發(fā)布時間：2018-01-16 03:25

  本文關(guān)鍵詞：新型小分子化合物WJ460抑制黑色素瘤增殖與遷移及其分子機制研究　出處：《華東師范大學》2017年碩士論文　論文類型：學位論文

  更多相關(guān)文章： 黑素色瘤 WJ460 EMT MAPK信號通路 Wnt信號通路

【摘要】：黑色素瘤是一種惡性皮膚腫瘤,是由黑色素細胞過度增殖引起的,由于其極高的轉(zhuǎn)移性和增殖能力,黑色素瘤的治愈率極低。在皮膚癌所有的死亡的病例中,黑色素瘤的死亡病例占所有的皮膚癌死亡總數(shù)的80%。近年來由于環(huán)境惡化以及其他因素的影響,黑色素瘤在世界范圍內(nèi)的發(fā)病率和死亡率都在持續(xù)增加。黑色素瘤的高轉(zhuǎn)移性是治療黑色素瘤最大的障礙,因此尋找能夠抑制黑色素瘤轉(zhuǎn)移和增殖的藥物是當前黑色素瘤研究的重點所在。本實驗室其他課題組的研究發(fā)現(xiàn)含有2,3-二芳香基噻唑啉酮結(jié)構(gòu)的化合物會具有較好的抗腫瘤細胞遷移和侵襲的作用,進而以該結(jié)構(gòu)為基礎(chǔ),設(shè)計并合成了一系列靶向抑制腫瘤細胞遷移的小分子化合物。我們利用黑素瘤細胞B16F10進行體外劃痕實驗,對得到的化合物進行篩選,最終確定了對黑色素瘤遷移抑制效果最好、最穩(wěn)定的小分子化合物WJ460。在體外的細胞實驗中,我們通過劃痕愈合實驗、trans-well侵襲實驗驗證了WJ460確實可以濃度依賴性抑制黑色素瘤細胞遷移,并且通過熒光染色發(fā)現(xiàn)WJ460可以改變黑色素瘤細胞的形態(tài)。在體內(nèi)動物實驗中,我們通過尾靜脈注射黑色素瘤細胞B16F10建立了腫瘤肺轉(zhuǎn)移模型,之后通過腹腔注射WJ460進行治療,實驗結(jié)果證明WJ460能夠有效抑制黑色素瘤的肺轉(zhuǎn)移。而后我們進一步探究該化合物作用的分子機制,實驗結(jié)果表明,WJ460可以有效抑制與細胞轉(zhuǎn)移和上皮細胞間質(zhì)轉(zhuǎn)化(Epithelial-Mesenchymal Transition,EMT)相關(guān)的分子在轉(zhuǎn)錄和蛋白水平的表達,包括N-cadherin,E-cadherin,基質(zhì)金屬蛋白酶MMP-9,Vimentin,Slug,Twist 等。此外,我們發(fā)現(xiàn) WJ460 可以有效抑制 ERK1/2,MEK1/2,GSK-3β的磷酸化以及β-catenin的表達,從而抑制了 MAPK和Wnt/β-catenin兩條信號通路的活性,并可能是通過這兩條信號通路抑制了 EMT相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子的表達。而且我們通過用EGF和Wnt3a作為激活劑,驗證了 WJ460的確能夠抑制這兩條信號通路起到抗腫瘤的作用。在驗證過程中我們發(fā)現(xiàn)這兩條信號通路之間有相互作用,通過EGF刺激不僅促進了 ERK1/2的磷酸化,也可以使β-catenin的表達上升;而同時用EGF和WJ460處理細胞發(fā)現(xiàn),WJ460可以阻斷由于EGF介導引起的β-catenin的增加。另外,Wnt3a刺激不僅能促進β-catenin的表達,也可以激活ERK1/2的磷酸化,而再加入WJ460后,可以抑制β-catenin和P-ERK1/2的表達,這說明WJ460可能通過抑制MAPK和Wnt信號通路的表達,從而抑制黑色素瘤的轉(zhuǎn)移。綜上所述,我們的研究證明新型小分子化合物WJ460具有良好的抗黑色素瘤轉(zhuǎn)移和增殖的效果,能夠在細胞和動物水平抑制黑色素瘤細胞遷移和侵襲,并且能夠抑制腫瘤細胞的EMT相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子的表達。此外,本論文證明化合物WJ460可能通過抑制黑色素瘤細胞內(nèi)的MAPK和Wnt信號通路發(fā)揮抗腫瘤的作用。本研究不僅為WJ460治療黑色素瘤提供了實驗依據(jù),研究結(jié)果還表明新型小分子化合物WJ460作為治療黑色素瘤的備選化合物將具有很好的臨床應用前景。
[Abstract]:Melanoma is a malignant tumor of the skin, caused by excessive proliferation of melanoma cells, because of its high metastasis and proliferation of melanoma, the cure rate is very low. In all skin cancer deaths, melanoma deaths accounted for all skin cancer deaths 80%. in recent years due to the deterioration of the environment and other factors, the melanoma incidence and mortality in the world is on the rise. High metastatic melanoma, melanoma is the biggest obstacle to treatment, thus finding drugs can inhibit the transfer and proliferation of melanoma is the focus of melanoma research where the other. Laboratory research group found that compounds containing 2,3- two aromatic thiazolinone structure will have good resistance to the invasion and migration of tumor cells, and then based on the structure, design and A series of small molecules to inhibit tumor cell migration target synthesis. We use B16F10 melanoma cells in vitro scratch test, the compounds have been screened, and ultimately determine the best inhibitory effect on the migration of melanoma, the most stable small molecule WJ460. in in vitro in our healing through scratches. Trans-well invasion experiment proved that WJ460 can concentration dependent inhibition of melanoma cell migration, and by fluorescence staining indicated that WJ460 can change the morphology of melanoma cells. In vivo animal experiments, we injected through the tail vein of melanoma cells B16F10 tumor metastasis model was established by intraperitoneal injection, after WJ460 treatment. The experimental results show that WJ460 can effectively inhibit the lung metastasis of melanoma. Then we further explore the compound effect. Sub mechanism, the experimental results show that WJ460 can effectively inhibit the metastasis and cell and epithelial mesenchymal transition (Epithelial-Mesenchymal Transition, EMT) expression of related molecules in transcription and protein levels including N-cadherin, E-cadherin, matrix metalloproteinase MMP-9, Vimentin, Slug, Twist and so on. In addition, we found that WJ460 can effectively inhibit ERK1/2. MEK1/2, GSK-3 beta phosphorylation and -catenin expression, thus inhibiting MAPK and Wnt/ beta -catenin two pathway, and may be through the two signal pathway inhibited the expression of EMT related transcription factors. And we through using EGF and Wnt3a as activator, WJ460 can inhibit this verification two signal pathways play a role in anti-tumor. In the process of verification, we found that the interactions between these two signaling pathways by EGF stimulation not only promote ERK1/2 Phosphorylation, also can make the expression of beta -catenin increased; while EGF and WJ460 cells showed that WJ460 could block due to increased EGF mediated by beta -catenin. In addition, the stimulation of Wnt3a can promote the expression of beta -catenin, can also activate the phosphorylation of ERK1/2, and then after joining WJ460, expression can inhibit the beta -catenin and P-ERK1/2, indicating that WJ460 may be through inhibiting expression of MAPK and Wnt signaling pathway, thereby inhibiting the metastasis of melanoma. In summary, our study demonstrated that a novel small molecule compound WJ460 has good anti melanoma metastasis and proliferation effect, can inhibit melanoma cell migration and invasion in cell and animal level, the expression of EMT related transcription factor and can inhibit tumor cell. In addition, this paper proves that compound WJ460 may inhibit melanoma cells in the MAPK and Wnt signals This pathway not only provides experimental evidence for the treatment of melanoma by WJ460, but also indicates that WJ460, a new small molecule compound, will have a good clinical application prospect as an alternative compound for melanoma.

【學位授予單位】：華東師范大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R739.5

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6 Helsing P.,Loeb M. ,馮義國;小直徑黑色素瘤:挪威黑色素瘤隨訪項目[J];世界核心醫(yī)學期刊文摘(皮膚病學分冊);2005年04期

7 Murray C.S.;Stockton D.L.;Doherty V.R. ;黨倩麗;;增厚的黑色素瘤:長久面對的挑戰(zhàn)[J];世界核心醫(yī)學期刊文摘(皮膚病學分冊);2005年08期

8 High W.A. ,Quirey R.A. ,Guillén D.R ,R.S. Taylor,劉超;7例甲單元原位黑色素瘤的臨床表現(xiàn)、組織病理和臨床預后[J];世界核心醫(yī)學期刊文摘(皮膚病學分冊);2005年02期

9 Curtin J.A.;Fridlyand J.;Kageshita T. ;B.C. Bastian;黨倩麗;;黑色素瘤不同位置的基因改變[J];世界核心醫(yī)學期刊文摘(皮膚病學分冊);2006年02期

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1 王倫邋王晨;早期發(fā)現(xiàn)黑色素瘤可挽救生命[N];科技日報;2007年

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3 健康時報特約記者 管九蘋;澳大利亞免費普查黑色素瘤[N];健康時報;2010年

4 實習生 易立;黑色素瘤,是否無藥可治？[N];科技日報;2011年

5 記者 張e，

本文編號：1431353