發(fā)布時(shí)間：2025-01-13 22:46

　　脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）和附屬結(jié)構(gòu)是革蘭氏陰性菌的膜壁結(jié)構(gòu)組成部分,這些非必需結(jié)構(gòu)消耗了大量的原料和能量。本課題以大腸桿菌（Escherichia coli K-12）和惡臭假單胞菌（Pseudomonas putida KT2442）為出發(fā)菌,建立了適用于基因組精簡(jiǎn)的敲除系統(tǒng),構(gòu)建了一系列膜壁結(jié)構(gòu)精簡(jiǎn)菌株,解析了膜壁結(jié)構(gòu)關(guān)鍵分子對(duì)細(xì)菌細(xì)胞全局影響機(jī)制,并利用一些精簡(jiǎn)菌株作為宿主生產(chǎn)可降解生物塑料聚羥基脂肪酸酯（PHA）。本論文主要研究結(jié)論如下:（1）通過刪除LPS合成關(guān)鍵基因rfaD構(gòu)建了大腸桿菌LPS結(jié)構(gòu)精簡(jiǎn)菌株,合成最簡(jiǎn)LPS結(jié)構(gòu),即Kdo₂-lipid A,并通過基因工程改造提高Kdo₂-lipid A合成量。在大腸桿菌K-12菌中,通過敲除核心糖中L-D-庚糖合成關(guān)鍵基因rfaD,獲得LPS分子結(jié)構(gòu)精簡(jiǎn)菌株WJW00。通過SDS-PAGE銀染,薄板層析,和電噴霧電離質(zhì)譜鑒定其LPS結(jié)構(gòu)為Kdo₂-lipid A。WJW00合成1.31μM（2.94μg/mL）的Kdo₂

【文章頁數(shù)】：175 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

圖1-2大腸桿菌K-12中Kdo2-lipidA結(jié)構(gòu)及合成[11,12]

圖1-2大腸桿菌K-12中Kdo2-lipidA結(jié)構(gòu)及合成[11,12]Fig.1-2StructureandbiosynthesisofKdo2-lipidAinE.coliK-12[11,12]1.1.3多糖鏈分子的合成途徑及其功能L....

圖1-6基于多種重組系統(tǒng)復(fù)合的微生物基因組精簡(jiǎn)策略[69]

第一章緒論微生物基因組中不保守的必需基因往往與細(xì)胞獨(dú)特的結(jié)構(gòu)和功能有關(guān)。革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌的主要區(qū)別在于細(xì)胞膜壁結(jié)構(gòu)和組成成分，二者基因組中與膜壁相關(guān)的必需基因也存在較大差異[87]。微生物必需基因的保守性與其所編碼蛋白在細(xì)胞中的作用密切相關(guān)。多數(shù)微生物的必需基因所編碼....

圖1-8PHA的生物合成途徑Fig.1-8Polyhydroxyalkanoate(PHA)synthesispathway.

圖1-8PHA的生物合成途徑Fig.1-8Polyhydroxyalkanoate(PHA)synthesispathway.2聚羥基脂肪酸酯的代謝改造研究進(jìn)展在大腸桿菌中表達(dá)phbCAB三個(gè)基因即可合成聚3-羥基丁酸酯（xybutyrate,PHB）。....

圖2-6ptsO基因敲除和lpxC、msbA表達(dá)的凝膠電泳驗(yàn)證圖

圖2-5重組質(zhì)粒pWSK29-lpxC（b）、pWSK29-lpxC（c）和pWSK29-lpxC-msbA（d）的質(zhì)粒圖譜Fig.2-5ThemapsofpWSK29-lpxC(b),pWSK29-lpxC(c)andpWSK29-lpxC-msbA(d....

本文編號(hào)：4026009