發(fā)布時(shí)間：2024-04-25 00:29

　　哺乳動(dòng)物第一次胚層分化發(fā)生在囊胚腔形成過(guò)程中。囊胚形成前,胚胎由一個(gè)全能的受精卵分裂形成多個(gè)發(fā)育潛力幾乎相同的卵裂球。隨后胚胎的形態(tài)會(huì)發(fā)生顯著改變,形成一個(gè)空腔,同時(shí)卵裂球也會(huì)分化形成外層的滋養(yǎng)層細(xì)胞(Trophectoderm,TE)和內(nèi)部的內(nèi)細(xì)胞團(tuán)細(xì)胞(Inner cell mass,ICM)。這兩種細(xì)胞進(jìn)一步的發(fā)育走向不同,滋養(yǎng)層會(huì)成為胎盤(pán)部分,而內(nèi)細(xì)胞團(tuán)成為胎體和少部分胎盤(pán)組織。盡管小鼠中TE與ICM分化的進(jìn)程和分子機(jī)理已經(jīng)得到清晰的闡述,但在其他哺乳動(dòng)物中卻知之甚少。最近一些研究結(jié)果表明,豬中TE與ICM分化的相關(guān)事件與小鼠中存在差異,這說(shuō)明小鼠TE與ICM的分化模式并不能代表所有哺乳動(dòng)物。在小鼠中TE與ICM的分化依賴(lài)于轉(zhuǎn)錄因子CDX2與OCT4的相互抑制作用。CDX2最初在小鼠桑椹胚部分卵裂求中開(kāi)始表達(dá),并逐漸在部分外部細(xì)胞中富集,最終在囊胚TE中特異性表達(dá)。與此相反,OCT4在所有小鼠早期所有卵裂球中均表達(dá),直至囊胚期,OCT4逐漸向ICM中富集,并最終在ICM中特異性表達(dá)。在TE細(xì)胞中,OCT4直接受到CDX2轉(zhuǎn)錄水平的抑制,而ICM中由于沒(méi)有CDX2的表達(dá),OCT4...

【文章頁(yè)數(shù)】：64 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
英文摘要
1 前言
    1.1 哺乳動(dòng)物早期胚胎發(fā)育概述
        1.1.1 小鼠早期胚胎發(fā)育進(jìn)程的概述
        1.1.2 小鼠著床前胚胎發(fā)育滋養(yǎng)層與內(nèi)細(xì)胞團(tuán)分化概述
    1.2 小鼠著床前胚胎發(fā)育滋養(yǎng)層與內(nèi)細(xì)胞團(tuán)分化機(jī)理
        1.2.1 小鼠胚胎滋養(yǎng)層與內(nèi)細(xì)胞團(tuán)分化的重要轉(zhuǎn)錄因子
        1.2.2 ROCK和Hippo通路對(duì)小鼠滋養(yǎng)層和內(nèi)細(xì)胞團(tuán)分化的調(diào)控
    1.3 豬早期胚胎發(fā)育滋養(yǎng)層與內(nèi)細(xì)胞團(tuán)分化研究現(xiàn)狀
        1.3.1 豬滋養(yǎng)層與內(nèi)細(xì)胞團(tuán)分化的研究現(xiàn)狀
        1.3.2 豬胚胎體外基礎(chǔ)培養(yǎng)體系的概況
2 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 組織材料
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 主要儀器
        2.1.4 試劑的配制
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 豬體外各時(shí)期卵母細(xì)胞/胚胎的獲取
        2.2.2 豬各時(shí)期體內(nèi)胚胎的獲取
        2.2.3 小鼠體內(nèi)各時(shí)期卵母細(xì)胞/胚胎的獲取
        2.2.4 免疫熒光
        2.2.5 蛋白質(zhì)免疫印記雜交
        2.2.6 胚胎體外培養(yǎng)、處理及檢測(cè)
        2.2.7 免疫共沉淀
        2.2.8 豬胚胎RNA的提取
        2.2.9 豬CDX2和OCT4編碼區(qū)克隆
        2.2.10實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分析
        2.2.11實(shí)驗(yàn)所用引物和抗體匯總
3 結(jié)果與分析
    3.1 豬胚層分化標(biāo)記因子的篩選及其表達(dá)模式的追蹤
        3.1.1 滋養(yǎng)層標(biāo)記因子CDX2在豬早期胚胎中表達(dá)模式的追蹤
        3.1.2 SOX2在豬囊胚內(nèi)細(xì)胞團(tuán)中特異性表達(dá)
        3.1.3 SOX2與CDX2在豬內(nèi)細(xì)胞團(tuán)和滋養(yǎng)層細(xì)胞中顯示出相互排斥的表達(dá)模式
        3.1.4 SOX2特異性表達(dá)模式的建立過(guò)程與豬滋養(yǎng)層和內(nèi)細(xì)胞團(tuán)特化過(guò)程同時(shí)發(fā)生
        3.1.5 譜系分化相關(guān)因子在豬體內(nèi)胚胎中的時(shí)空分布
    3.2 利用CDX2和SOX2作為胚層標(biāo)記評(píng)價(jià)胎牛血清對(duì)豬早期胚胎發(fā)育培養(yǎng)體系的影響
        3.2.1 FBS提高豬體外胚胎孵化率和囊胚細(xì)胞數(shù)
        3.2.2 FBS促進(jìn)ICM增殖和進(jìn)一步分化
    3.3 豬著床前胚胎極性建立的延遲導(dǎo)致CDX2起始表達(dá)晚于小鼠
        3.3.1 CDX2在豬早期胚胎起始表達(dá)晚于小鼠
        3.3.2 ROCK-YAP信號(hào)通路調(diào)控CDX2的表達(dá)
        3.3.3 豬早期胚胎細(xì)胞極化發(fā)生晚于小鼠
    3.4 CDX2和OCT4在豬早期胚胎中的相互作用——在豬早期胚胎中過(guò)表達(dá)CDX2的研究
        3.4.1 CDX2的過(guò)表達(dá)會(huì)導(dǎo)致豬胚胎發(fā)育阻滯
        3.4.2 CDX2過(guò)表導(dǎo)致胚胎發(fā)育阻滯是由于OCT4蛋白的缺失
        3.4.3 在豬早期胚胎中CDX2在翻譯后水平上抑制OCT4
        3.4.4 早期胚胎中CDX2促進(jìn)OCT4定位從細(xì)胞核向胞質(zhì)轉(zhuǎn)變
        3.4.5 CDX2可能通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)機(jī)制抑制了OCT4對(duì)DNA的可觸性
4 討論
    4.1 豬早期胚層分化分子基礎(chǔ)與小鼠中不同
    4.2 SOX2在豬和小鼠多潛能網(wǎng)絡(luò)調(diào)控研究中的意義
    4.3 關(guān)于FBS對(duì)于豬體外胚胎發(fā)育胚層分化影響的討論
5 結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)
攻讀博士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文



本文編號(hào)：3963731