發(fā)布時(shí)間：2020-11-15 15:18

　　 納豆芽孢桿菌是從日本納豆中分離的益生菌,屬于枯草芽孢桿菌的亞種。其活菌制劑以及產(chǎn)生的代謝物質(zhì)具有重要的生理功效而被廣泛關(guān)注。肽聚糖是原核細(xì)胞壁的特殊成分,真核細(xì)胞不含肽聚糖,因此肽聚糖是真核免疫系統(tǒng)識(shí)別的理想靶標(biāo)。肽聚糖識(shí)別分子可以誘導(dǎo)免疫調(diào)節(jié)物質(zhì)的釋放,從而起到免疫調(diào)節(jié)作用。為了探索納豆芽孢桿菌胞壁肽聚糖免疫調(diào)節(jié)功能,本文研究了納豆芽孢桿菌胞壁肽聚糖提取分離條件,初步分析了其理化性質(zhì)和結(jié)構(gòu)特征,研究其對(duì)小鼠免疫功能的影響,主要研究結(jié)果如下:1.優(yōu)化納豆芽孢桿菌細(xì)胞壁的提取條件以實(shí)驗(yàn)室保存的納豆芽孢桿菌為研究材料,經(jīng)增值培養(yǎng),通過(guò)Box-Behnken試驗(yàn)設(shè)計(jì)和響應(yīng)面分析確定超聲輔助提取的最佳工藝參數(shù)為:超聲波功率為314W,處理時(shí)間27min,OD600為0.66,在此條件下細(xì)胞壁最大提取得率為44.51%。2.納豆芽孢桿菌細(xì)胞壁肽聚糖的制備及化學(xué)結(jié)構(gòu)分析以得到的納豆芽孢桿菌細(xì)胞壁為原料,經(jīng)過(guò)三氯乙酸法,先后去除細(xì)胞壁中的磷壁酸、脂類物質(zhì)、蛋白質(zhì),在經(jīng)過(guò)透析,得到得率為8.5%的肽聚糖。通過(guò)溶菌酶實(shí)驗(yàn)、Bradford法、香醛法、苯酚-硫酸法、對(duì)肽聚糖組成成分進(jìn)行分析。通過(guò)紅外光譜和SDS-PAGE研究納豆芽孢桿菌肽聚糖的結(jié)構(gòu)。分析結(jié)果表明:糖總量為39.77%,蛋白質(zhì)占54.47%,總脂質(zhì)含量為4.5%。溶菌酶處理后,可溶性肽聚糖的分子量約為60kD。通過(guò)HPLC圖譜分析,確定了溶解物的出峰時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)的肽聚糖溶解物出峰時(shí)間一致。其糖鏈結(jié)構(gòu)由N-乙酰氨基葡萄糖和N-乙酰胞壁酸通過(guò)β-1,4-糖苷鍵連接而成。3.納豆芽孢桿菌肽聚糖對(duì)小鼠免疫功能的影響挑選體質(zhì)康健的昆明小鼠96只,體重18～22 g,隨機(jī)分為空白對(duì)照組、肽聚糖溶液低、中、高劑量組,每組24只。飼養(yǎng)周期7d,每24h注射一次,檢測(cè)不同劑量組對(duì)小鼠免疫指標(biāo)及其細(xì)胞因子分泌量的變化情況。根據(jù)SPSS分析結(jié)果表明:納豆芽孢桿菌肽聚糖可顯著提高小鼠的免疫器官指數(shù);肽聚糖可顯著增加血清溶血素含量,小鼠碳清除指數(shù)和遲發(fā)型超敏反應(yīng),并對(duì)小鼠脾淋巴細(xì)胞的增殖及腹腔巨噬細(xì)胞吞噬能力均有增強(qiáng)效果;肽聚糖各劑量組均能提高巨噬細(xì)胞的代謝活力,極顯著增加IL-2、IL-10、IFN-r、TNF-α的分泌量,提高NO和iNOS的表達(dá)量。
【學(xué)位單位】：江西農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：TS201.3
【部分圖文】：

肽聚糖由聚糖鏈、雙糖殘基和交聯(lián)肽的側(cè)鏈組成，形成結(jié)構(gòu)致高的網(wǎng)狀。近幾年中，國(guó)內(nèi)外研究者對(duì)肽聚糖的化學(xué)結(jié)構(gòu)、生理學(xué)活性研究，但是了解的仍然非常有限。聚糖的結(jié)構(gòu)聚糖（peptidoglycan）是一種大分子復(fù)合物，具有由二糖單元，四肽尾穩(wěn)定結(jié)構(gòu)。肽聚糖的主要骨架是由 N-乙酰葡萄糖胺(N-acetylglucosam-乙酰胞壁酸(N-acetylmuramic acid 簡(jiǎn)寫 M)通過(guò)β-1，4 糖苷鍵交替相聯(lián)聚糖鏈（圖 1-1）[45]。聚糖鏈交聯(lián)通常直接或通過(guò)位于 4 位的 D-Ala 的的氨基酸的氨基之間的短肽橋發(fā)生[46]。聚糖鏈的長(zhǎng)度也因菌種的不同存為 9 個(gè)二糖單位，最長(zhǎng)的達(dá)到 170 多個(gè)二糖單位；1 個(gè)二糖單位約長(zhǎng) 長(zhǎng)度可從 100 埃到 1700 埃左右。每個(gè)四肽鏈之間都相互交聯(lián)。在革蘭多數(shù)是兩條肽聚糖的肽鏈直接交聯(lián)，占肽鏈總數(shù)的 50%。而革蘭氏陽(yáng)性一條肽橋交聯(lián)[47]。聚糖是具有獨(dú)特生物物理性質(zhì)的袋狀分子。它可以抵抗細(xì)胞的震動(dòng)，在膨脹，空隙較寬，可以使大分子物質(zhì)擴(kuò)散出來(lái)。根據(jù)應(yīng)用程序的測(cè)定，度約是 1.5-15nm[48]。

調(diào)節(jié)免疫，是由 B 淋巴細(xì)胞介導(dǎo)產(chǎn)生復(fù)雜，大致分為三個(gè)階段，首先是抗原決定簇，然后通過(guò)刺激 T 細(xì)胞化成漿細(xì)胞和記憶細(xì)胞。接著是反值分化，形成效應(yīng) B 細(xì)胞，其中用，為同樣抗原的入侵起到快速保以與相應(yīng)的抗原特異性結(jié)合，最終有顯著的體液免疫調(diào)節(jié)作用。沈柱能的影響,研究表明，肽聚糖中、（P＜0.05，P＜0.01），高劑量組等腹腔注射給藥對(duì)小鼠免疫器官絕反應(yīng)顯示，肽聚糖組足墊厚度較對(duì)長(zhǎng)發(fā)育，提高機(jī)體對(duì)特異性抗原的

1.3.2 肽聚糖對(duì)細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞免疫，也稱細(xì)胞介導(dǎo)的免疫，是由 T 細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)，即在 T 細(xì)抗原刺激后，分化、增殖和轉(zhuǎn)化成為致敏 T 細(xì)胞，當(dāng)同一抗原重新進(jìn)入機(jī)體時(shí)，或協(xié)同殺死敏感 T 細(xì)胞及其釋放的細(xì)胞因子的免疫效應(yīng)。反應(yīng)過(guò)程分為感應(yīng)、反效應(yīng)三個(gè)階段（圖 1-3），類似于體液免疫。研究表明，枯草芽抱桿菌可以顯著小鼠外周血和脾臟中的 CD3+ CD4+和 CD3+ CD8+T 淋巴細(xì)胞百分比，CCD4+/CD3+ CD8+比值也顯著高于空白對(duì)照組，這表明肽聚糖可明顯促進(jìn)淋巴細(xì)殖，從而提高淋巴細(xì)胞免疫活性，使機(jī)體細(xì)胞免疫能力提高，改善機(jī)體的免疫防態(tài)盛琴[68]。納豆芽孢桿菌胞壁肽聚糖的提取分離、結(jié)構(gòu)表征及其免疫活性研究
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本文編號(hào)：2884905