發(fā)布時(shí)間：2020-12-05 05:28

　　GATA4是鋅指轉(zhuǎn)錄因子GATA結(jié)合蛋白家族的成員之一。GATA4最初作為心臟發(fā)育的調(diào)節(jié)因子被發(fā)現(xiàn),隨后研究發(fā)現(xiàn)GATA4參與調(diào)節(jié)動(dòng)物體內(nèi)各種基因的表達(dá)。GATA4除了調(diào)節(jié)心臟發(fā)育和轉(zhuǎn)錄也參與其它生物過程,其中包括癌細(xì)胞增殖。本實(shí)驗(yàn)室早期研究發(fā)現(xiàn),細(xì)絲蛋白A（FLNA）對RNA聚合酶I（Pol I）和RNA聚合酶III（Pol III）基因轉(zhuǎn)錄有福調(diào)控作用,敲低FLNA促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖。最近的mRNA-seq分析表明,FLNA敲低增加SaOS2細(xì)胞中GATA4的表達(dá);提示GATA4可能參與調(diào)節(jié)Pol I和Pol III指導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)錄。為證明這一推測,我們制備了GATA4 shRNA瞬時(shí)表達(dá)細(xì)胞和穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系,采用RT-qPCR和Western Blot的方法探究FLNA對敲低細(xì)胞系中Pol I和Pol III的基因表達(dá)和細(xì)胞增殖的影響。結(jié)果表明,GATA4敲低抑制Pol I和Pol III基因轉(zhuǎn)錄和細(xì)胞增殖。進(jìn)一步對GATA4調(diào)節(jié)Pol I和Pol III基因轉(zhuǎn)錄機(jī)制分析表明,GATA4敲低抑制Pol I特異性轉(zhuǎn)錄因子RRN3和UBF1的表達(dá)以及Pol III特異性轉(zhuǎn)錄因子BRF1和... 

【文章來源】：武漢科技大學(xué)湖北省

【文章頁數(shù)】：56 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 引言
    1.1 研究意義
    1.2 研究現(xiàn)狀
        1.2.1 細(xì)絲蛋白（filamins）
        1.2.2 FLNA生物功能
        1.2.3 GATA家族
        1.2.4 GATA4 與發(fā)育和疾病發(fā)生
        1.2.5 GATA4與癌癥
        1.2.6 RNA聚合酶Ⅲ基因轉(zhuǎn)錄與癌癥
    1.3 本課題產(chǎn)生的依據(jù)和研究目標(biāo)
第2章 實(shí)驗(yàn)材料與方法
    2.1 主要材料和儀器
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)所需的細(xì)胞和質(zhì)粒
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)耗材
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.1.4 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.1.5 相關(guān)試劑溶液的配制
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 基因克隆
        2.2.2 細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞瞬時(shí)轉(zhuǎn)染及穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系的建立
        2.2.3 實(shí)時(shí)熒光定量PCR（RT-qPCR）
        2.2.4 Western Blot
        2.2.5 熒光素酶測定
    2.3 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處理
第3章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.1 FLNA敲低后增強(qiáng)GATA4 的表達(dá)
    3.2 GATA4 shRNA 瞬時(shí)表達(dá)降低部分 Pol Ⅰ 和 Pol Ⅲ基因轉(zhuǎn)錄
    3.3 GATA4 shRNA穩(wěn)定細(xì)胞系的建立
    3.4 GATA4 shRNA穩(wěn)定表達(dá)降低部分Pol Ⅰ和 Pol Ⅲ轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的表達(dá)
    3.5 GATA4 shRNA穩(wěn)定表達(dá)抑制細(xì)胞增殖
    3.6 GATA4 敲低減少RRN3和UBF1 的表達(dá)
    3.7 GATA4 敲低減少BRF1和TFIIIC2 的表達(dá)
    3.8 BRF1和TFⅢC2 啟動(dòng)子活性檢測
    3.9 SP1 敲低影響GATA4 表達(dá)、GATA4 影響SP1 表達(dá)
第4章 結(jié)論與展望
致謝
參考文獻(xiàn)
附錄1 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文
附錄2 攻讀碩士學(xué)位期間參加的科研項(xiàng)目



本文編號：2898963