豬早期胚胎發(fā)育及滋養(yǎng)層和內(nèi)細胞團分化機理的相關(guān)研究
發(fā)布時間：2024-04-25 00:29
哺乳動物第一次胚層分化發(fā)生在囊胚腔形成過程中。囊胚形成前,胚胎由一個全能的受精卵分裂形成多個發(fā)育潛力幾乎相同的卵裂球。隨后胚胎的形態(tài)會發(fā)生顯著改變,形成一個空腔,同時卵裂球也會分化形成外層的滋養(yǎng)層細胞(Trophectoderm,TE)和內(nèi)部的內(nèi)細胞團細胞(Inner cell mass,ICM)。這兩種細胞進一步的發(fā)育走向不同,滋養(yǎng)層會成為胎盤部分,而內(nèi)細胞團成為胎體和少部分胎盤組織。盡管小鼠中TE與ICM分化的進程和分子機理已經(jīng)得到清晰的闡述,但在其他哺乳動物中卻知之甚少。最近一些研究結(jié)果表明,豬中TE與ICM分化的相關(guān)事件與小鼠中存在差異,這說明小鼠TE與ICM的分化模式并不能代表所有哺乳動物。在小鼠中TE與ICM的分化依賴于轉(zhuǎn)錄因子CDX2與OCT4的相互抑制作用。CDX2最初在小鼠桑椹胚部分卵裂求中開始表達,并逐漸在部分外部細胞中富集,最終在囊胚TE中特異性表達。與此相反,OCT4在所有小鼠早期所有卵裂球中均表達,直至囊胚期,OCT4逐漸向ICM中富集,并最終在ICM中特異性表達。在TE細胞中,OCT4直接受到CDX2轉(zhuǎn)錄水平的抑制,而ICM中由于沒有CDX2的表達,OCT4...
【文章頁數(shù)】：64 頁
【學位級別】：博士
【文章目錄】：
摘要
英文摘要
1 前言
1.1 哺乳動物早期胚胎發(fā)育概述
1.1.1 小鼠早期胚胎發(fā)育進程的概述
1.1.2 小鼠著床前胚胎發(fā)育滋養(yǎng)層與內(nèi)細胞團分化概述
1.2 小鼠著床前胚胎發(fā)育滋養(yǎng)層與內(nèi)細胞團分化機理
1.2.1 小鼠胚胎滋養(yǎng)層與內(nèi)細胞團分化的重要轉(zhuǎn)錄因子
1.2.2 ROCK和Hippo通路對小鼠滋養(yǎng)層和內(nèi)細胞團分化的調(diào)控
1.3 豬早期胚胎發(fā)育滋養(yǎng)層與內(nèi)細胞團分化研究現(xiàn)狀
1.3.1 豬滋養(yǎng)層與內(nèi)細胞團分化的研究現(xiàn)狀
1.3.2 豬胚胎體外基礎(chǔ)培養(yǎng)體系的概況
2 材料與方法
2.1 實驗材料
2.1.1 組織材料
2.1.2 主要試劑
2.1.3 主要儀器
2.1.4 試劑的配制
2.2 實驗方法
2.2.1 豬體外各時期卵母細胞/胚胎的獲取
2.2.2 豬各時期體內(nèi)胚胎的獲取
2.2.3 小鼠體內(nèi)各時期卵母細胞/胚胎的獲取
2.2.4 免疫熒光
2.2.5 蛋白質(zhì)免疫印記雜交
2.2.6 胚胎體外培養(yǎng)、處理及檢測
2.2.7 免疫共沉淀
2.2.8 豬胚胎RNA的提取
2.2.9 豬CDX2和OCT4編碼區(qū)克隆
2.2.10實驗數(shù)據(jù)分析
2.2.11實驗所用引物和抗體匯總
3 結(jié)果與分析
3.1 豬胚層分化標記因子的篩選及其表達模式的追蹤
3.1.1 滋養(yǎng)層標記因子CDX2在豬早期胚胎中表達模式的追蹤
3.1.2 SOX2在豬囊胚內(nèi)細胞團中特異性表達
3.1.3 SOX2與CDX2在豬內(nèi)細胞團和滋養(yǎng)層細胞中顯示出相互排斥的表達模式
3.1.4 SOX2特異性表達模式的建立過程與豬滋養(yǎng)層和內(nèi)細胞團特化過程同時發(fā)生
3.1.5 譜系分化相關(guān)因子在豬體內(nèi)胚胎中的時空分布
3.2 利用CDX2和SOX2作為胚層標記評價胎牛血清對豬早期胚胎發(fā)育培養(yǎng)體系的影響
3.2.1 FBS提高豬體外胚胎孵化率和囊胚細胞數(shù)
3.2.2 FBS促進ICM增殖和進一步分化
3.3 豬著床前胚胎極性建立的延遲導致CDX2起始表達晚于小鼠
3.3.1 CDX2在豬早期胚胎起始表達晚于小鼠
3.3.2 ROCK-YAP信號通路調(diào)控CDX2的表達
3.3.3 豬早期胚胎細胞極化發(fā)生晚于小鼠
3.4 CDX2和OCT4在豬早期胚胎中的相互作用——在豬早期胚胎中過表達CDX2的研究
3.4.1 CDX2的過表達會導致豬胚胎發(fā)育阻滯
3.4.2 CDX2過表導致胚胎發(fā)育阻滯是由于OCT4蛋白的缺失
3.4.3 在豬早期胚胎中CDX2在翻譯后水平上抑制OCT4
3.4.4 早期胚胎中CDX2促進OCT4定位從細胞核向胞質(zhì)轉(zhuǎn)變
3.4.5 CDX2可能通過競爭機制抑制了OCT4對DNA的可觸性
4 討論
4.1 豬早期胚層分化分子基礎(chǔ)與小鼠中不同
4.2 SOX2在豬和小鼠多潛能網(wǎng)絡調(diào)控研究中的意義
4.3 關(guān)于FBS對于豬體外胚胎發(fā)育胚層分化影響的討論
5 結(jié)論
致謝
參考文獻
攻讀博士學位期間發(fā)表的學術(shù)論文
本文編號：3963731
【文章頁數(shù)】：64 頁
【學位級別】：博士
【文章目錄】：
摘要
英文摘要
1 前言
1.1 哺乳動物早期胚胎發(fā)育概述
1.1.1 小鼠早期胚胎發(fā)育進程的概述
1.1.2 小鼠著床前胚胎發(fā)育滋養(yǎng)層與內(nèi)細胞團分化概述
1.2 小鼠著床前胚胎發(fā)育滋養(yǎng)層與內(nèi)細胞團分化機理
1.2.1 小鼠胚胎滋養(yǎng)層與內(nèi)細胞團分化的重要轉(zhuǎn)錄因子
1.2.2 ROCK和Hippo通路對小鼠滋養(yǎng)層和內(nèi)細胞團分化的調(diào)控
1.3 豬早期胚胎發(fā)育滋養(yǎng)層與內(nèi)細胞團分化研究現(xiàn)狀
1.3.1 豬滋養(yǎng)層與內(nèi)細胞團分化的研究現(xiàn)狀
1.3.2 豬胚胎體外基礎(chǔ)培養(yǎng)體系的概況
2 材料與方法
2.1 實驗材料
2.1.1 組織材料
2.1.2 主要試劑
2.1.3 主要儀器
2.1.4 試劑的配制
2.2 實驗方法
2.2.1 豬體外各時期卵母細胞/胚胎的獲取
2.2.2 豬各時期體內(nèi)胚胎的獲取
2.2.3 小鼠體內(nèi)各時期卵母細胞/胚胎的獲取
2.2.4 免疫熒光
2.2.5 蛋白質(zhì)免疫印記雜交
2.2.6 胚胎體外培養(yǎng)、處理及檢測
2.2.7 免疫共沉淀
2.2.8 豬胚胎RNA的提取
2.2.9 豬CDX2和OCT4編碼區(qū)克隆
2.2.10實驗數(shù)據(jù)分析
2.2.11實驗所用引物和抗體匯總
3 結(jié)果與分析
3.1 豬胚層分化標記因子的篩選及其表達模式的追蹤
3.1.1 滋養(yǎng)層標記因子CDX2在豬早期胚胎中表達模式的追蹤
3.1.2 SOX2在豬囊胚內(nèi)細胞團中特異性表達
3.1.3 SOX2與CDX2在豬內(nèi)細胞團和滋養(yǎng)層細胞中顯示出相互排斥的表達模式
3.1.4 SOX2特異性表達模式的建立過程與豬滋養(yǎng)層和內(nèi)細胞團特化過程同時發(fā)生
3.1.5 譜系分化相關(guān)因子在豬體內(nèi)胚胎中的時空分布
3.2 利用CDX2和SOX2作為胚層標記評價胎牛血清對豬早期胚胎發(fā)育培養(yǎng)體系的影響
3.2.1 FBS提高豬體外胚胎孵化率和囊胚細胞數(shù)
3.2.2 FBS促進ICM增殖和進一步分化
3.3 豬著床前胚胎極性建立的延遲導致CDX2起始表達晚于小鼠
3.3.1 CDX2在豬早期胚胎起始表達晚于小鼠
3.3.2 ROCK-YAP信號通路調(diào)控CDX2的表達
3.3.3 豬早期胚胎細胞極化發(fā)生晚于小鼠
3.4 CDX2和OCT4在豬早期胚胎中的相互作用——在豬早期胚胎中過表達CDX2的研究
3.4.1 CDX2的過表達會導致豬胚胎發(fā)育阻滯
3.4.2 CDX2過表導致胚胎發(fā)育阻滯是由于OCT4蛋白的缺失
3.4.3 在豬早期胚胎中CDX2在翻譯后水平上抑制OCT4
3.4.4 早期胚胎中CDX2促進OCT4定位從細胞核向胞質(zhì)轉(zhuǎn)變
3.4.5 CDX2可能通過競爭機制抑制了OCT4對DNA的可觸性
4 討論
4.1 豬早期胚層分化分子基礎(chǔ)與小鼠中不同
4.2 SOX2在豬和小鼠多潛能網(wǎng)絡調(diào)控研究中的意義
4.3 關(guān)于FBS對于豬體外胚胎發(fā)育胚層分化影響的討論
5 結(jié)論
致謝
參考文獻
攻讀博士學位期間發(fā)表的學術(shù)論文
本文編號：3963731
本文鏈接：http://www.wukwdryxk.cn/shoufeilunwen/jckxbs/3963731.html
最近更新
教材專著
