的誘導(dǎo)與篩選
第三章 煙草毛狀根培養(yǎng)條件的優(yōu)化
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料和儀器試劑
        3.1.1 植物材料
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        3.1.3 培養(yǎng)基配制
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 毛狀根生長(zhǎng)曲線測(cè)定與初始接種量的選擇
        3.2.2 毛狀根基本培養(yǎng)基篩選
    3.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析
    3.4 結(jié)果與討論
        3.4.1 毛狀根生長(zhǎng)曲線測(cè)定與初始接種量的選擇
        3.4.2 毛狀根基本培養(yǎng)基篩選
第四章 誘導(dǎo)子對(duì)煙草毛狀根中茄尼醇的誘導(dǎo)
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料與試劑
        4.1.1 植物材料
        4.1.2 儀器與主要試劑
        4.1.3 培養(yǎng)基配制
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 不同誘導(dǎo)子處理對(duì)毛狀根生長(zhǎng)和茄尼醇含量的影響
        4.2.2 H₂O₂處理對(duì)茄尼醇代謝途徑關(guān)鍵基因表達(dá)量的影響
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 誘導(dǎo)子處理對(duì)毛狀根生長(zhǎng)和茄尼醇含量的影響
        4.3.2 H₂O₂處理對(duì)茄尼醇關(guān)鍵酶基因表達(dá)量的影響
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間公開(kāi)發(fā)表的論文
附錄
致謝



本文編號(hào)：3992462