發(fā)布時(shí)間：2020-12-04 11:30

　　柑橘潰瘍病是一種分布廣泛,破壞嚴(yán)重的柑橘細(xì)菌性病害。該病害病原主要通過(guò)氣孔和微傷口進(jìn)行侵染,能夠侵染多個(gè)柑橘品種并造成果實(shí),葉片和莖產(chǎn)生壞死性潰瘍病斑,嚴(yán)重影響柑橘品質(zhì)和產(chǎn)量,給柑橘產(chǎn)業(yè)帶來(lái)巨大經(jīng)濟(jì)損失。引起柑橘潰瘍病的病原為柑橘黃單胞菌柑橘亞種（Xanthomonas citri ssp.citri,簡(jiǎn)稱Xcc）,其III型分泌系統(tǒng)中的轉(zhuǎn)錄激活類（Transcription activator-like,TAL）效應(yīng)因子PthA4被證明對(duì)柑橘潰瘍病的病斑形成和細(xì)菌致病性有重要作用,如將該效應(yīng)因子敲除會(huì)導(dǎo)致病原菌無(wú)法在侵染部位形成病斑。PthA4效應(yīng)因子在進(jìn)入植物體后會(huì)直接靶向調(diào)控基因啟動(dòng)子區(qū)內(nèi)的效應(yīng)因子結(jié)合位點(diǎn)（Effector binding elements,EBEs）。當(dāng)比較葉片接菌Xcc306和PthA4缺失突變體（Xcc306?pthA4）后基因的變化情況發(fā)現(xiàn),PthA4主要通過(guò)調(diào)控植物細(xì)胞壁修改、DNA包裝及細(xì)胞分裂等基因來(lái)誘發(fā)植物產(chǎn)生病斑。通過(guò)DNA微陣列（Microarray）數(shù)據(jù)分析和EBEs預(yù)測(cè)等多種手段,最終發(fā)現(xiàn)柑橘側(cè)生器官邊界基因（Citrus lateral... 

【文章來(lái)源】：西南大學(xué)重慶市 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：130 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

PthA4調(diào)控基因的GO分析

5. CsLOB1 誘導(dǎo)基因的檢測(cè)和分析2.6 實(shí)驗(yàn)計(jì)劃路線圖圖2.6 實(shí)驗(yàn)計(jì)劃路線圖Figure 2.6 The flowchart of experiments

啟動(dòng)子/T7 終止子測(cè)序引物進(jìn)行驗(yàn)證發(fā)現(xiàn)，測(cè)序序列與 PthA4 在 NCBI 登記序列一致，表明獲得預(yù)期載體，命名為 PET28a-PthA4-PE。圖3.2 載體PET28a-PthA4-PE的酶切驗(yàn)證1,3：PET28a-PthA4-PE載體質(zhì)粒；2,4: PET28a-PthA4-PE載體質(zhì)粒經(jīng)NdeI和EcoRI雙酶切驗(yàn)證；M:1Kb plus梯度DNA標(biāo)準(zhǔn)分子量Figure 3.2 PET28a-PthA4-PE vector was confirmed by restricted enzyme digestion1,3：PET28a-PthA4-PE vector plasmid; 2,4: PET28a-PthA4-PE vector plasmid was digested with NdeI and EcoRIM：1Kb plus DNAladder轉(zhuǎn)入感受態(tài)細(xì)胞 JM109 的 pET28a-PthA4-PE 菌株進(jìn)行菌液培養(yǎng)，經(jīng)試劑盒純化回收獲得 PET28a-PthA4-PE 重組質(zhì)粒，將該質(zhì)粒轉(zhuǎn)化入表達(dá)株感受態(tài)BL21(DE3)。轉(zhuǎn)化后的菌株在加有卡那霉素的 LB 液體培養(yǎng)基內(nèi)過(guò)夜培養(yǎng)，次日利用新鮮菌液進(jìn)行再次培養(yǎng)，培養(yǎng)至OD600=0.3左右時(shí)加入終濃度為1mM的IPTG，150rpm，30 ℃條件下培養(yǎng) 5h。誘導(dǎo)表達(dá)后的蛋白經(jīng)蛋白純化試劑盒 NTP-Ni 過(guò)柱純化，再經(jīng) SDS-PAGE 聚丙烯酰胺凝膠電泳進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果顯示

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：2897525