發(fā)布時間：2020-11-09 03:15

　　 對磷脂酶D(phospholipase D,PLD)進(jìn)行重組表達(dá),并探究其在生物催化合成磷脂酰絲氨酸(phosphatidylserine,PS)中的應(yīng)用。以大腸桿菌E. coli BL21 (DE3)作為PLD的異源表達(dá)宿主,構(gòu)建重組菌E. coli BL21(DE3)/p ET-28a(+)-sspld,通過蛋白分析確定其分子量,并對培養(yǎng)條件進(jìn)行優(yōu)化,進(jìn)一步探究重組菌的酶學(xué)性質(zhì)。在有機(jī)相-水相雙相反應(yīng)體系中進(jìn)行PS的制備,并對制備工藝進(jìn)行系統(tǒng)優(yōu)化。成功構(gòu)建了重組菌株E. coli BL21 (DE3)/p ET-28a(+)-sspld,通過蛋白分析確定其分子質(zhì)量約為60 k Da。重組菌通過誘導(dǎo)條件優(yōu)化,酶活最高可達(dá)38. 58 U/m L,是優(yōu)化前的2. 26倍。PLD粗酶液的最適p H值為7. 5,最適反應(yīng)溫度為60℃。制備工藝優(yōu)化結(jié)果表明40℃條件下,在8 m L的乙酸乙酯中溶解64 mg的卵磷脂,在4 m L酶液中溶解160 mg的L-絲氨酸,得到的PS轉(zhuǎn)化率最高,可達(dá)28%,產(chǎn)量為1. 34 g/L。該P(yáng)LD粗酶液催化性能良好,為酶法制備磷脂酰絲氨酸奠定了基礎(chǔ)。
【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 菌株和質(zhì)粒
        1.1.2 主要儀器與試劑
        1.1.3 培養(yǎng)基
    1.2 方法
        1.2.1 構(gòu)建重組質(zhì)粒pET-28a （+） -sspld
        1.2.2 表達(dá)重組質(zhì)粒pET-28a （+） -sspld
        1.2.3 酶活檢測
        1.2.4 培養(yǎng)條件優(yōu)化
        1.2.5 酶學(xué)性質(zhì)
        1.2.6 產(chǎn)物PS的檢測分析
        1.2.7 PS的制備工藝優(yōu)化
2 結(jié)果與分析
    2.1 重組菌株的構(gòu)建
    2.2 重組菌株誘導(dǎo)條件優(yōu)化
    2.3 酶學(xué)性質(zhì)研究
        2.3.1 最適反應(yīng)p H和pH穩(wěn)定性
        2.3.2 最適反應(yīng)溫度和溫度穩(wěn)定性
        2.3.3 金屬離子及化學(xué)試劑對酶活的影響
    2.4 PS的制備工藝優(yōu)化
3 結(jié)論

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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【相似文獻(xiàn)】

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本文編號：2875797