發(fā)布時(shí)間：2024-06-01 17:16

　　論文主要研究了兩個(gè)方面的內(nèi)容。一是對(duì)人白細(xì)胞介素2基因序列進(jìn)行了改造和優(yōu)化。首先將人白細(xì)胞介素2基因編碼序列(CDS)改造成大腸桿菌的高表達(dá)模式,選用了大腸桿菌高表達(dá)基因的核糖體結(jié)合位點(diǎn)(Shine-Dalgarno sequence,簡(jiǎn)稱SD)序列,作為對(duì)比還選用了大腸桿菌低表達(dá)基因的SD序列。然后組裝成“高表達(dá)SD+改造后CDS”和“高表達(dá)SD+改造前CDS”基因?qū)φ战M;“高表達(dá)SD+改造后CDS”和“低表達(dá)SD+改造后CDS”基因?qū)φ战M。前者主要考察改造CDS對(duì)基因表達(dá)的影響,后者主要檢驗(yàn)SD序列的優(yōu)化選擇對(duì)基因表達(dá)的影響。二是將組裝的兩組基因序列在大腸桿菌TOP10中克隆及表達(dá),通過(guò)實(shí)驗(yàn)來(lái)驗(yàn)證改造和優(yōu)化后人白細(xì)胞介素2基因(hIL-2)表達(dá)水平的理論預(yù)測(cè)。理論推測(cè)改造后的hIL-2基因編碼序列在大腸桿菌中的表達(dá)水平為CAI=0.884,原h(huán)IL-2基因編碼序列在大腸桿菌中的表達(dá)水平為CAI=0.267。為了保證編碼基因表達(dá)的正常啟動(dòng),選取大腸桿菌rplL高表達(dá)基因的啟動(dòng)子區(qū)和終止子區(qū)來(lái)代替hIL-2基因的啟動(dòng)子區(qū)和終止子區(qū)。其中高表達(dá)SD序列選用該基因的SD序列,低表達(dá)SD序列...

【文章頁(yè)數(shù)】：63 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖2.1大腸桿菌高表達(dá)基因密碼子間第三位點(diǎn)堿基關(guān)聯(lián)強(qiáng)度分布

.1大腸桿菌高表達(dá)基因密碼子間第三位點(diǎn)堿基關(guān)聯(lián)強(qiáng)度分布�？v坐標(biāo)表示堿基對(duì)的關(guān)聯(lián)強(qiáng)度，橫16種堿基對(duì)。2.1Basecorrelationintensitydistributionsofthethirdsitebetweentheadjacentcod....

圖2.2兩組mRNA實(shí)驗(yàn)對(duì)照?qǐng)D

內(nèi)蒙古大學(xué)碩士學(xué)位論文2.4完整mRNA序列的構(gòu)建2.3給出的編碼序列和表2.4給出的啟動(dòng)子序列以及終止子序列，構(gòu)：“高表達(dá)SD+改造前CDS”，命名為WILmRNA；“高表達(dá)SD+RNA；“低表達(dá)SD+改造后CDS”，命名為L(zhǎng)SDmRNA以及“高....

圖3.1重組克隆載體pGM-T/hIL-2的構(gòu)建圖

圖3.1重組克隆載體pGM-T/hIL-2的構(gòu)建圖Fig.3.1ConstructionofrecombinantcloningvectorpGM-T/hIL-2IL的PCR產(chǎn)物經(jīng)過(guò)電泳檢測(cè)，對(duì)長(zhǎng)度正確的片段進(jìn)行膠回收，據(jù)濃度的大小與適量克隆載體pGM....

圖3.2WIL的克隆轉(zhuǎn)化

圖3.2WIL的克隆轉(zhuǎn)化圖3.3GIL的克隆轉(zhuǎn)化Fig.3.2CloningtransformationofWILFig.3.3CloningtransformationofGIL.3.3陽(yáng)性重組質(zhì)粒初步檢測(cè)挑取白色菌落直接進(jìn)行PCR檢測(cè)，將....

本文編號(hào)：3986217