發(fā)布時間：2025-01-13 23:19

　　 AtPAP2基因是擬南芥花青素生物合成途徑中的重要調控基因,為了實現(xiàn)該基因在煙草中的高效表達,從擬南芥中分離克隆出了AtPAP2基因并構建了植物表達載體,利用農桿菌介導的侵染方法,將該基因成功轉入到煙草受體材料中,并獲得了紫色的轉基因煙草植株,相對于野生型煙草,該煙草在根、莖、葉等組織上均表現(xiàn)出不同程度的紫色。進一步的qRT-PCR分析結果表明,在花青素生物合成途徑中,AtPAP2基因的表達可以上調從4-香豆酰CoA到最終合成花青素過程中的相關基因,促進了合成反應的進行,對花青素的合成具有重要的作用。該研究對于揭示AtPAP2基因的作用以及煙草花青素合成途徑相關基因的調節(jié)機理具有重要的意義。

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【部分圖文】：

圖1 花青素生物合成途徑

利用RNA提取試劑盒從擬南芥的葉片中提取總RNA(圖2A),以表1中pPAP2-F和pPAP2-R為特異性引物,擬南芥總RNA反轉錄獲得的cDNA為模板,通過PCR擴增獲得了AtPAP2基因,1%瓊脂糖凝膠電泳檢測結果顯示,獲得的目的基因條帶約為750bp,與預期AtPAP2基....

圖2 擬南芥葉片總RNA提取和AtPAP2基因克隆

圖1花青素生物合成途徑2.2植物表達載體的構建及其轉化至農桿菌

圖3 植物表達載體pGNP-PAP2的構建圖譜

根據圖3所示的植物表達載體圖譜進行載體構建。先提取pMD18T-PAP2菌液的質粒DNA,與植物表達載體pGNP的質粒DNA同時用限制性內切酶BstXI和KpnI進行酶切,用0.8%瓊脂糖凝膠電泳檢測并分別切膠純化回收AtPAP2目的片段和pGNP載體的大片段(圖4)。利用T4....

圖4 載體pMD18-AtPAP2雙酶切產物

作為植物類黃酮合成途徑的一個分支途徑,花青素的生物合成已經在模式植物中進行了較多研究。研究結果表明花青素合成的前體物質是苯丙氨酸,在一系列基因的調控下,苯丙氨酸經過一系列酶促反應最終形成花青素。為了研究擬南芥AtPAP2基因在煙草植株中的表達情況,該研究提取了轉基因煙草葉片的總R....

本文編號：4026048